测定蛋白质分子量的常用方法

知道蛋白质分子量、氨基酸组成计算器http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/一般的方法:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量[原理]十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量,是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在实验基础上发展起来的一项新技术。用这种方法测定蛋白质的分子量具有快速灵便,设备简单等优点。蛋白质的电泳迁移率在一般的电泳方法中,主要取决于它在某PH下所带的净电荷量、分子大小(即分子量)和形状的差异性,而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对大多数蛋白质,主要取决于它们的分子量,与原有的电荷量和形状无关。SDS是一种阴离子表面活性剂,在一定的条件下,它能打开蛋白质氢键和疏水键,并按比例地结合到这些蛋白质分子上形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物,每克蛋白质一般结合1.4克SDS。SDS与蛋......阅读全文

蛋白质的定量测定方法

一、微量凯氏(kjeldahl)定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下:NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3S

凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量实验_凝胶过滤层析法

凝胶过滤也称排阻层析、分子筛层析和凝胶层析。本实验目的是了解凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量的基本原理,巩固柱层析的操作方法。实验方法原理凝胶过滤( Gel Filt ration ) 也称排阻层析( Exclusion Chromatography)、分子筛层析(Molecular Sieve Ch

正磷酸盐的常用测定方法

1、钒钼磷酸比色法。此法灵敏度较低,但干扰物质较少。2、钼-锑-钪比色法。灵敏度高,颜色稳定,重复性好。3、氯化亚锡法。虽灵敏但稳定性差,受氯离子、硫酸盐等干扰。

血氨测定的常用方法有那些

  (1)直接显色测定法:在床旁取静脉血2ml,以钨酸沉淀蛋白后,用酚——次氯酸盐显色,参照标准计算氨含量。如严格掌握实验条件,本法分析结果能满足临床要求。  (2)谷氨酸脱氢酶速率法:血浆中的氨在足量的α-酮戊二酸和NADPH存在时,经谷氨酸脱氢酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH,NADPH的下降

接触角常用的几种测定方法

测定接触角的方法有多种,但可分为二类。一类是直接法、即直接测量接触角的大小;另一类是间接法、即通过其它物理量的测定以及该物理量与接触角之间的定量关系来计算出接触角的大小.常用测定物理量是长度及质量。第—类方法精度由测角器所决定;第二类则不但由测定长度或质量的仪器精度.而且还由它们间的定量关系式的准确

维生素e常用的测定方法

以下是关于维生素e的检测方法介绍:【含量测定】照气相色谱法(附录V E)测定。 色谱条件与系统适用性试验 用硅酮(OV-17)为固定 液,涂布浓度为2%的填充柱,或用100%二甲基聚硅氧烷固定液的毛细管柱;柱温为265°C。理论板数按维生素E峰 计算不低于500(填充柱)或5000(毛细管柱),维生

有机物分子量的测定

有机物分子量的测定质谱技术是一种鉴定技术,在有机分子的鉴定方面发挥着非常重要的作用,它能快速而准确地测定物质的分子量。关于质谱技术对有机物分子量的测定原理及方法,相关文章已有介绍,本节再补充部分说明。1.分子量的概念有机质谱分子量的概念与采用周期表中原子量计算的分子量是不同的,有机质谱中分子量是分子

常用脂肪测定原理及方法汇总

  一、糕点、糖果中脂肪的测定  脂肪是食品的主要成分之一,常用的测定方法有:索氏提取法、酸水解法、三氯甲烷冷浸法、罗兹-哥特里法、盖勃法、巴布科氏法和尼霍夫氏碱法等。糕点及糖果食品主要用索氏提取法和酸水解法。  1、索氏提取法  本法适用于各类食品中脂肪含量的测定,操作简便,准确度高,但提取时间长

如何改进蛋白质测定的方法

  蛋白质是食品中最重要的营养成分,也是评价食品营养价值的重要指标,因而在食品分析中是一个高频率的分析项目。就分析方法而言,GB/T 5009.5-2003中的第一法是首选的方法。蛋白质测定仪法是由样品消化、水蒸气蒸馏和滴定三个连续的操作步骤组成的。鉴于水蒸气蒸馏耗水费电,且高温操作较不安全,本文改

蛋白质测定的方法有哪些?

1.凯氏定氮法准备4个50mL凯氏烧瓶并标号,想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品,另外两个烧瓶作为对照,在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物,再加入浓硫酸,将4个烧瓶放到消化架上进行消化,之后进行蒸馏,全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量,直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色,即为滴定终点

蛋白质含量的测定方法(二)

(二)试剂与器材1.试剂(1)试剂甲:(A) 10克Na2CO3,2克NaOH和0.25克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)。溶解于500毫升蒸馏水中。(B) 0.5克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸馏水中,每次使用前,将50份(A)与1份(B)混合,即为试剂甲。(2)试剂乙

蛋白质含量的测定方法(三)

(二)Bradford法的优缺点1、Bradford法的突出优点是:(1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1g。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。(2)测定快速、简便,

蛋白质含量的测定方法(一)

实验原理:蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法、双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法

凝胶过滤法和SDS法哪个更加准确测定蛋白质分子量

蛋白质的形状影响凝胶过滤时候的行为,分子形状长的蛋白质在凝胶过滤的时候有类似于分子较大的蛋白的行为,用SDS-PAGE测定的蛋白质分子量应该比较准确,因为变形后的蛋白质迁移速度只取决于蛋白质分子大小。

蛋白质印迹中常用的检测方法有哪些

蛋白质印迹法指的是将经过凝胶电泳分离的蛋白质转移到膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜等)上,再对转移膜上的蛋白质进行检测的技术。转移可用电泳法等。检测常用与特定蛋白结合的标记抗体或配体。由此可判断特定蛋白质的存在与否和分子量大小等。常用技术有SDS—PAGE,Western杂交(蛋白质—抗体杂交)。

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种

  常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等离子交换色谱:蛋白质和氨基酸一样会两性解离,所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电,pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中,表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种

常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等1.离子交换色谱:蛋白质和氨基酸一样会两性解离,所带电荷决定于溶液ph。ph小于pi时蛋白质带正电,ph大于pi时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中,表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种

  常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等离子交换色谱:蛋白质和氨基酸一样会两性解离,所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电,pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中,表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差

凝胶渗透色谱法测定分子量及其分布的标定方法

一、 凝胶渗透色谱法测定高聚物的分子量及分子量分布  高聚物的分子量及分子量分布的,是研究聚合物及高分子材料性能的最基本数据之一。它涉及到高分子材料及其制品的力学性能,高聚物的流变性质,聚合物加工性能和加工条件的选择。也是在高分子化学、高分子物理领域对具体聚合反应,具体聚合物的结构研究所需的基本数据

实验室分析方法有机物分子量的测定

质谱技术是一种鉴定技术,在有机分子的鉴定方面发挥着非常重要的作用,它能快速而准确地测定物质的分子量。关于质谱技术对有机物分子量的测定原理及方法,相关文章已有介绍,本节再补充部分说明。 1.分子量的概念有机质谱分子量的概念与采用周期表中原子量计算的分子量是不同的,有机质谱中分子量是分子离子的质量,而分

油中水分常用的测定方法有哪些

水分测量方法油品中水分测定方法主要分为现场测定法、在线测定法和实验室测定法。现场测定法视觉检测法 爆裂试验法 氢化钙实验法在线测定法传感器可以测量石油产品的温度和相对饱和水含量,传感器种类很多,主要有水分传感器、光学传感器。水分传感器随着水的浓度的增加或减少,装置的电容也随之发生变化,通过将水分含量

油中水分常用的测定方法有哪些

水分测量方法油品中水分测定方法主要分为现场测定法、在线测定法和实验室测定法。现场测定法视觉检测法 爆裂试验法 氢化钙实验法在线测定法传感器可以测量石油产品的温度和相对饱和水含量,传感器种类很多,主要有水分传感器、光学传感器。水分传感器随着水的浓度的增加或减少,装置的电容也随之发生变化,通过将水分含量

血氨测定的常用方法分别有哪些?

  (1)直接显色测定法:在床旁取静脉血2ml,以钨酸沉淀蛋白后,用酚——次氯酸盐显色,参照标准计算氨含量。如严格掌握实验条件,本法分析结果能满足临床要求。  (2)谷氨酸脱氢酶速率法:血浆中的氨在足量的α-酮戊二酸和NADPH存在时,经谷氨酸脱氢酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH,NADPH的下降

酶活性测定法的常用方法介绍

  常用的测定方法有取样法和连续法。  取样法是在酶反应开始后不同的时间,从反应系统中取出一定量的反应液,并用适当方法停止其反应,再根据产物和底物在化学性质上的差别进行分析,求得单位时间内酶促反应的变化量。  连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上的不同,在反应过程中对反应系统添加酶的变性剂以终止

渗透系数的常用测定方法有哪些

渗透系数的测定方法主要分“实验室测定”和“野外现场测定“两大类。1.实验室测定法目前在实验室中测定渗透系数 k 的仪器种类和试验方法很多,但从试验原理上大体可分为”常水头法“和变水头法两种。常水头试验法就是在整个试验过程中保持水头为一常数,从而水头差也为常数。 如图:试验时,在透明塑料筒中装填截面为

关于电阻量测的常用测定方法介绍

  一、电阻量测指的是对电阻的物理性能以及数学数值进行测量的过程。  二、常用测量方法:伏安法测电阻:  1.原理:根据部分电路欧姆定律。  2.控制电路的选择  三、控制电路有两种:一种是限流电路;另一种是分压电路。

4种常用蛋白浓度测定方法的比较

蛋白浓度测定方法有很多种,各种蛋白质含量测定的研究也屡见报道。每种方法都有其优点和局限性,在蛋白质样品中往往会含有一些化学试剂,有些化学试剂会干 扰蛋白浓度测定。因此,寻找合适的实验方法以避免干扰对蛋白浓度测定的准确性至关重要。基于Lowry法在测定PEG_IL_6样品时出现大量黄绿色沉 淀,尿素对

渗透系数的常用测定方法有哪些

渗透系数的测定方法主要分“实验室测定”和“野外现场测定“两大类。1.实验室测定法目前在实验室中测定渗透系数 k 的仪器种类和试验方法很多,但从试验原理上大体可分为”常水头法“和变水头法两种。常水头试验法就是在整个试验过程中保持水头为一常数,从而水头差也为常数。 如图:试验时,在透明塑料筒中装填截面为

蛋白质测定方法及其比较

目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍 使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法); 还有近来广为应用的蛋白定量方法——BCA法。其中Bradford法和Lowry法灵敏度较高,

蛋白质电泳分子量标准试剂的取用规则

蛋白质电泳分子量标准试剂的取用规则:(1)试剂不能与手接触。(2)要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,*不准用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,方可取用另一种试剂。(3)试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后将瓶放回原处(