PCR实验室最容易忽视的环节（二）
3.滤芯吸头测试吸头需使用经校准的移液器（1）准确性：将n个吸头分别吸取定量的纯水称重，重量与体积的关系按照1 g/mL换算。（2）气密性：取n个吸头，吸取最大量程的含有1％甘油的墨水，观察有色液体不出现在滤塞之上，液面相同为合格。（3）防气溶胶性能：取n个吸头，吸取阳性核酸，反复吹吸10次，换另一个新吸头在阴性纯水中反复吹吸10次，取阴性纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。（4）污染物质检：取n个吸头，吸取阴性纯水反复吹吸10次，取阴性纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。（5）抑制物质检：取n个吸头，吸取弱阳性质控物反复吹吸10次，然后进行提取;吸取RNA核酸和DNA核酸反复吹吸10次，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被抑制为合格。4.采血管、采样管、采样拭子和一次性吸管等主要考察污染物和抑制物（1）污染物质检：将n个耗材加入一定量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置30min，吸取纯水作为模板进行扩增，qP......阅读全文
选择传感器时，99％的人都容易忽略的重点（二）
4精度与孔径精度是选择传感器时非常重要的指标，可根据需求选择，不同的精度，价位也不同，同时需要注意的是，若测试导线较粗，需要考虑孔径大小是否合适，一般传感器规格表中都会有相应说明，建议选择孔径尽量贴合导线粗细，保证高精度测试。5交直流测试选择传感器时，需要注意传感器测试信号是交流，直流，还是交直流。
怎么防止PCR实验室污染
PCR实验室污染标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。PCR试剂的污染：主要是由于
PCR实验室如何避免污染？
PCR实验室污染 标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 P
最昂贵、最畅销…抗体药的11个“最”
1 、最昂贵 大名鼎鼎的衣库珠单抗，商品名Soliris，由亚力兄公司开发，用药成本为54万美元/人年。其次是双特异性抗体Blincyto和PD-L1单抗Bavencio，用药成本为18万美元/人年。此外，PD-1抗体Opdivo、Keytruda，PD-L1抗体Tecentriq，VEGFR
普通PCR、实时荧光定量PCR和数字PCR对比分析（二）
模板 DNA 量越多，荧光达到域值的循环数越少，即 Ct 值越小。Log 起始模板浓度与 Ct 呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，根据样品 Ct 值，就可以计算出样品中所含的模板量。目前常用荧光标记方法 方法 优点
PCR实验室的污染来源
1、样本间交叉污染：收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。2、实验试剂污染：主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照
PCR实验室污染的原因
污染原因：1）标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。2） PCR试剂的污染：主要是
实验室测定氨氮最简方法
最简方法： ①水样预处理：取250mL水样（如氨氮含量较高，可取适量并加水至250mL，使氨氮含量不超过2.5mg），移入凯氏烧瓶中，加数滴溴百里酚蓝指示液，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调至pH7左右。加入0.25g轻质氧化镁和数粒玻璃珠，立即连接氮球和冷凝管，导管下端插入吸收液液面下。加热蒸馏，至馏
实验室测定氨氮最简方法
最简方法： ①水样预处理：取250mL水样（如氨氮含量较高，可取适量并加水至250mL，使氨氮含量不超过2.5mg），移入凯氏烧瓶中，加数滴溴百里酚蓝指示液，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调至pH7左右。加入0.25g轻质氧化镁和数粒玻璃珠，立即连接氮球和冷凝管，导管下端插入吸收液液面下。加热蒸馏，至馏
PCR疑难问题解答第二篇：荧光定量PCR（二）
在qPCR 技术中重要的参数指标有哪些？ 扩增及溶解曲线：扩增曲线是PCR过程中，以循环数为横坐标，以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映qPCR的动态进程；溶解曲线是用来验证扩增产物特异性的，如果产物是单一条带，溶解曲线就会出现单峰，如果有引物二聚体或其它非特
激光测绘揭示二战最血腥战役的秘密
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目的基因的PCR克隆的原理（二）
此酶具有以下特点： （1）耐高温，在70℃下反应2小时后其残留活性在90%以上，在93℃下反应2小时后其残留活性是仍能保持60%，而在95℃ 下反应2小时后为原来的40%。 （2）在热变性时不会被钝化，故不必在扩增反应的每轮循环完成后再加新酶。 （3）一般扩增的PCR产物长度可达2.0
木耳中的二氧化硫含量不容忽视
吃点诸如黑木耳、香菇之类的菌藻食物有助于营养的均衡。但是黑木耳偶尔闻起来有股刺鼻发酸的味道。那这股刺鼻的酸味是这么回事呢？ 原来木耳中会用到二氧化硫，在食品行业，二氧化硫及其盐类因具有漂白、脱色、防腐、抗氧化等作用而被广泛使用。在木耳烘烤干制加工过程中，当用薰硫脱色或使用煤、油、柴为燃料时,产生
PCR常见问题总汇(二）
克隆PCR产物1)克隆PCR产物的最优条件是什么？最佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为最佳比，摩尔数比1：8或8：1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4oC过夜。在这2种温
PCR基本实验方法（二）
Recommended Reaction Conditions:Initial Conditions:Initial denaturation at start: 92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample on
BioTNT－PCR－Array实验操作（二）
三、数据导出后进行分析； 3.1 数据分析基本设置1. 确定基线基线是qPCR扩增前期的荧光本底信号，一般都由仪器自动设置。不同仪器类型，基线的设置也略有不同，往往在荧光信号指数扩增阶段的前几个循环处，一般将定量PCR的前15个循环信号作为荧光本底信号，如果实验数据中最低CT还小于基线的设置上
PCR基本实验方法（二）
Recommended Reaction Conditions:Initial Conditions:Initial denaturation at start: 92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample on
PCR反应体系和条件(二)
PCR反应条件的选择 PCR反应条件为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置： 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA
定量PCR常见问题(二)
8. 什么是背景校正？多长时间执行一次背景校正？ 背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60 °C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文
PCR常见问题汇总（二）
PCR反应体系与反应条件-------------------------------------------------------------------------------- 标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物 各200umol/L引物 各10～100p
不容忽视的实验室化学品暴露危害及防护
随着农业，石油，工业和运输等不同行业的经济发展导致了化学品使用的数量和频率增加。 虽然它为质量测试提供了好处，但同时对也健康构成了危害。 根据化学品暴露时间的长短，化学品可能会产生急性和慢性效应。化学品暴露的情况同样也会出现在家里，工作中，甚至是玩耍的时候。有些化学品最初可能并不具备危险性，一旦使用
别在实验室熬着了，“懒虫”更容易成功
当我们回顾历史上那些最富有创造力的生命时，会发现一条悖论：他们确实将一生奉献给了自己的事业，但并没有在整天不停地工作。 比如查尔斯•狄更斯（Charles Dickens）和亨利•庞加莱（Henri Poincaré），这些不同时期不同领域的人都对工作充满激情和成功的雄心壮志，几乎都抱有超
减少被忽视疾病研究风险的新项目
针对被忽视疾病的高风险研究——它们常常遇到第一个障碍就失败——可能因为一个新的项目而变得更安全。 罕见和被忽视疾病疗法(TRND)项目将支持临床前研究(即候选药物在细胞或动物身上进行测试的阶段)——这是药物研发最昂贵和风险最大的阶段，在这个阶段80%到90%的项目失败了。
不可忽视的HCT指标
如何定义HCT红细胞压积，hematocrit ，Hct，HCT，Ht 或 packed cell volume（PCV）将已加少量抗凝剂混匀的血液，装入特制的、具刻度的比容管，以每分钟3000转的速度离心半小时，可见血液各成分按重力不同而分层，上层淡黄色液体是血浆，下层不透明的暗红色血栓为红细胞，
不可忽视的HCT指标
如何定义HCT红细胞压积，hematocrit ，Hct，HCT，Ht 或 packed cell volume（PCV）将已加少量抗凝剂混匀的血液，装入特制的、具刻度的比容管，以每分钟3000转的速度离心半小时，可见血液各成分按重力不同而分层，上层淡黄色液体是血浆，下层不透明的暗红色血栓为红细胞，
PCR实验室平面布局
试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。 样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。 扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。 扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔。 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
如何建PCR实验室
为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出. 1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。2）组织培养物、组织标本和血清样品都带
PCR实验室平面布局
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域： 试剂贮存和准备区、 标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免 交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品
PCR实验室建设原则
1-随机原理即利用“随机数表”实现随机化，就是利用计算机产生的：“伪随机数”来实现的。尽量利用统计学知识设计自己的实验，减少外界因素和人为因素的干扰。2-比较原则空白对照组的建立—只有通过对照组的建立才能清楚的看到实验室因素在其中的作用。3-重复原则在许多独立的重复实验需要在相同的实验条件下进行，一
PCR实验室设施要求
实验室基础设施设计：包括实验室基础装修、实验室净化工程、实验室供排水工程、实验室电路系统。 1）实验室基础装修需要洁净天花、地板、隔断，合理设置缓存间及配置净化门、观察窗、传递窗等。 2）实验室净化工程实验室应配备单独送排风设施，试剂配置区、核酸提取区和扩增分析区应配备净化系统。