常用DAN探针制备的方法介绍光敏生物素标记
光敏生物素标记(photobiotin labeling)是Forster(1985)等报道的核酸探针制备方法。光敏生物素是一种可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸盐很容易溶于水,在水溶液中将光敏生物素乙酸盐与需要标记的核酸混合,用强的可见光照射,就可将生物素标记在单链或双链的 DNA 或 RNA 上,形成稳定的共价结合。大约每100～150个残基结合一个生物素,这种程度的标记不会影响杂交。目前有许多跨国公司如美国的Sigma、西德的 Serva、澳大利亚的 Bresatec 等均有商品化光敏生物素,以及其标记探针试剂盒供应。我国马立等人也研制出了光敏生物素,并首次合成了带臂的光敏生物素,提高了检测灵敏度。与其他方法相比,用光敏生物素标记核酸,具有以下优点:(1)方法简便易行、快速可靠、易于重复,不需特殊试剂,只需在水溶液中直接光照标记,因光照需要一定强度,马立等人已成功试制出光敏生物素光照标记用灯。(2)适用面广,单链、双链 ......阅读全文
基因探针基因探针的基本介绍
基因探针基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 1．探针的来源 DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe
自旋标记法的方法介绍
自旋标记 （spin label）， 很多物质的分子不表现电子自旋共振（ESR），但对这些分子，人工地使之与自由基（free radical）结合从而得以用ESR法来研究，获得独特的ESR信息，这就是自旋标记法。
cRNA探针在原位杂交组织化学
Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较cDNA探针
生物芯片制备
载体材料及要求作为载体必须是固体片状或者膜、表面带有活性基因，以便于连接并有效固定各种生物分子。目前制备芯片的固相材料有玻片、硅片、金属片、尼龙膜等。目前较为常用的支持材料是玻片，因为玻片适合多种合成方法，而且在制备芯片前对玻片的预处理也相对简单易行。载体种类玻璃片、PVDF膜、聚丙烯酰氨凝胶、聚苯
生物芯片的制备方法
载体材料及要求作为载体必须是固体片状或者膜、表面带有活性基因，以便于连接并有效固定各种生物分子。目前制备芯片的固相材料有玻片、硅片、金属片、尼龙膜等。目前较为常用的支持材料是玻片，因为玻片适合多种合成方法，而且在制备芯片前对玻片的预处理也相对简单易行。载体种类玻璃片、PVDF膜、聚丙烯酰氨凝胶、聚苯
生物芯片的制备方法
载体材料及要求作为载体必须是固体片状或者膜、表面带有活性基因，以便于连接并有效固定各种生物分子。目前制备芯片的固相材料有玻片、硅片、金属片、尼龙膜等。目前较为常用的支持材料是玻片，因为玻片适合多种合成方法，而且在制备芯片前对玻片的预处理也相对简单易行。载体种类玻璃片、PVDF膜、聚丙烯酰氨凝胶、聚苯
扫描电镜生物样品常用制备方法
扫描电镜在观察生物样品时，具有以下特点：多角度观察样品的表面结构；不需要将样品切成薄片；景深大、图像立体感强；放大倍数从几十倍到几十万倍连续可调；在观察形貌的同时可以对微区的成分进行定量和定性分析。而能否获得真实、清晰、理想的扫描电镜观察结果，样品的制备过程是关键。 生物样品含水直接观察，会对扫描电
什么是荧光原位杂交有什么用？
原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一种固相分子杂交的方法，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素
地高辛标记探针的化学发光检测实验
地高辛系统是过提供的另一种非同位素标记方法，其检测方法是通过偶联上一种或数种荧光染料或酶的抗地高辛抗体，或用间接免疫荧光来测定。实验材料DNA试剂、试剂盒抗体实验步骤1. 用地髙辛标记探针与带DNA或RNA印迹的正电荷尼龙膜杂交。 2. 根据厂商的推荐条件，封闭和结合抗体。3. 对X光片曝光约
地高辛标记探针的化学发光检测实验
化学发光法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA探针的非同位素标记
实验方法原理进行Southern杂交分析时应标记不带载体的插入片段作为探针,常用的标记方法耗时很长,它包括将质粒或λDNA经限制性内切酶酶解后分离插入片段,用切口平移法或随机引物标记法进行标记。相比之下,采用PCR聚合酶链式反应法标记探针有几个优点,只需极少量的质粒DNA(50ng)作模板即可扩增出
DNA探针的非同位素标记
实验方法原理 进行Southern杂交分析时应标记不带载体的插入片段作为探针,常用的标记方法耗时很长,它包括将质粒或λDNA经限制性内切酶酶解后分离插入片段,用切口平移法或随机引物标记法进行标记。相比之下,采用PCR聚合酶链式反应法标记探针有几个优点,只需极少量的质粒DNA(50ng)作模板即可扩增
地高辛标记探针的化学发光检测实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 抗体实验步骤 1. 用地髙辛标记探针与带DNA或RNA印迹的正电荷尼龙膜杂交。 2. 根据厂商的推荐条件，封闭和结合抗体。3. 对X光片曝光约20 min。
荧光探针标记基团fam和hex的区别
TAMRA和BHQ和引物关系不大，这个是淬灭基团。TAMRA主要淬灭FAM，HEX，VIC的荧光BHQ有3种BHQ1、BHQ2和BHQ3，其中BHQ1和TAMRA的淬灭波长相近引物设计和淬灭基团关系不大
胶体金标记技术（制备方法和应用）
胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。由于它不存在内源酶干扰及放射性同位素污染等问题，且利用不同颗粒大小的胶体金还可以作双重甚至多重标记，使定位更加精确。因此已成为继荧光素、酶、同位素及乳胶标记技术之后的一种新型标记技术。现已广泛应用于电镜、流式细
原位杂交组织化学杂交体检测
杂交体检测又称杂交体显示，是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体（杂交信号）成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。 （一）放射性核素标记探针的检测 *个原位杂交实验（1969年）以’H作为核酸探针的标记物，杂交信号用放射自显影术检测。随着
Th细胞的核酸杂交法检测
这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术，绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量有很好的相关性，所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况，反有公认的细胞因子的基因均已克隆化，故能较容易地得到某一细胞因子的
核酸探针标记及原位杂交1
一、核酸探针标记核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否
核酸探针标记及原位杂交4
(三)试剂配制配制溶液过程中均需戴手套，液体配制均用超净水，所用瓶子均经160℃烘烤4h，主要目的是去除RNA酶。1.DEPC水 将DEPC按1‰浓度加入超净水中，充分混合后静置过夜，15~20min高压消毒，之后室温避尘存放。2.0.1mol PBS pH 7.4A液：0.1mol NaH2PO4
通常用什么做标记基因
常规分子生物克隆中常选用氨苄、卡纳等抗性基因作为标记基因。荧光定量，使用荧光染料或荧光标记的特异性的探针。功能表达分析，会选择在表达载体中加入荧光蛋白。转基因稳定表达，选择抗除草剂等~这是个人实验中的内容，依人而变
细胞化学技术4
6、基本实验过程 用于大分子合成过程研究的放射自显影技术： 同位素标记示踪化合物→注入动物体内→ 取下器官或组织→切片→ 涂乳胶膜→自显影→显影和定影→染色→观察 用于大分子定位研究的放射自显影技术： 组织固定包埋→切片 ↓ 细胞化学反
关于光敏素的类型介绍
不论是黄色或绿色组织中都至少存在两种类型的光敏素分子：光敏色素Ⅰ(PⅠ)和光敏色素(PⅡ)。前者为光不稳定型、后者为光稳定型。nPⅠ在黄化组织中大量存在，在光转变成Pfr后就迅速降解，因此在绿色组织中含量较低。PⅡ在黄化组织中含量较低，仅为PⅠ的1%～2%，但光转变成Pfr后较稳定，加之在绿色植
关于光敏作用的优势介绍
（1）疗效确切：由于治疗过程基于较强的药物定位效应，光化学作用可以在630nm激光照射时作用于所有靶向细胞，并能同时增强机体免疫系统对病变细胞的抵抗力，所以治疗彻底、复发率低，对多数早期癌症可达到根治目的。 （2）创伤很小：借助光纤、内窥镜和其他介入技术，可将激光引导到体内深部进行治疗，避免了
关于光敏作用的基质介绍
光敏作用的基质也被称为光敏剂，临床应用的光敏剂应该是无毒的，能选择性地集中在癌组织中，并能被穿透组织能力强的光(600nm-800nm)所激发。要求光敏剂不但其光化作用光谱波较长，而且能进入细胞与细胞的光敏基质紧密结合。尽管已经研究了上千种不同类型的光敏化剂，但迄今临床光动力治癌用的药物，在国内
关于光敏反应的诊断介绍
光敏反应的临床表现主要有各种皮肤病，如光敏性皮炎，慢性光化性皮肤病，日光性荨麻疹，光敏性痘疮样水疱病等，此外还有甲松离，假卟啉症，红斑狼疮等。 光敏反应导致的后果可能很严重，但其临床诊断较为困难，临床诊断光敏反应的方法主要是光试验、光斑贴试验、再激发试验和再激发光试验等，结合病变按光照部位分布
原位杂交技术和操作步骤详细介绍
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统
原位杂交技术和操作步骤详细介绍
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统
杂交信号的放大实验——地高辛标记探针的信号
实验材料杂交信号试剂、试剂盒地高辛SSCBSA荧光素仪器、耗材加湿盒水浴锅培养箱实验步骤1. 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片（见“荧光原位杂交实验”基本方案步骤1~6）。 2. 加50 μl 10 μg/ml 的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上，盖以22 mm2 大小的Parafilm 膜，
基因诊断的概念、常用技术与应用
基因诊断的概念 一、基本概念： 1．人类的绝大多数疾病都与基因有关，基因变异引起疾病两种类型： 1) 内源基因变异：由于先天遗传和后天内外环境因素的影响，人类的基因结构及表达的各个环节都可发生异常，从而导致疾病。分基因结构突变和表达异常。 2) 外源基因的入侵：各种病原体感染人体后，其特异
目前六种常用纯化制备纯水的方法
一、离子交换法离子交换法是以圆球形树脂（离子交换树脂）过滤原水，水中的离子会与固定在树脂上的离子交换。常见的两种离子交换方法分别是硬水软化和去离子法。硬水软化主要是用在反渗透（RO）处理之前，先将水质硬度降低的一种前处理程序。软化机里面的球状树脂，以两个钠离子交换一个钙离子或镁离子的方式来软化水质。