western转膜放置问题
1. 定义转膜时与胶接触的一面为“正”2. 封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反3. 假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触4. 假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的......阅读全文
PVDF膜活化处理完后不转膜能保存吗
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜，小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在
PVDF膜活化处理完后不转膜能保存吗
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜，小于20000的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在
western膜一抗放两天行吗
在四度冰箱中可以的，拿出来后一抗多洗一会没事的，不然可能会背景有点深，我最长敷过四天呢，妥妥的。
做western－blot洗膜时间可以缩短吗
这取决于你的抗体的特异性怎么样。洗膜时间通常是一定的，但是如果你的抗体表现很好，想要缩短也是没有问题的。但是如果做完以后，结果非特异多，或者不干净，那么保证洗膜时间，甚至延长，或者是改进洗膜液的成分都是有必要的。
170KD蛋白转膜用多大电压
电流通过导体（或用电器）的时候，会受到一定的阻力，但在电压的作用下，电流能够克服这种阻力顺利通过导体（或用电器），但遗憾的是，流过串联电阻（或用电器）后，电位（电势）再也没有以前那么高了，它的电位（电势）下降了。而且电阻越大，它两端电位（电势）的变化就越大。所以，把电流流过电阻（或用电器）时，在电阻
WESTERN－BLOT实验中转膜时滤纸和膜的大小有什么要求
1 滤纸是上下都有的 之所以小一点儿 是怕上下的滤纸边缘直接短路，相连导致电子不能从胶穿过，这样不能达到很好的转移效率2 可以用BSA，具体多大浓度，可以参照脱脂奶粉的3 这个检测没多大用处吧 如果非要探讨这个问题 可以拿转完的胶再去染色（考马斯亮蓝或银染）4 显色系统 基本就是HRP催化的DAB
WESTERN－BLOT实验中转膜时滤纸和膜的大小有什么要求
1 滤纸是上下都有的 之所以小一点儿 是怕上下的滤纸边缘直接短路，相连导致电子不能从胶穿过，这样不能达到很好的转移效率2 可以用BSA，具体多大浓度，可以参照脱脂奶粉的3 这个检测没多大用处吧 如果非要探讨这个问题 可以拿转完的胶再去染色（考马斯亮蓝或银染）4 显色系统 基本就是HRP催化的DAB
western－blot－NC膜可以反复用多少次
此膜是可以重复使用的。所以多个指标也只需要跑一次胶，但是首先要保证你的蛋白在胶上面，跑个MARK作个参照，对应一下分子量，不要切胶上把你要检测的蛋白给切除了。我们实验室的做法是再次使用的使用先用2%的NAOH洗5分钟，水洗5~10分钟，重新封闭，加一抗二抗，效果很好的！
blot－转膜是应该加甲醇还是不该加
westernblot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用在westernblot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。所以westernblot中封
10分钟读懂转膜甲醇的作用
VDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。 在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时，多加或不加甲醇也是这个目的。因为小分子不容易和膜结合而大分子更容易。 转膜的过程，是一个恒定电场下，电荷转移
从样本制备和转印过程提高western－blot的准确性
适当的样本准备样品准备不当，会让你头疼不已，当准备裂解液时：快速工作保持低温环境增加蛋白酶进行分装，避免反复冻融如果要分装样品，请确保等量分装，以便检查是否在此过程中丢失了目标。 如果您分离的样品浓度非常低，请记住，使用高灵敏度底物和较少的裂解液。如果你的裂解液中含有大量的DNA，它就会变得粘稠。
从样本制备和转印过程提高western－blot的准确性
适当的样本准备 样品准备不当，会让你头疼不已，当准备裂解液时： 快速工作 保持低温环境 增加蛋白酶 进行分装，避免反复冻融 如果要分装样品，请确保等量分装，以便检查是否在此过程中丢失了目标。 如果您分离的样品浓度非常低，请记住，使用高灵敏度底物和较少的裂解液
在使用PVDF膜做Western－Blot时，怎样消除背景？
使用PVDF膜时需要经过多步严格的封闭过程。可以通过增加2-5倍封闭液的浓度，延长封闭时间（如封闭液孵育过夜）和在37℃下进行封闭来提高效果，通过封闭液与空位点结合来消除背景，并与膜蛋白结合降低其与一抗的非特异性结合。 一些常用封闭液有脱脂奶粉，BSA和干酪素。
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
转印到膜上的蛋白质检测实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 PBSTween印度墨汁仪器、耗材 摇床实验步骤 1. 将转印膜置于塑料容器中，在旋转摇床中于37℃用Tween 20溶液洗涤3次，每次30 min，然后再于室温用Tween 20溶液洗2次，每次30 min。2. 用印度墨汁溶液染膜3 h或过夜。 3. 在Twe
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量与转膜时间对应关系
转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2分子量与转膜时间对应关系分离胶浓度（％） 线性分离范围 电泳时间(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
lc3的转膜时间多少电压电流多大
转膜的时候电压40v，可以看到电流先下降后上升。我转膜的时候就这样的，转膜效果挺好的。转膜液随着使用次数增多，电阻增大，相应电流下，电压增大，建议每次转膜液使用2～3次就换新的，这个是正常的，恒压的时候，电流也是会变化的，这是关于电泳液的问题，用的时间久了就会出现这样的问题，可以经常换电泳液
wb转膜到半个小时改变电压会影响吗
转膜的时候电压40v，可以看到电流先下降后上升。我转膜的时候就这样的，转膜效果挺好的。转膜液随着使用次数增多，电阻增大，相应电流下，电压增大，建议每次转膜液使用2～3次就换新的，这个是正常的，恒压的时候，电流也是会变化的，这是关于电泳液的问题，用的时间久了就会出现这样的问题，可以经常换电泳液
分子量在22kd转膜时间可为多少
分子量相差太大，建议分开转：22kD按常规转膜时间；大分子量（170kD）蛋白延长转膜时间或提高转膜电压（注意保持低转膜温度）；如果二者必须一起转，那就适当延长转膜时间吧，希望你的22kD不要转过了。
westernblot实验过程
Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品
western－blot印迹膜均匀高背景产生原因及解决方案
Westerns blot是分析蛋白表达的有力技术。通过这种测定方法，可以评估单个蛋白的分子量，翻译后修饰蛋白和蛋白表达丰度。 蛋白印迹相对简单，不需要昂贵的设备或试剂，使其成为许多实验室蛋白检测方法。 成功的western blot的关键是使用与单一蛋白特异性反应并且与其他蛋白几乎没有交叉反
Westernblot实验步骤及注意事项
Westernblot 实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃4. 加入PMSF（每克组织30μ
转膜时大分子量和小分子量蛋白，该如何选择膜孔径
对所有的蛋白，我们推荐用 Nitrocellulose Sandwiches #12369（0.2 μm）的杂交膜去转膜，尤其是分子量低于 30 KD 的蛋白，建议使用较高浓度（12-15%）的蛋白分离胶并缩短转膜的时间，建议在 1 小时以内。大分子量蛋白（> 150 kDa）推荐使用 tris-a
Western－blot实验步骤及注意事项
2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适