细胞培养液中蛋白的提取方法

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.1、透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.2、冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分.它是在冰冻状态下直接升华去除水分.具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等).密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态.数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末.干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用.也可采用冻干机进行冷冻干燥.3、吹干浓缩法将蛋白溶液装入透析袋内,放在电......阅读全文

细胞培养液-(一)

现代生物技术均通过细胞作为载体来进行,无论是基因治疗、干细胞、克隆技术都在细胞内进行的。细胞的生长需要一定的营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基,即指所有用于各种目的的体外培养、保存细胞用的物质,就其本意上讲为人工模拟体内生长的营养环境,使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞营养

细胞培养液(二)

第四节 合成细胞培养基合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方,是一种理想的培养基。目前合成培养基多达10多余种,有的培养基仍在不断进行改良。早期组织培养是利用天然培养基,目前合成培养基已经成为一种标准化的商品,从zui初的基本培养基发展到无血清培

细胞培养液的储存

  细胞培养液的储存条件一般为2~8℃、密闭、避光保存,但要注意如下几点:  (1)过滤后的完全培养液,即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用,一般在2~3周内使用完。  (2)灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的培养基溶液,一般可在4℃保存6~9个月,也可冷冻保存,用时解冻。  (3)高

细胞培养液的储存

  细胞培养液的储存条件一般为2~8℃、密闭、避光保存,但要注意如下几点:  (1)过滤后的完全培养液,即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用,一般在2~3周内使用完。  (2)灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的培养基溶液,一般可在4℃保存6~9个月,也可冷冻保存,用时解冻。  (3)高

细胞培养液的构成

  细胞培养液指细胞生长的液体环境,一般指完全培养液,添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。  1.细胞培养基&血清模式  血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的,因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养,如MEM培养基,较为常用的量为5%

培养液pH对细胞的影响?

由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时,需要注意一点:培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,

单层培养细胞更换培养液实验

实验方法原理以肉眼和倒置显微镜观察培养物,若有指征,如PH降低,则去除旧培养基加如新鲜培养基,再重新放入温箱培养。实验步骤材料无菌培养的细胞:A549细胞,以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶生长培养液……………………………………………………100ml例如:Eagle1×MEM含H

单层培养细胞更换培养液实验

实验方法原理以肉眼和倒置显微镜观察培养物,若有指征,如PH降低,则去除旧培养基加如新鲜培养基,再重新放入温箱培养。实验步骤材料无菌培养的细胞:A549细胞,以2×10^4ml接种到25cm2培养瓶后4天……4瓶生长培养液……………………………………………………100ml例如:Eagle1×MEM含H

细胞培养液选配关注点

培养液是人工模拟细胞体内生长的生存环境,对于细胞培养起着关键性作用。 1.   选择培养基没有一定的标准,某种培养基可以适合多种细胞,某种细胞也可以在不同培养液中生长。但是,建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞优选的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。  2.   1640的确是

培养液pH对细胞生长的影响?

由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时,需要注意一点:培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,

怎么去除培养液中的细胞碎片

3000转/分 离心5分钟 可使碎片沉淀下来 取上清即可。

细胞培养液选配注意事项

培养液是人工模拟细胞体内生长的生存环境,对于细胞培养起着关键性作用。1.选择培养基没有一定的标准,某种培养基可以适合多种细胞,某种细胞也可以在不同培养液中生长。但是,建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。2.1640的确是非常便宜的培养基,

动物细胞培养培养液成分

  体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通

12板培养细胞加培养液多少

6孔板底面积9.6cm2,加培养液的量2.5ml。12孔板底面积4.5cm2,加培养液的量2ml。24孔板底面积2cm2,加培养液的量1ml。96孔板底面积0.32cm2,加培养液的量0.1ml。无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内,解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵,但

细胞培养液的配制与消毒

器材与试剂:干粉型培养基、胰蛋白酶,青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。具体步骤:一.  水的制备:细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):1.溶

怎么样测定细胞培养液中细胞密度

怎么样测定细胞培养液中细胞密度一般用血球板计数法,就是充分混匀培养液后,取出1~10ml,离心,用适量pbs重悬,后悬滴于血球板计数,数对角线四个中格里一共多少,除以四,除以0.01ml,再除以原液体积就得出细胞密度了.

方案-13.1-单层培养细胞更换培养液实验

            实验方法原理 以肉眼和倒置显微镜观察培养物,若有指征,如PH降低,则去除旧培养基加如新鲜培养基,再重新放入温箱培养。 实验步骤 材料无菌培养的细胞:A549

追溯囊胚培养液中游离DNA细胞来源

  人类的妊娠效率很低,自然妊娠中只有不到50%的胚胎能够发育至足月。部分流产胚胎主要是源于胚胎的非整倍体染色体异常,在移植胚胎前鉴定并排除非整倍体胚胎是辅助生殖领域面临的巨大挑战。  当前临床上多采用对植入前胚胎的滋养外胚层进行样品活检和遗传学检测的方式来分析胚胎细胞的染色体倍性。该方法因涉及侵入

如何使昆虫细胞适应新的培养液

市场上供应的大多数培养液的配方非常接近,这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法,这个方法是保守的,在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中,观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞,不过也很容易扩展到贴壁细胞。细

转化细胞培养液的成分分析

 体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通常

细胞培养液中蛋白的提取方法

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.1、透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配

细胞培养实验中细胞培养液的相关介绍

  现代生物技术均通过细胞作为载体来进行,无论是基因治疗、干细胞、克隆技术都在细胞内进行的。细胞的生长需要一定的营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基,即指所有用于各种目的的体外培养、保存细胞用的物质,就其本意上讲为人工模拟体内生长的营养环境,使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞

10%的细胞培养液加多少血清

一般我们是加体积分数为10%的血清,比如你10mL培养液里边就要含有1mL血清;如果是胎牛血清可以用8%.加入不想让细胞长得太快,可以再降低血清的浓度.

细胞培养液中加的双抗怎么配

双抗就是青链霉素混合液,青链霉素混合液(100X)(Penicillin-StreptomycinSolution)双抗,是专门用于细胞培养的,可以直接添加到细胞培养液内。青霉素-链霉素溶液(100X)中,青霉素的含量为10000U/ml,链霉素的含量为10mg/ml。在细胞培养液中推荐的青霉素的工

如何看出来细胞培养液体中有支原体

1. 观察细胞的形态和生长特征:支原体污染比较严重时可出现生长减慢,有的培养基pH明显变酸,并出现细胞病变,以此可依次对支原体污染进行检测,但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似,因此不能准确诊断。2. 分离培养法:大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测,该方法准确、可靠,

从细胞培养液中怎么分离蛋白质

把细胞离心下来后,用tca或(nh4)2so4沉淀下来就可以啦。再把沉淀溶解到适当的buffer里就可以做后面的实验。

动物细胞培养的培养液成分有哪些?

  体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通

从细胞培养液中怎么分离蛋白质

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤:(一)材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:1.机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有

细胞培养液除菌过滤装置该如何选择?

细胞培养基过滤装置是很多客户经常需要使用到的一款产品,该产品主要是可以在过滤器的中间放置除菌用的滤膜,倒入待过滤的液体,然后打开抽滤泵,通过减压来加快滤液通过滤膜的速度,完成对于原样品的除菌过滤。由于目前市面上可以用于培养基出具过滤的产品种类众多,很多客户再购买前被没有深入了解不同产品的差异,购买后

如何看出来细胞培养液体中有支原体

1. 观察细胞的形态和生长特征:支原体污染比较严重时可出现生长减慢,有的培养基pH明显变酸,并出现细胞病变,以此可依次对支原体污染进行检测,但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似,因此不能准确诊断。2. 分离培养法:大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测,该方法准确、可靠,