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细菌密度测定时OD600值与稀释倍数是如何换算的

OD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。通过吸光值的定义可以知道,吸光值正比于溶液中的吸光物质的浓度。OD值越高说明发酵液中酵母菌的密度越大,测量细菌培养液在600nm出的吸光值,得到的OD600数值如果在0.6-0.8之间,表明细菌处于旺盛生长的对数生长期,OD600>3表明细菌已经饱和等。150倍和200倍结果一样,应该取平均值吧......阅读全文

制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法实验(高效的...

制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法实验(高效的转化策略)实验方法原理 20 世纪 70 年代晚期和 80 年代早期,Dong Hanahan 在冷泉港实验室和哈佛大学做研究生的时候,他做出了以前从未听说过的转化效率,并且在以后他的方法被标准化了。实验材料 质粒 DNA大

大肠杆菌感受态细胞的制备实验

细胞经过一些特殊方法(电击法、CaCl2法)等处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的细胞,即感受态细胞(Compenent cells)。实验方法原理: 带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko  Koide  and  Shohei  Koide          

用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌实验

实验方法原理 可以用于批量制备感受态细胞,其转化效率可达到 5X106~2X107 个转化克隆/μg 超螺旋质粒 DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制备的感受态细胞可以在 -70℃ 冻存。但随着冻存期的延长,转化效率会有所降低。实验材料 质粒 DNA试剂、试剂盒 标准

大肠杆菌感受态细胞的制备实验——氯化钙法

实验方法原理带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。实验材料E. c

大肠杆菌感受态细胞的制备实验

氯化钙法             实验方法原理 带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量

制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法实验

            实验方法原理 20 世纪 70 年代晚期和 80 年代早期,Dong Hanahan 在冷泉港实验室和哈佛大学做研究生的时候,他做出了以前从未听说过的转化效率,并且在以后他的方法被标

用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌实验

            实验方法原理 可以用于批量制备感受态细胞,其转化效率可达到 5X106~2X107 个转化克隆/μg 超螺旋质粒 DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 实验

实验材料pAS38pAS45pAS47试剂、试剂盒聚乙二醇(PEG) 氯化钠溶液HEPES 缓冲液涂布溶液Tris 缓冲盐水TBS-Tween-20琼脂糖-磷酸溶液仪器、耗材LBSOCYT实验步骤3.1 实物库构建我们用 Kunkel 突变技术构建大多数的实物库虽然我们证明了  AB 链套

胞内晶体蛋白基因的酿酒酵母真核表达

实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主,同时,作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体,观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况,探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此,首先构建一种重组大肠杆菌,其所携带的重组质粒能够

制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法实验

20 世纪 70 年代晚期和 80 年代早期,Dong Hanahan 在冷泉港实验室和哈佛大学做研究生的时候,他做出了以前从未听说过的转化效率,并且在以后他的方法被标准化了。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理20 世纪 70 年代晚期和 80 年代早期,Dong Hana

Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒使用说明书

中文名称:Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒英文名称:AlamaBlue Cell Viability Assay Kit产品规格:500TAlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue 通过在细胞生

Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒使用说明书

Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒AlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue 通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应,将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质,试卤灵(9-羟基-3-异吩

Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒说明书

Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒AlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue 通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应,将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质,试卤灵(9-羟基-3-异吩

用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌实验

可以用于批量制备感受态细胞,其转化效率可达到 5X106~2X107 个转化克隆/μg 超螺旋质粒 DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制备的感受态细胞可以在 -70℃ 冻存。但随着冻存期的延长,转化效率会有所降低。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等

原核表达(prokaryotic expression)条件优化

影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外,还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素[58]。由于Vector NTI suitor7.0软件模拟表达,可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难,所以本实验的工作主要

毕赤酵母原生质细胞的制作

实验概要本实验介绍了毕赤酵母原生质细胞的制作方法,以备转化。实验原理毕赤酵母细胞壁阻止摄入DNA,有必要去除部分细胞壁以吸收DNA。藤黄节杆菌酶是一种葡聚糖酶,可在细胞壁水解葡聚糖的β-1,3接头,还可部分地消化细胞壁。该方法的关键在于不能过度消化细胞壁,否则会导致细胞死亡。藤黄节杆菌酶消化能力受细

大鼠前列腺素D2(PGD2)ELISA试剂盒使用说明

原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 PGD2 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 PGD2与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠PGD2,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测

MTT实验的一些细节问题

一、细胞: 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。

MTT实验的一些细节问题

一、细胞: 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样

Transwell侵袭实验

第一节 概念这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1. Transwell关于Transwell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可以这么理解吧,trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko ...2

3.1.4 双链 DNA 合成( 1 ) 混合大约 1 μg 尿嘧啶单链 DNA、2 μl 磷酸化的寡核苷酸(见 3.1.3),1 μl 10 X 退火缓冲液(Bio-Rad  Metagene  kit ) ,加水使体积达 10 μl  ( 见注4)。制备一无寡核苷酸

酵母菌细胞密度检测

实验材料 酵母菌仪器、耗材 分光光度计离心机实验步骤 1.  在培养基中细胞的密度可以通过分光光度计测定的菌液在600 nm 波长的光密度OD600值来放映。2.  要得到可靠的测量结果,菌液最好稀释到OD600值1以下,在这个范围内,毎0.1OD600相对于

MTT实验的一些细节问题

一、细胞:1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,

独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko ...3

3.2.2 单噬菌体克隆的鉴定( 1 ) 从单克隆中制备噬菌体(或噬粒)。对噬粒,在 2 ml LB-Ap 上过夜生长一单菌落。混合 20 μl 培养液、2 ml LB-Ap  ( 和 IPTG,如愿意的话)和 1010 个/ml 辅助噬菌体 KO7。37°C 剧烈摇动保育过夜。对

微生物检测手段及注意事项

  微生物的检测,无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义,本文对生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量,体积,大小,生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法,简要介绍了这些方法的原理,应用范围和优缺点。  一个微生物细胞在合适的外界条件下,不断的

Transwell侵袭实验总结 (4)

-Transwell的其他应用的实验步骤1.Transwell肿瘤细胞迁移实验过程与Transwell侵袭实验基本一致,不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为,由于没有基质胶的阻挡,细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快,所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105,而迁移实验的密度是1×

GST融合蛋白表达与纯化的实验步骤与注意事项(二)

7、转化BL21(DE3)pLysS菌株检测GST融合蛋白的表达(1)冰上融化BL21(DE3)pLysS感受态细胞(天根)(2)2 ml离心管中,加入25μl BL21+ 3μl质粒(300-500ng),混匀(质粒≤感受态1/10)(3)冰上放置30mi

铜检测试剂盒(Cuprizone比色法)说明书

中文名称:铜检测试剂盒(Cuprizone比色法)产品规格:50T发货周期:1~3天用途:以双环己酮草酰二腙法(又称Cuprizone法)定量检测血清、血浆铜含量铜检测试剂盒(Cuprizone比色法)操作规程1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细

大肠杆菌的电击转化实验

            实验方法原理 转化(transformation)是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。也是细菌