DNA探针的非同位素标记
实验方法原理进行Southern杂交分析时应标记不带载体的插入片段作为探针,常用的标记方法耗时很长,它包括将质粒或λDNA经限制性内切酶酶解后分离插入片段,用切口平移法或随机引物标记法进行标记。相比之下,采用PCR聚合酶链式反应法标记探针有几个优点,只需极少量的质粒DNA(50ng)作模板即可扩增出大量高效标记的插入片段。在PCR反应中加入非放射性的替换核苷酸(生物素dUTP,地高辛-11-dUTP碱不稳定型),可在数小时内合成大量标记好的探针实验材料LB培养基psr142引物FBA065引物dATP、dGTP、dCTP溶液Taq聚合酶试剂、试剂盒待标记的 DNA 探针仪器、耗材PCR仪电泳槽及电源微量移液器及相应吸头1.5mlEppendorf管5ml溶血管台式微量离心机37℃恒温摇床恒温水浴锅-20℃冰箱-80℃冰箱4℃冰箱实验步骤1.在一加有1mL LB-抗生素培养基的5mL溶血管中接种一单菌落,松松地盖上管帽,37℃剧烈......阅读全文
DNA探针的非同位素标记
实验方法原理 进行Southern杂交分析时应标记不带载体的插入片段作为探针,常用的标记方法耗时很长,它包括将质粒或λDNA经限制性内切酶酶解后分离插入片段,用切口平移法或随机引物标记法进行标记。相比之下,采用PCR聚合酶链式反应法标记探针有几个优点,只需极少量的质粒DNA(50ng)作模板即可扩增
DNA探针的非同位素标记
实验方法原理进行Southern杂交分析时应标记不带载体的插入片段作为探针,常用的标记方法耗时很长,它包括将质粒或λDNA经限制性内切酶酶解后分离插入片段,用切口平移法或随机引物标记法进行标记。相比之下,采用PCR聚合酶链式反应法标记探针有几个优点,只需极少量的质粒DNA(50ng)作模板即可扩增出
介绍DNA探针的同位素标记方法
1.缺口平移法(nick translation)缺口平移法是最常用的探针标记法,反应体系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三种三磷酸脱氧核糖核苷酸、一种同位素标记的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如
同位素标记的探针和非同位素标记的探针的特点和应用
同位素标记的探针通常有很高的放射比活性，杂交的灵敏度高，但使用期限短，且有放射性危害，污染物处置困难，需要特殊的仪器和设备，不适用于普通实验室。近年来非同位素标记法得到很大发展，如酶促标记法（如生物素、地高辛标记法）和化学标记法（如荧光生物素、酶标记法）。非同位素标记的探针保存时间较长、避免了同位素
非放射性地高辛标记DNA探针法
实验概要掌握非放射性地高辛标记DNA探针法。 实验原理以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连
非同位素标记探针的酶法检测
实验材料 探针试剂、试剂盒 PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材 盖玻片水浴锅实验步骤 1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片（“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步）。2. 由1×SSC中取出玻片，尽可能吸去残留玻片上的缓冲液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封
“DNA探针”的性能优势
①DNA探针多克隆在质粒载体中,制备方法简便;②DNA探针相对RNA探针(RNA probe)而言不易降解,一般能有效抑制DNA酶活性;③DNA探针的标记方法较成熟,可用同位素或非同位素标记,有多种方法可供选择。
“DNA探针”的性能优势
①DNA探针多克隆在质粒载体中,制备方法简便;②DNA探针相对RNA探针(RNA probe)而言不易降解,一般能有效抑制DNA酶活性;③DNA探针的标记方法较成熟,可用同位素或非同位素标记,有多种方法可供选择。
DNA探针的来源介绍
DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本身,称为基因组探针（genomic probe）；另一种是从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNA探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。此外,还可在体外人工合成碱基数不
“DNA探针”的制备过程
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别
DNA探针的制备方法
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针，常常是比较烦琐的。以细菌为例，细菌的基因组大小约为5×106碱基，约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后（如用限制性内切酶做不完全水解）分别
“DNA探针”的技术依据
DNA探针根据其来源分为3种:一种来源于基因组中的基因本身,称为基因组探针(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一种是从相应的基因经转录获得mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNA探针(cDNA probe);此外,还可在体外人工合成20～50个碱基的与基
DNA探针的功能特性
DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段,可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以
什么是“DNA探针”？
DNA探针(DNA probe)是最常用的核酸探针,为长度在几十到几百甚至上千碱基对的单链或双链DNA,用特殊示踪剂(如同位素、酶或有色基团)进行标记;在适当的pH值、温度和离子强度下,DNA探针利用分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性,能与待测样本中互补的非标记单链DNA或RNA以氢键结合
DNA探针的标记实验
探针标记法 实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一
关于DNA探针的应用介绍
DNA探针可以用来诊断寄生虫病，现场调查及虫种鉴定，可用于病毒性肝炎的诊断，遗传性疾病的诊断，可用于检测饮用水病毒含量。具体方法：用一个特定的DNA片段制成探针，与被测的病毒DNA杂交，从而把病毒检测出来。与传统方法相比具有快速、灵敏的特点。传统的检测一次，需几天或几个星期的时间，精确度不高，而
DNA探针的标记实验
核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀
DNA探针的标记实验
实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。
“DNA探针”的分类及介绍
DNA探针分为两类:同位素标记的探针和非同位素标记的探针。同位素标记的探针通常有很高的放射比活性,杂交的灵敏度高,但使用期限短,且有放射性危害,污染物处置困难,需要特殊的仪器和设备,不适用于普通实验室。近年来非同位素标记法得到很大发展,如酶促标记法(如生物素、地高辛标记法)和化学标记法(如荧光生物素
DNA片段探针的应用实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 杂交液洗膜液仪器、耗材 注射器超声仪水浴锅实验步骤 1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸1
DNA探针的技术优势
①DNA探针多克隆在质粒载体中，制备方法简便；②DNA探针相对RNA探针（RNA probe）而言不易降解，一般能有效抑制DNA酶活性；③DNA探针的标记方法较成熟，可用同位素或非同位素标记，有多种方法可供选择。
DNA探针的种类及其特点
核酸探针按性质划分可分为基因组 DNA 探针、cDNA 探针、RNA 探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类。作为诊断试剂,较常使用的是基因组 DNA 探针和 cDNA 探针。其中,前者的应用最为广泛,它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的 DNA 后将其克隆到质粒或噬菌体载体中
DNA探针检测法的原理
原理：碱基互补配对。。探针：DNA单链－化学连接的标记基团探针和目标DNA（经过加热，分成单链）混合，探针结合的目标DNA就会被标记
DNA片段探针的应用实验
甲酰胺法 水溶液中杂交 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA探针原位杂交
1、4—6微米切片,用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鲜二甲苯脱蜡,10minX2（趁热脱蜡） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空气干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释,浓度为25μg/ml）,37℃消化1
凝胶迁移实验中需要用到什么试剂？
凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe/sup系统
EMSA(PROMEGA)
凝胶迁移实验以下问题是以Promega公司试剂盒为例。[InstallDir_ChannelDir]mob/72360.shtml1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初
DNA基因探针的克隆方法介绍
对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的第一步是分离纯化蛋白质，然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列，然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选，阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所
DNA探针标记常用试剂的配制
（1）10 ×缺口平移缓冲液：200mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl2；100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。 （2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl；10mmol/l Tris-HCl,pH7.4； 11mmol/L
关于DNA探针的主要优点介绍
对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的第一步是分离纯化蛋白质，然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列，然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选，阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织