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DNA测序仪的操作步骤

醋酸钠/乙醇法纯化pcr产物 (1) 将混合物离心,将扩增产物转移到1.5ml ep管中。 (2) 加入25μl醋酸钠/乙醇混合液,充分振荡,置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于4℃离心30 min,小心弃上清。 (3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12 000r/min于4℃离心5min,小心弃上清和管壁的液珠,真空干燥沉淀10~15min。 电泳前测序pcr产物的处理 (1) 加入12μl的tsr于离心管中,剧烈振荡,让其充分溶解dna沉淀,稍离心。 (2) 将溶液转移至盖体分离的0.2ml pcr管中,稍离心。 (3) 在pcr仪上进行热变性(95℃ 2min),冰中骤冷,待上机。......阅读全文

操作步骤/DNA测序仪

pcr测序反应(1) 取0.2ml的pcr管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂:所加试剂 测定模板管 标准对照管bigdye mix 1μl 1μl待测的质粒dna 1μl -pgem-3zf (+) 双链dna - 1μl待测dna的正向引物 1μl -m13(-21)引物 - 1μl

DNA测序仪的操作步骤

  醋酸钠/乙醇法纯化pcr产物  (1) 将混合物离心,将扩增产物转移到1.5ml ep管中。  (2) 加入25μl醋酸钠/乙醇混合液,充分振荡,置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于4℃离心30 min,小心弃上清。  (3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12

DNA测序仪的操作步骤

  pcr测序反应  (1) 取0.2ml的pcr管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂:  所加试剂 测定模板管 标准对照管  bigdye mix 1μl 1μl  待测的质粒dna 1μl -  pgem-3zf (+) 双链dna - 1μl  待测dna的正向引物 1μl -  

DNA测序方法--自动测序法的操作步骤

一、准备工作1. BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix,内含PEZL四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA polymerase FS,反应缓冲液等。2. pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板 0.2 g/L,试剂盒配套试剂。3. M13(-2

DNA测序的方法--自动测序法的操作步骤

一、准备工作1. BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix,内含PEZL四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA polymerase FS,反应缓冲液等。2. pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板 0.2 g/L,试剂盒配套试剂。3. M13(-2

DNA测序方法中自动测序法的操作步骤

基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛

DNA测序方法--鸟枪法的操作步骤

“鸟枪法”是一种由生物基因组提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超声波等)或酶化学方法(如限制性内切核酸酶)将生物细胞染色体DNA切割成为基因水平的许多片段,继而将这些片段与适当的载体结合,将重组DNA转入受体菌扩增,获得无性繁殖的基因文库,再结合筛选方法,从众多的转化子菌株中选出含有某

DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤-1

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最

DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤-2

【操作步骤】1.PCR测序反应(1) 取0.2ml的PCR管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂: 所加试剂测定模板管标准对照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待测的质粒DNA 1μl- pGEM-3Zf (+) 双链DNA-1μl 待测

DNA合成仪的操作步骤

  以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下:  1)仔细检查合成仪上所有试