elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的量,即为欲测抗体的量,其结果可用目测或用分光光度计定量测定操作步骤:1.将抗原按5 μg/ml稀释于碳酸盐缓冲液(pH 9.6),100 μl /孔,4℃过夜。2.次日PBS-T清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。3.加2%BSA封闭室温1 h,200 μl /孔。4.阳性对照从10ug/ml,做倍必稀释,待测血清从1:50做倍比稀释,预试验后确定稀释倍数及阳性对照的起始浓度及稀释数量(以可以做标准曲线为参数),室温1h。5.PBS-T清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。6.加入1:3000(不同公司有......阅读全文

ELISA直接法和间接法优缺点

直接法(direct ELISA)将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。缺点:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。间接法(indirect ELISA)此测定方

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

ELISA测定的常用模式间接法测抗体

基本方法的操作如下: 1.将病原体的抗原在碳酸盐缓冲液中4~C过夜包被,形成固相抗原,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗原后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。 2.加入含待测抗体的临床样本如血清等,温育一定时间后洗板;此时,待测抗体就会与固阳上特异抗原反应而

间接法操作elisa试剂盒的方法介绍

  1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;  2、次日洗涤3次;  3、加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;  4、(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1

酶联免疫吸附(ELISA)实验——间接法(测抗体)

实验方法原理图1:间接法测抗体示意图间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的量,即为欲测抗体的量,

检测elisa试剂盒组成技术原理与间接法

  组成结构   1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。   2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。   3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗

ELISA直接法和双抗体夹心法检测抗原的区别

不直接标记一抗而标记二抗,这是从生产成本上考虑的。二抗大部分是通用的,标记一次可以大量标记,比如10ml或者更多的浓缩液,可以生产上千上万的试剂盒。一次检测就行了而一抗种类很多,量少,如果标记一抗,比较费事。次次得检测(标记完得检测)。hrp标记不是很简单的事科研用的试剂盒。单品销售量很小的,不值当

ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

双抗体夹心法:(1)包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。(2)加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置3

电流表内接法与外接法误差分析

  若待测电阻R的阻值较小,采用外接法测出的阻值较为准确,误差较小;若待测电阻R阻值较大,采用内接法测出的阻值较为准确。   (1)采用外接法时   电流表中示数应是流过R的电流IR和通过电压表电流IV之和,即I=IR+IV,则R=U/I=U/(IR+IV)   引起误差的原因是电流I中增加了

elisa批内和批间差异哪个大

当然是组间差异大啊,组间的温度,试剂存放时间,标本存放时间,检测酶标仪状态都不一样

ELISA法检测细胞间黏附分子1

细胞黏附分子(ICAM)是存在于细胞表面的一类具有复杂功能的糖蛋白,介导细胞之间的相互黏附,参与众多的病理生理过程。目前,研究较多的黏附分子主要有免疫球蛋白超家族、整合素家族、选择性家族、Cadherin家族等。细胞间黏附分子-1(ICAM-1)是黏附分子免疫球蛋白超家族中的一员,由内皮细胞、淋巴细

兔子视黄醇结合蛋白4ELISA试剂盒的间接法

兔子视黄醇结合蛋白4ELISA试剂盒的间接法:1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。 2.次日洗涤3次。 3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释

鸭生长激素1(GH1)ELISA试剂盒的间接法

  鸭生长激素1(GH1)ELISA试剂盒的间接法:   1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。   2.次日洗涤3次。   3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照

定氮仪测定蛋白质是间接法还是直接法?

测定大米等粮食样品的蛋白质含量,是判断粮食品质的一个重要方法,现代为了操作方便,并有效提高测定的效率和精度,在很多行业中都是采用定氮仪这种仪器来进行测定。而一般来说,蛋白质测定方法主要可以分为两类,分别是间接法和直接法,那么使用定氮仪测定蛋白质采用的是间接法还是直接法呢?首先来让我们看看什么是间接法

电极法测电解质中直接法与间接法的区别

1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度.2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中蛋白

免疫酶标方法(直接法、间接法、PAP法和双PAP法)

一、直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结

电极法测电解质中直接法与间接法的区别

1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度. 2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中

电极法测电解质中直接法与间接法的区别

1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度.2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中

接触器的接法选择

  接法  交流接触器接法一:  一般三相接触器一共有8个点.三路输入.三路输出.还有是控制点两个.输出和输入是对应的.很容易能看出来.如果要加自锁的话.则还需要从输出点的一个端子将线接到控制点上面。  交流接触器接法二:  首先应该知道交流接触器的原理.他是用外界电源来加在线圈上.产生电磁场.加电

免疫荧光染色(间接法)

1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体(如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色30min,37℃,缓冲盐水

免疫酶标技术——直接法

实验方法原理先将酶与抗体结合形成酶标抗体,然后和相应的抗原反应,使抗原抗体复合物上带有酶分子,再与酶的底物H2O2—DAB(3’3—二胺荃联苯胺)发生显色反应,在显微镜下观察,根据颜色产物检测相应抗原。实验材料抗体试剂、试剂盒PBSH2O2血清仪器、耗材显微镜实验步骤1.  标本固定;2.  PBS

免疫荧光技术——直接法

免疫荧光技术可应用于:(1)研究特异蛋白抗原在细胞内分布;(2)对抗原进行细胞定位;(3)对特定抗原进行定量检测。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。(北京出版社)实验方法原理直接法是以荧光素标记的抗体直接与标本内的抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。根据荧光的分布位置及强度,确定相应抗原的存

检测抗体间接法操作步骤

  间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:  ⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。  ⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗

免疫荧光技术——间接法

实验方法原理基本原理是先用特异性抗体与细胞内相应抗原结合,再用荧光素标记的二抗与特异性抗体相结合,形成抗原-特异性抗体-标记荧光抗体的复合物。因为在复合物上带有比直接法更多的荧光标记物,所以比直接法更敏感。实验材料抗体试剂、试剂盒PBS伊文氏兰仪器、耗材显微镜实验步骤1.  标本固定后,PBS洗涤3

免疫酶标技术——间接法

实验方法原理将酶标记在第二抗体上,再与已形成的抗原抗体复合物中的第一抗体反应。目前广泛应用的PAP法、ABC法是在间接法的原理和技术的基础上发展起来的。实验材料抗体试剂、试剂盒PBSH2O2血清仪器、耗材显微镜实验步骤1.  标本固定;2.  PBS洗涤2×3 分钟;3.  1 %H2O2(或1 %

全自动生化分析仪测量电解质直接法优于间接法

一、目前大部分全自动生化分析仪测量电解质所用间接法与直接法实有极大差别,且误差较大。全自动生化分析仪目前在测量血液常规项目时,是以比色法为主,主要原理是运用光谱技术中不同原子吸光不同而测量的,那么对于ISE模块的功能实现,主要有两种方法,一是比色法,二是间接法。比色法因其测量精度,准确度等与所要求的