什么是梯度洗脱?

梯度洗脱装置梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例,从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化,达到提高分离效果,缩短分析时间的目的。梯度洗脱装置分为两类:一类是外梯度装置(又称低压梯度),流动相在常温常压下混合,用高压泵压至柱系统,仅需一台泵即可。另一类是内梯度装置(又称高压梯度),将两种溶剂分别用泵增压后,按电器部件设置的程序,注入梯度混合室混合,再输至柱系统。梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度,来调整混合样品中各组分的k值,使所有谱带都以最佳平均k值通过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的程序升温,所不同的是,在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的,而不是借改变温度(温度程序)来达到。......阅读全文

HPLC法中,等度与梯度洗脱有什么区别

1、洗脱的改变与不改变的配比不同等度洗脱:流动相的组成比例和流速恒定不变。梯度洗脱:改变流动相的浓度配比。2、它们的定义不同等度洗脱定义:液相色谱操作中,等度洗脱即在样品组分的分析周期中,流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。与梯度洗脱对应。梯度洗脱定义:梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一

HPLC法中,等度与梯度洗脱有什么区别

1、洗脱的改变与不改变的配比不同等度洗脱:流动相的组成比例和流速恒定不变。梯度洗脱:改变流动相的浓度配比。2、它们的定义不同等度洗脱定义:液相色谱操作中,等度洗脱即在样品组分的分析周期中,流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。与梯度洗脱对应。梯度洗脱定义:梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一

不同梯度洗脱系统的特征比较

不同梯度洗脱系统的特征比较特性二元高压梯度二元低压梯度多元低压梯度可能洗脱范围较广较广广梯度的重现性较好好较好成本较高低低改变流动项较容易容易较容易机械性能较简单,较可靠简单,可靠较简单,较可靠自动化难以程度容易容易较容易对溶解气体的敏感性较敏感敏感敏感梯度准确性较准确准确较准确不同溶剂混合能力较强

高效液相色谱仪梯度洗脱曲线

高效液相色谱仪梯度洗脱时,常用一个弱极性溶剂A和一个强极性溶剂B组合,以梯度洗脱时间为横坐标,以流动相中强极性组分B的体积百分含量为纵坐标,可绘出梯度洗脱曲线。若在单位时间内,强极性溶剂B在流动相中的体积百分含量以恒定速率增加,则流动相的极性呈线性梯度输出;若不以恒定速度增加,则流动相的极性呈凸形或

梯度洗脱的技术要点和装置要求

①洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不致于太拥挤。②梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来。③梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸,会引起区带扩散;而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。梯度洗脱可分为低压梯度(又称为外梯度)和高

液相色谱法术语概念梯度洗脱

梯度洗脱(gradient elution)间断地或连续地改变流动相的组成或其他操作条件,从而改变其色谱洗脱能力的过程。

液相色谱仪的梯度洗脱技术

液相色谱仪在进行多成分的复杂样品分离时,经常会碰到前面的一些成分分离不完全,后面的一些成分分离度太大,且出峰很晚和峰形较差。为了使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并相互分离,往往要用到梯度洗脱技术。在液相色谱仪中流速(压力)梯度洗脱和温度梯度洗脱效果不大,而且会带来一些不利影响,因此,

高效液相色谱仪的梯度洗脱

高效液相色谱仪的梯度洗脱是指在一个分析周期内按一定程序连续变化流动相的浓度配比、极性、PH 值或离子强度。对于复杂混合物,特别是保留性能相差较大的混合物,梯度洗脱是改进高效液相色谱仪分离效果的重要手段。一、工作原理:流动相由两种(或多种)不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例而改变流动

什么是液相色谱梯度系统?

液相色谱梯度系统液相色谱梯度系统的整套系统由P3000高压泵、UV3000检测器、进样阀、溶剂托盘、色谱柱、工作软件等组成、安装、调试及使用都非常简单。液相色谱梯度系统采用了全数字、高集成化设计理念,大大降低仪器的噪声;基于数字信号传输和处理,可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境

什么是密度梯度离心?

用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯,蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求:1)能产生密度梯度,且密度高时,粘度不高;2)PH中性或

液相色谱仪分析时什么情况下采用梯度洗脱

液相色谱仪的梯度洗脱是指在一个分析周期内按一定程序连续变化流动相的浓度配比、极性、pH值或离子强度。梯度洗脱适合:一、具有较宽K范围的样品,所有的组分的色谱峰的K值不能在0.5~20之间的样品。二、相对分子质量大于1000的大分子样品,尤其是生物样品。三、样品中含有高保留时间的干扰成分,在一次分析中

在高效液相色谱中梯度洗脱装置的作用是什么

在气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析 周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目

液相色谱梯度洗脱中柱温的影响

许多色谱工作者在操作液相色谱时,色谱柱是在室温环境下工作的。如果实验室的温度能保持不变的话,不会有什么大问题。但大多数的工作环境温度是不断变化的,因此若想将在某实验室开发的一种液相色谱方法应用到其他实验室的话,温度的差别就会引起较复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的,本文就来讨论液

影响液相色谱仪梯度洗脱的因素

液相色谱仪进行梯度洗脱时,选定溶剂A、B之后,设定梯度速度和梯度时间,确定梯度曲线形状,要以最经济的梯度洗脱程序,实现样品的最佳化分离。影响梯度洗脱的因素有:1、溶剂的纯度要高,否则会使梯度洗脱的重现性变坏。2、梯度混合的溶剂互溶性要好,应防止不互溶的溶剂进入色谱柱。3、注意溶剂的粘度和密度对混合流

高效液相色谱仪的梯度洗脱技术

高效液相色谱仪在进行多成分的复杂样品分离时,经常会碰到前面的一些成分分离不完全,后面的一些成分分离度太大,且出峰很晚和峰形较差。为了使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并相互分离,往往要用到梯度洗脱技术。在高效液相色谱仪中流速(压力)梯度洗脱和温度梯度洗脱效果不大,而且会带来一些不利影响

高效液相色谱仪的梯度洗脱技术

高效液相色谱仪在进行多成分的复杂样品分离时,经常会碰到前面的一些成分分离不完全,后面的一些成分分离度太大,且出峰很晚和峰形较差。为了使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并相互分离,往往要用到梯度洗脱技术。在高效液相色谱仪中流速(压力)梯度洗脱和温度梯度洗脱效果不大,而且会带来一些不利影响

在进行梯度洗脱时有哪些问题需要注意?

在进行梯度洗脱时,由于多种溶剂混合,而且组成不断变化,因此带来一些特殊问题,必须充分重视。①要注意溶剂的互溶性,不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶,超出范围后就不混溶,使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时,还可能析出盐的晶体,尤其是使用磷酸盐时需特别小心。②梯度

液相色谱仪的梯度洗脱类型与实质

液相色谱仪的梯度洗脱是指在同一个色谱分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比。梯度洗脱又称梯度淋洗或程序洗脱。一、梯度洗脱类型:1、高压梯度:采用两台高压输液泵,分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器,混合器在泵之后,两种溶液在高压状态下混合。2、低压梯度:只需一台高压输液泵,比例阀在泵之

简介液相色谱梯度洗脱中柱温的影响

  许多色谱工作者在操作液相色谱时,色谱柱是在室温环境下工作的。如果实验室的温度能保持不变的话,不会有什么大问题。但大多数的工作环境温度是不断变化的,因此若想将在某实验室开发的一种液相色谱方法应用到其他实验室的话,温度的差别就会引起较复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的,本文就来讨

影响高效液相色谱仪梯度洗脱的因素

  高效液相色谱仪进行梯度洗脱时,选定溶剂A、B之后,设定梯度速度和梯度时间,确定梯度曲线形状,要以最经济的梯度洗脱程序,实现样品的最佳化分离。影响梯度洗脱的因素有:   1、溶剂的纯度要高,否则会使梯度洗脱的重现性变坏。   2、梯度混合的溶剂互溶性要好,应防止不互溶的溶剂进入色谱柱。

影响高效液相色谱仪梯度洗脱的因素

高效液相色谱仪进行梯度洗脱时,选定溶剂A、B之后,设定梯度速度和梯度时间,确定梯度曲线形状,要以最经济的梯度洗脱程序,实现样品的最佳化分离。影响梯度洗脱的因素有:1、溶剂的纯度要高,否则会使梯度洗脱的重现性变坏。2、梯度混合的溶剂互溶性要好,应防止不互溶的溶剂进入色谱柱。3、注意溶剂的粘度和密度对混

影响高效液相色谱仪梯度洗脱的因素

高效液相色谱仪进行梯度洗脱时,选定溶剂A、B之后,设定梯度速度和梯度时间,确定梯度曲线形状,要以最经济的梯度洗脱程序,实现样品的最佳化分离。影响梯度洗脱的因素有:1、溶剂的纯度要高,否则会使梯度洗脱的重现性变坏。2、梯度混合的溶剂互溶性要好,应防止不互溶的溶剂进入色谱柱。3、注意溶剂的粘度和密度对混

高效液相色谱法仪器的梯度洗脱介绍

  类似于GC中的程序升温。已成为现代高效液相色谱中不可缺少的部分。梯度洗提,就是载液中含有两种(或更多)不同极性的溶剂,在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性,通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素,以提高分离效果。梯度洗提可以分为两种:  a.低压梯度(也叫外梯度):在常

高效液相色谱法的梯度洗脱的介绍

  类似于GC中的程序升温。已成为现代高效液相色谱中不可缺少的部分。梯度洗提,就是载液中含有两种(或更多)不同极性的溶剂,在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性,通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素,以提高分离效果。梯度洗提可以分为两种:  a.低压梯度(也叫外梯度):在常

什么是梯度PCR仪?它与传统PCR有什么区别?

梯度指的是PCR时,退火温度条件可以设置一系列不同的温度梯度,这样的仪器就是梯度PCR仪了,传统的PCR仪一次只能运行一个特定的退火温度,不同的退火温度需要多次运行,而梯度PCR仪一次就可以实现多个不同的退火温度,这样可以节约时间。

浓度越大的咪唑蛋白洗脱越差是为什么

Ni柱中的氯化镍可以与有HIs(组蛋白)标签的蛋白结合,也可以与咪唑结合。步骤是:过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给蛋白提供最适的环境,我一般平衡4个柱长,然后蛋白上样,你可以让他自己挂,这样挂柱子的效果好一些,如果流速太

浓度越大的咪唑蛋白洗脱越差是为什么

Ni柱中的氯化镍可以与有HIs(组蛋白)标签的蛋白结合,也可以与咪唑结合。步骤是:过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给蛋白提供最适的环境,我一般平衡4个柱长,然后蛋白上样,你可以让他自己挂,这样挂柱子的效果好一些,如果流速太

高效液相色谱仪的梯度洗脱类型与实质

   高效液相色谱仪的梯度洗脱是指在同一个色谱分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比。梯度洗脱又称梯度淋洗或程序洗脱。一、梯度洗脱类型:  1、高压梯度:采用两台高压输液泵,分别按设定的比例输送A和B两种溶液至混合器,混合器在泵之后,两种溶液在高压状态下混合。  2、低压梯度:只需一台高压输

分级梯度洗脱的概念和离子交换剂介绍

分级梯度洗脱是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相是离子交换剂,它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。离子交换剂可以分为三部分:高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。电荷基团与高分子聚合物共价结合,形

两元梯度洗脱液相色谱仪分类方法

两元梯度洗脱液相色谱仪分类方法有多种。1、按功能可分:分析型两元梯度洗脱液相色谱仪和制备型两元梯度洗脱液相色谱仪。2、按作用可分:两元梯度洗脱定量分析液相色谱仪和两元梯度洗脱定性分析液相色谱仪。3、按应用范围可分:专用型两元梯度洗脱液相色谱仪和通用型两元梯度洗脱液相色谱仪。4、按分离目的可分:化验室