分子生物学工具酶的妙用
清华大学生命科学学院魏迪明课题组（MADlab）在《核酸研究》（Nucleic Acids Research）杂志上在线发表题为“酶修饰控制的DNA纳米结构变构”（Allostery of DNA nanostructures controlled by enzymatic modifications）的研究论文。变构效应与很多生物大分子体系的功能实现息息相关，有关变构效应的研究可以帮助我们理解生物系统的调控方式。除了天然的体系以外，通过合理设计的DNA纳米结构也可以实现变构过程。本研究*提出以酶修饰的方法控制DNA纳米结构的变构，在多种DNA纳米结构的体系中实现变构过程。同时，本研究对处于变构位点的效应DNA链进行了碱基堆积力强度的研究，从理论和实验角度量化了效应链碱基堆积力对DNA纳米结构构象的影响。基于碱基堆积力梯度，本研究实现了DNA聚合酶、外切酶和连接酶控制的DNA纳米结构变构反应，为酶修饰的DNA纳米结构变构过程提供......阅读全文
国际分子生物学公司简介
Promega: Promega公司是分子生物学研究工具的经典品牌，已有接近30年的历史，是生命科学这个朝阳产业中的"老字号"。该公司所特有的萤光素酶生物发光技术，灵敏度高，信号/背景比率低，在基础研究和药物筛选领域内得到广泛的应用和认可。应用范围涉及报告基因检测；细胞学活力、细胞毒作用、细胞凋亡检
分子生物学工具酶的妙用
清华大学生命科学学院魏迪明课题组（MADlab）在《核酸研究》（Nucleic Acids Research）杂志上在线发表题为“酶修饰控制的DNA纳米结构变构”（Allostery of DNA nanostructures controlled by enzymatic modification
分子生物学常用实验技术（十六）
（三）电泳：1、预电泳（1）当凝胶聚合完全后，拨出鲨鱼齿梳，将该梳子反过来，把有齿的一头插入凝胶中，形成加样孔。（2）立即将胶板固定在测序凝胶槽中，一般测序凝胶槽的上下槽是分开的，因而只有在固定好凝胶板后，方能加入TBE 缓冲液。（3）稀释10×TBE 缓冲液至1×TBE，将该缓冲液加入上下二个电泳
分子生物学常用实验技术（七）
（四） 电泳分析 通常合成的cDNA 第一链和第二链长度为350-6000 碱基,需进行1.4%碱性琼脂糖电泳。将第一链和第二链掺入测定管中的反应液先用酚抽提,乙醇沉淀，方法见本章（二）第二链合成中的9-12 步，一般第一链和第二链上样量相同。1. 标准分子量DNA 参照物的同位素标记(1) 通常
分子生物学常用实验技术（二）
第三节操作步骤 一、细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。 二、质粒D
分子生物学课程教学讲义（六）
4． DNA序列分析a. Sanger的双脱氧链终止法Cambridge的F. Sanger在1977年发明用双脱氧链终止法测定单链DNA的序列，其基本原理如下：①DNA聚合酶能够用单链DNA作为模板，合成准确的DNA互补链；②该酶能够用2'，3'--双脱氧核苷三磷酸作底物并将其聚合
走下神坛的分子生物学研究
研究分子生物学（包括相关）固然好，但是……总有太多的但是 过去很长一段时间里，分子生物学研究在我心目中是神圣的，是“高端、大气、上档次”的。 尤其是“人类基因组计划”开展和公布结果那几年，基因序列和表达的研究真是神奇无比，后面又兴起了RNA系列的研究，还有组学以及生物信息学的研究更是精妙绝伦
分子生物学常用试剂的配制
1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入： 细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g 细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用5mo
分子生物学实验小技术（二）
1 、 各供应商送货时往往会提供冰袋，在室温下将化冻的大冰袋平整的一面整齐地插入1.5ml 或0.5ml 、0.2ml 的废弃离心管；或将几个化冻后的小冰袋填料塞入一个小泡沫盒中压实，再插入各种大小的试管，放在-20 摄氏度下冻24小时后取出，拔出插入的废管（可加点热水以助拔管）即可做成一个
分子生物学分型法有哪些？
（一）RFLP与PCR－RFLP分型法 限制性片段长度多态性（RFLP）分析，称为DNA－RFLP。DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度增加，此类方法称为PCR-RFLP分型法。PCR－RFLP分型法所应用的PCR引物为HLA组特异性的，此法特别适应于
分子生物学常用实验技术（十七）
第二节T7 DN A 聚合酶测序技术一、概述 T7 DNA 聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及单链和双链3'→5'外切酶活性。当T7 DNA 聚合酶用适当方法处理后，可使3'→5'外切酶活力明显下降。改造后的T7 DNA 聚合酶又称T7
分子生物学实验常用试剂配置
一. 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammon
分子生物学课程教学讲义（四）
第四讲 DNA、RNA和蛋白质代谢 DNA是贮藏遗传信息的最重要的生物大分子。DNA分子中的核苷酸排列顺序不但决定了胞内所有RNA及蛋白质的基本结构，还通过蛋白质（酶）的功能间接控制了细胞内全部有效成份的生产、运转和功能发挥。贮藏在任何基因中的生物信息都必须首先被转录生成RNA，才能够得到表达。D
分子生物学常用实验技术（十八）
五、操作步骤：（一）、模板制备1、M13 单链模板制备：在转化入合适的大肠杆菌宿主菌且在含有指示剂如X-gal/IPTG 的培养基上铺板之后, 含有M13 重组子的细胞将表现出无色的"噬菌斑"，事实上受感染的细胞并非被噬菌体溶菌或杀死，出现噬菌斑是因为被感染的细菌在生长速度上比其周围未感染的
分子生物学常用实验技术（一）
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定第二章DNA 酶切及凝胶电泳第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第四章RNA 的提取和cDNA 合成第五章重组质粒的连接、转化及筛选第六章基因组DNA 的提取第七章RFLP 和RAPD 技术第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆第九章分子杂交技术第十章测
分子生物学常用实验技术（四）
第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节概述 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外
细胞因子分子生物学方法
这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已克隆化，故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样，常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR
分子生物学常用实验技术（十四）
三、菌落原位杂交 对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。1、材料：待检测的细菌平皿，已标记好的探针
分子生物学常用实验技术（十二）
第九章分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总D
分子生物学常用实验技术（三）
第二章DNA 酶切及凝胶电泳第一节概述一. DNA 的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP 的存在。Ⅰ类酶结
分子生物学常用实验技术（六）
一、材料 提纯TMV 病毒液（10mg/ml）。二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE 缓冲液，无RNA 酶的双菌水。四、操作步骤1、取一eppendorf 管加入提纯
分子生物学常用实验技术（八）
第五章重组质粒的连接、转化及筛选第一节概述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得
分子生物学课程教学讲义（一）
第一讲 序论 二、现代分子生物学中的主要里程碑 分子生物学是研究核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。当人们意识到同一生物不同世代之间的连续性是由生物体自身所
分子生物学实验基础知识
分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也
分子生物学常用实验技术（十五）
第十章测序技术 在分子生物学研究中，DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger 等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam 和Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随
原创]分子生物学软件集总结
1. DNASIS 2.5 DNASIS for Windows 2.5版是日立软件公司（Hitachi Sofeware Engineering Co.,Ltd.）97年推出的一个功能强大的序列分析软件。包含有大部分分子生物学软件的常用功能，可进行DNA，RNA，蛋白质序列的编辑和分析，甚至还能进
分子生物学实验常用试剂配置
常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺（ammonium ac
分子生物学课程教学讲义（三）
第三讲 蛋白质合成一.基因与基因表达的一般概念基因作为唯一能够自主复制、永久存在的单位，其生理学功能以蛋白质形式得到表达。DNA序列是遗传信息的贮存者，它通过自主复制得到永存，并通过转录生成mRNA，翻译生成蛋白质的过程控制所有生命现象。编码链（coding strand）又称sense stran
分子生物学的应用意义
实践应用意义在应用方面，生物膜能量转换原理的阐明，将有助于解决全球性的能源问题。了解酶的催化原理就能更有针对性地进行酶的人工模拟，设计出化学工业上广泛使用的新催化剂，从而给化学工业带来一场革命。分子生物学在生物工程技术中也起了巨大的作用，1973年重组DNA技术的成功，为基因工程的发展铺平了道路。8
分子生物学常用实验技术（十三）
2. 从RNA 合成单链cDNA 探针cDNA 单链探针主要用来分离cDNA 文库中相应的基因。用RNA为模板合成cDNA 探针所用的引物有两种: (1)用寡聚dT 为引物合成cDNA 探针。本方法只能用于带Poly(A)的mRNA,并且产生的探针极大多数偏向于mRNA 3'末端序列