什么是DNA斑点杂交
是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜（或尼龙膜,NC膜）上，用已标记的探针进行杂交，洗膜(除去未接合的探针)，放射自显影，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。 斑点杂交（Dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。......阅读全文
斑点杂交的技术特点和应用
斑点杂交是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜（或尼龙膜、NC膜）上，用已标记的探针进行杂交，洗膜（除去未接合的探针），放射自显影，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。
关于DNA斑点杂交方法的介绍
①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。 ②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 ③用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上，每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。 ④将膜烘干，密封保存备用。
斑点杂交技术的方法和步骤
斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上,然后与核酸探针分子杂交，以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释,还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因诊断中经常用到,是研究基因表达的有力工具。但由于目的
关于完整细胞斑点杂交方法的介绍
应用类似检测细菌菌落的方法，可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测，将整个细胞点到膜上，经NaOH处理，使DNA暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本，因为它使细胞
关于斑点杂交的基本信息介绍
斑点杂交是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜（或尼龙膜、NC膜）上，用已标记的探针进行杂交，洗膜（除去未接合的探针），放射自显影，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。
分子杂交技术斑点杂交的操作步骤
(1) 10μl样品与20μl 100%甲酰胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置于68℃，15分钟后置冰浴中。 (2) 用0.1mol/L NaOH清洗点样器,再用无菌水充分冲洗。将一张经20×SSC浸润的滤纸铺在点样器上,上面再铺上一张经20×SSC浸润1小时的硝酸纤维
斑点杂交方法——优化抗原和抗体浓度
对于一个给定的抗原，最佳的抗体浓度依赖的抗原和抗体本身。抗原和抗体的亲和力，以及一抗与二抗的特异反应都是不同的。最优抗原和抗体浓度可通过免疫印迹实验中使用不同浓度的抗原和抗体作用确定。另外，更快和更简单的方法是进行斑点印迹实验。以下是使用超敏感信号底物进行的斑点印迹的操作方法。注：所有的抗体稀释度假
斑点杂交方法——优化抗原和抗体浓度
斑 点 杂 交 方 法——优 化 抗 原 和 抗 体 浓 度 对于一个给定的抗原，最佳的抗体浓度依赖的抗原和抗体本身。抗原和抗体的亲和力，以及一抗与二抗的特异反应都是不同的。最优抗原和抗体浓度可通过免疫印迹实验中使用不同浓度的抗原和抗体作用确定。另外，更快和更简单的方法是进行斑点印迹实验。以下是使用
分子杂交技术斑点杂交的实验简介
斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上,然后与核酸探针分子杂交，以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释,还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因诊断中经常用到,是研究基因表达的有力工具。但由于
常用的固相杂交方法介绍
常用的固相杂交方法有斑点杂交法、夹心杂交法和原位杂交法等。下面简单介绍几种常用的核酸分子固相杂交方法。①斑点杂交法（dot blot hybridization）：最常用的杂交模式．将样品DNA直接点在硝酸纤维素膜或尼龙膜上，在严格的条件下杂交后进行检测。斑点杂交法简单、迅速，不需要限制性核酸内切酶
非结核分枝杆菌肺病的细菌学研究的几种方法
1、Bactec 460 TB系统 在含有C14－棕榈酸为底物的7H12培养基内加入选择性抑制剂NAP（ρ－硝基－α－乙酰氨基－β－羟基丙酮）5μg/ml，培养后经Bactec 460 TB检测，结核分枝杆菌群对NAP l00%敏感，非结核分枝杆菌99．5%耐药，从而达到快速鉴别的目的。表明N
细胞因子分子生物学方法
这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已克隆化，故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样，常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR
Southern印迹法的基本原理
Southernblot的基本原理是：硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变性处理，覆以上述滤膜，再于其上方压上多层干燥的吸水纸，借助它对深盐溶液的上吸作用，凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的
Th细胞的核酸杂交法检测
这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术，绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量有很好的相关性，所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况，反有公认的细胞因子的基因均已克隆化，故能较容易地得到某一细胞因子的
Southern印迹法的原理和功能特点
Southernblot的基本原理是：硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变性处理，覆以上述滤膜，再于其上方压上多层干燥的吸水纸，借助它对深盐溶液的上吸作用，凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的DN
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（三）
（1）DAN斑点杂交①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上。每个样品一般点50μl（2～10μg DNA）。④将膜烘干，密封保存备用。（2）RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA（
病原体检测结核杆菌检查介绍
结核杆菌检查介绍： 结核杆菌检查是确诊肺结核最特异性的方法，痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。采取涂片检查法或细菌培养法。涂片抗酸染色镜检快速简便，在我国非典型分枝杆菌尚属少见，故抗酸杆菌阳性，肺结核诊断基本即可成立。除了痰液，尚可采取咽喉部分泌物、胸液、腹水、尿液、脑脊液、胃液、脓液、粪便等
临床化学检查方法介绍结核杆菌检查介绍
结核杆菌检查介绍： 结核杆菌检查是确诊肺结核最特异性的方法，痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。采取涂片检查法或细菌培养法。涂片抗酸染色镜检快速简便，在我国非典型分枝杆菌尚属少见，故抗酸杆菌阳性，肺结核诊断基本即可成立。除了痰液，尚可采取咽喉部分泌物、胸液、腹水、尿液、脑脊液、胃液、脓液、粪便等
原位杂交和核酸杂交是一种吗
核酸杂交方法是一种分子生物学的标准技术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）.经典的核酸杂交方法是将DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记,在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影
常用DAN探针制备的方法介绍随机引物标记
随机引物标记(random primer labeling)是利用单链 DNA 与六核苷酸(hexamer)退火结合,以六核苷酸为引物,加入4种 dNTP,其中1种标有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成带有标记的互补 DNA 链,标记率高而且不受琼脂糖影响。该法不适于标记 RNA。Fei
简述拉米夫定的适应症
乙肝、乙型肝炎病毒复制的慢性乙型肝炎。 1、适合治疗对象：慢性乙型肝炎；按全国病毒性肝炎防治方案，确诊为慢性乙型肝炎，性别不限，年龄16岁或以上，并且符合下列标准。 （1）HBeAg阳性，HBV DNA阳性（HBV DNA阳性系指斑点杂交法，不是PCR法阳性，有条件者可作HBV DNA定量测
关于丁型病毒性肝炎标志物检测的检查方法介绍
1.丁型肝炎病毒抗原测定 静脉血2ml，注入干燥试管中，不抗凝。采用酶联免疫吸附（ELISA）法和放射免疫分析（RIA）法测定。肝内丁型肝炎病毒抗原可用免疫荧光法或免疫组织化学技术进行检测。 2.丁型肝炎病毒抗体测定 丁型肝炎病毒抗体分为抗HDV-IgG抗体和抗HDV-IgM抗体。静脉血2
关于分子杂交技术的基本原理介绍
分子杂交的基本原理是根据双链DNA经高温解链成两条互补的单链，降温后又可恢复原来的双链。两条不同的单链分子可根据碱基配对的原则，只要它们的碱基序列同源或部分同源，即可全部或部分复性，此称核酸杂交。用来探测DNA的已知互补片段称为DNA探针，通常是应用已预先经放射性标记或非放射性标记的DNA单链来
蛋白分析仪的应用
为了探讨采用高效液相色谱法（HPLC）的全自动血红蛋白分析仪在地中海贫血（简称地贫）筛查诊断中的应用。 用全自动血红蛋白分析仪及其配套试剂对 5738 例受检样本进行血红蛋白分析， 对筛查出的830 例异常结果的样本采用多重聚合酶链反应（PCR）和反向斑点杂交法（RDB）进行地贫基因检测，比较其
真菌检验生物学技术临床检验
真菌检验生物学技术：（一）、用PCR等技术字标本中扩增真菌DNA.国内应用PCR与反向斑点杂交快速检测及鉴定念珠菌主要种别。国外可以用PCR-DEIA技术从血清中扩增出白色念珠菌的DNA来诊断念珠菌病。针对真菌的共同序列而设计的‘全能引物’（pan-primer）而扩增580bp的产物，为真菌所共有
真菌生物学检验技术
（一）、用PCR等技术字标本中扩增真菌DNA.国内应用PCR与反向斑点杂交快速检测及鉴定念珠菌主要种别。国外可以用PCR-DEIA技术从血清中扩增出白色念珠菌的DNA来诊断念珠菌病。针对真菌的共同序列而设计的‘全能引物’（pan-primer）而扩增580bp的产物，为真菌所共有。检测血液标本即可明
医学检验真菌检验生物学技术
（一）、用PCR等技术字标本中扩增真菌DNA.国内应用PCR与反向斑点杂交快速检测及鉴定念珠菌主要种别。国外可以用PCR-DEIA技术从血清中扩增出白色念珠菌的DNA来诊断念珠菌病医|学教育网搜集整理。针对真菌的共同序列而设计的‘全能引物’（pan-primer）而扩增580bp的产物，为真菌所共有
真菌检验的生物学技术
（一）、用PCR等技术字标本中扩增真菌DNA.国内应用PCR与反向斑点杂交快速检测及鉴定念珠菌主要种别。国外可以用PCR-DEIA技术从血清中扩增出白色念珠菌的DNA来诊断念珠菌病。针对真菌的共同序列而设计的‘全能引物’（pan-primer）而扩增580bp的产物，为真菌所共有。检测血液标本即可明
核酸杂交法检测病原微生物
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针，与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高，但敏感性低于PCR方法。 本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片段作探针，用
核酸杂交法检测病原微生物
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