关于PCR缓冲液的相关介绍

用于PCR的标准缓冲液见PCR操作范例。于72℃时,反应体系的pH值将下降1个单位,接近于7.2。二价阳离子的存在至关重要,影响PCR的特异性和产量。实验表明,Mg2 优于Mn2 ,而Ca2 无任何作用。 1.Mg2 浓度Mg2 的最佳浓度为1.5mmol/L(当各种dNTP浓度为200mmol/L时),但并非对任何一种模板与引物的结合都是最佳的。首次使用靶序列和引物结合时,都要把Mg2 浓度调到最佳,其浓度变化范围为1~10mmol/L。Mg2 过量易生成非特异性扩增产物,Mg2 不足易使产量降低。 样品中存在的较高浓度的螯合剂如EDTA或高浓度带负电荷的离子基团如磷酸根,会与Mg2 结合而降低Mg2 有效浓度。因此,用作模板的DNA应溶于10mmol/l Tris-HCl(pH7.6)0.1mmol/L EDTA中。 dNTP含有磷酸根,其浓度变化将影响Mg2 的有效浓度。标准反应体系中4×dTNPs的总浓度为0.......阅读全文

关于PCR缓冲液的相关介绍

  用于PCR的标准缓冲液见PCR操作范例。于72℃时,反应体系的pH值将下降1个单位,接近于7.2。二价阳离子的存在至关重要,影响PCR的特异性和产量。实验表明,Mg2 优于Mn2 ,而Ca2 无任何作用。  1.Mg2 浓度Mg2 的最佳浓度为1.5mmol/L(当各种dNTP浓度为200mmo

PCR-各种缓冲液的配方

 PCR 各种缓冲液的配方电泳缓冲液50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液        终浓度配制1L溶液成分                                          各成分的用量2mol/L Tris碱                            242g1mo

关于PCR实验室的布局相关介绍

  PCR实验室按规定需要四间,分别是1 试剂储存和准备区、2 标本制备区、3扩增反应混合物配制和扩增区、4扩增产物分析区,四间PCR实验室区域设置  如果使用全自动分析仪,各区域可适当合并,我们建议将扩增区和产物分析区合并为扩增检测区即共三个间。  三间PCR实验室区域设置  按国家卫生部的要求,

PCR中Ph缓冲液的作用

第一,PCR缓冲液就是给PCR反应提供的一个最适酶催反应条件。第二,例如缓冲液中的镁离子在酶催化过程中,结合到酶-底物结合体上,从而使催化反应的活化能更加降低。使得反应能够进行。第三,PH缓冲液是保证PCR反应正常进行的关键条件之一。

关于克隆PCR产物的对照实验相关介绍

  A)涂布未转化的感受态细胞。  如有菌落,表明氨苄失效,或污染上带有氨苄抗型的质粒,或产生氨苄抗型的菌落。  B)转化完整质粒,计算菌落生长数,测定转化效率。  例如,将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化。用SOC稀释到1000ul后,用100ul铺板。培养过夜,

关于电泳缓冲液的特点介绍

  TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进

关于电泳缓冲液的作用介绍

  缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时阳极与阴极都会发生电解反应,阳极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),阴极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使阳极变酸,阴极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。  电泳

关于电泳法缓冲液作用的介绍

  作用之一:缓冲液在电泳过程中的作用是维持合适的pH。电泳时的正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应,负极发生的是还原反应。长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。  作用之二:电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,

关于电泳缓冲液的内容介绍

  电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成, 是电泳场中的导体,也是维持电泳系统恒定 pH值的必要条件。其成分及其离子强度影 响物质的电泳迁移率,应避免与被分离的样 品发生化学反应而改变样品的理化性质或使 其丧失生物活性。电泳缓冲液中的EDTA 可螯合Mg离子等二价阳离子,防止电泳时激

关于电泳法缓冲液作用的介绍

  作用之一  缓冲液在电泳过程中的作用是维持合适的pH。电泳时的正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应,负极发生的是还原反应。长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。  作用之二  电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电

关于PCR技术的介绍

  聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,[1]PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大

关于磷酸缓冲液的浓度计算介绍

  通常所说的磷酸缓冲液的浓度是指溶液中含有的所有的磷酸根离子的浓度,而不是钠离子(Na+)或者钾离子(K+)的浓度。正是因为如此,在配制中性缓冲液时,用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合,并不影响磷酸根离子的浓度,所得的缓冲液浓度仍是等浓度的NaH

关于PBS缓冲液的基本信息介绍

  PBS缓冲液,是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液,主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二级解离,缓冲的pH值范围很广,而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1 mmol

关于电泳缓冲液的基本特点介绍

  电泳缓冲液是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系

关于电泳缓冲液的配制方法介绍

  一、电泳缓冲液50×TAE Buffer 配制方法:  1、称量氨基丁三醇 242g,Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中;  2、向烧杯中加入约600ml去离子水,充分搅拌均匀;  3、加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解;  4、用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1L后,

特异引物的PCR标记的相关介绍

  特异引物的PCR标记所用引物是针对已知序列的 DNA 区段而设计的,具有特定核苷酸序列(通常为 18—24 bp),可在常规PCR复性温度下进行扩增,对基因组 DNA 的特定区域进行多态性分析。  ①序列标志位点  (Sequence Tagged Sites,STS)  STS是对以特定对引物

毛细管电泳分离缓冲液的相关介绍

  缓冲试剂的选择主要由所需的pH决定,在相同的pH下,不同缓冲试剂的分离效果不尽相同,有的可能相差甚远。CE中常用的缓冲试剂有:磷酸盐、硼砂或硼酸、醋酸盐等。  缓冲盐的浓度直接影响到电泳介质的离子强度,从而影响Zeta电势,而Zeta电势的变化又会影响到电渗流。缓冲液浓度升高,离子强度增加,双电

PCR产物的假阳性的相关问题介绍

  出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。  引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。  靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:

PCR的相关技术

  随着人们对PCR基本原理的认识和技术的掌握,通过对PCR 技术的大量改进,派生发展出一系列新的相关技术和改良方法。  逆转录PCR(RT-PCR): 以由mRNA逆转录而来的cDNA为模板,也因为是从表现型基因来进行增量的,由此产生出来的cDNA产物不带有内含子,常应用于分子克隆技术[6]。  

关于pcr仪器的发展介绍

  pcr仪器的发展pcr温度循环至关重要,pcr扩增仪各参数必须准确。自perkin –elmercetus公司第一台pcr扩增仪问世以来,现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售pcr扩增仪。在短短的几年间,扩增仪经过几代的发展,不断采用新技术,并且进一步朝方便、实用、高智能化和自动化的方向发展

内切酶用于克隆PCR的相关介绍

  克隆PCR产物的方法之一,是在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点,经酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明,大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基,才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断。酶切位点(内切酶的识别序列)要加在引物的5'端,为

关于磷酸缓冲液的简介

  磷酸缓冲液(PB,Phosphate Buffer),是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液,通常使用的有磷酸钠缓冲液(NaH2PO4&Na2HPO4)和磷酸钾缓冲液(K2HPO4&KH2PO4),由于它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广。  主要作用:PB(Phosphate Buffere

实时荧光定量PCR的Ct值的相关介绍

  Ct值(Cycle threshold,循环阈值)的含义为:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数  1. 荧光阈值(threshold)的设定  PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光阈值的缺省(默认)设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,即:thre

关于实时荧光定量PCR的介绍

  实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·  Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信

关于PCR技术的各种变体的介绍

  1.递减PCR(touchdown PCR):前几循环温度逐渐下降。  2.逆转录PCR(RT-PCR):以由mRNA逆转录而来的DNA为模板,由此产生出来的DNA不带有内含子(基因中不具意义的段落),常应用于分子克隆技术。  3.热启动PCR(hot start PCR):以高热活化型核酸聚合

原位PCR实验相关

  所需设备  原位PCR反应是在载玻片的平面上进行,保持水平可以使反应各组分均匀地分布在组织切片上,所以须在原位PCR仪上进行,该仪器不但可以使载玻片保持水平,而且还可以给载玻片进行均匀地加热,保证扩增反应的顺利进行。  探针种类  与原位杂交一样,检测原位PCR结果的探针可以是DNA探针,也可以

荧光定量PCR检测HPVDNA相关介绍

(一)荧光PCR HPV DNA检测  HPV感染是子宫颈癌及其癌前病变(子宫颈上皮内瘤样变)的主要病因。因此,可以将检测HPV感染作为子宫颈癌的一种筛查手段。HPV-DNA检测发现高度病变的敏感度为97.7%~100%,平均为98.6%,比细胞学检查高二十多个百分点。 如果将两者结合进行检查,敏感

关于频闪仪的相关介绍

  简单地讲,频闪光源是指一种可以快速闪动的光源。而频闪仪则是指可以用来产生这种光源的仪器,通常用来观察快速移动或者震动物体,使高速运动物体看上去像静止的一样。  频闪仪可以产生非常短的光脉冲,其持续时间只有1/100000秒。这些高亮度的短暂闪光把高速运动物体的图象“静止”在人的视网膜上,使人的大

关于脱盐的相关介绍

  脱盐就是将“化学盐”脱除的方法或过程。简单地说就是去除水中的阴阳离子。脱盐的方法有电渗析和反渗透法及新近重新热火起来的正向渗透等。衡量反渗透膜性能的指标:脱盐率和透盐率  脱盐粗范地说就是将“盐”脱除的方法或过程,这个“盐”是更宽泛的“化学盐”不止常用的食用“盐”。  脱盐简单地说就是去除水中的

关于抗凝剂的相关介绍

  抗凝剂是能够阻止血液凝固的化学试剂或物质,能避免促红细胞生成素使血液变稠,治疗静脉炎,阻止血块在静脉里形成,如天然抗凝剂(肝素,水蛭素等)、Ca2+鳌合剂(柠檬酸钠,氟化钾)等都是抗凝剂的一种。  抗凝剂  医疗用途:治疗静脉炎,阻止血块在静脉里形成。  体育用途:避免促红细胞生成素使血液变稠。