聚合酶链式反应（PCR）各种热启动酶存在的意义
各种热启动酶存在的意义市场上热启动的酶种类很多,但新手并不完全了解热启动酶存在的意义。非热启动的Taq酶在较低温度时也有活性:我有一本1992年出版的《PCR基因扩增实验操作手册》中提到,酶在70度时的合成速度为60核苷/秒/酶分子,55度时为22,37度时为1.5,22度时为0.25。也就是说此时引物还没有正常配对(其可能错误配对),而酶已经开始合成了,其合成的产物就会成为以后扩增中的非特异模板。则热启动酶只有在95度高温一段时间后,其酶活动才启动起来,故名:热启动酶。这也是为什么进行PCR反应加样时,各种试剂要在低温下加样。但是不是在进行PCR反应加样时维持低温就不需要热启动酶了呢?答案是也不尽然。一般PCR仪在运行开始后热盖加热过程中,模板温度是不控制的。由于热盖的加热需要1.5分钟以上,且热盖温度一般设在105度,必然会引起模块温度的上升,一般会到30-35度,环境温度高时更甚。也就是说设计不完备的仪器也会提高非特异性反......阅读全文
聚合酶链式反应（PCR）快速PCR技术与快速PCR仪的区别
快速PCR技术与快速PCR仪的区别。 1、模块升温和降温度时间 PCR仪一般会标明升温速度和降温速度,但标的大多是最大变温速度,也就是说是瞬间达到的速度。而与实验相关的平均升降温速度只有极少量厂家标明。以平均2度和4度(能做到平均升降温4度的仪器极少)来计算,从95度降到55度,分别是20秒
聚合酶链式反应（PCR）PCR产物电泳条带分析
PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析,电泳后一般有以下几种条带:1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有,一般不呈现为细带,为发散状;如果目的扩增产物带和引物带都很亮,可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点,条带清晰,但如果扩增产物小于100bp时,产物与引物二聚
聚合酶链式反应（PCR）的概念和历史
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,
聚合酶链式反应（PCR）扩增仪的分类
普通的PCR仪一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的基因进行扩增。(1)梯度PCR仪一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通PCR仪。用途:研究未知DNA退火温度的扩增。(2)
聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段
一、实验目的1．学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法。2．理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性。3．了解引物设计的一般要求。二、实验原理多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理类似于DNA的变性和复制过程，即在高温（93-95℃）下，待扩增的
聚合酶链式反应（PCR）反应五要素
PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
聚合酶链式反应PCR原理是什么？
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
聚合酶链式反应体外扩增DNA：PCR
聚合酶链式反应体外扩增DNA1. 按以下次序，将各成分加在0.5 ml灭菌离心管、扩增管或灭菌滴定板的孔内混合：10×扩增缓冲液 5μl20 mmol/L 4种dNTP混合液（pH 8.0） 1μl20 μmol/
热启动PCR的原理应用优缺点
1.热启动PCR概述：尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚 合酶在室温仍然有活性。因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。 热启动就是PCR仪达到变性温度再加入Taq DNA聚合酶，从而抑制一种基本成分延迟DN
PCR（聚合酶链式反应）的反应方法介绍基本的PCR方法
由于各种PCR反应条件(如PCR扩增次数、温度、Taq DNA聚合酶的浓度、引物、氯化镁以及模板DNA)变异极大,应根据具体情况,对各种PCR反应条件进行相应调整。按以下次序,将各成分加入0.2 ml灭菌扩增管中:成分 体积 终
聚合酶链式反应（PCR）PCR反应所需时间的决定因素
在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间决定于以下几个因素: 1、模块升温和降温时间 2、模块与PCR管内温度平衡时间 3、延伸时间 4、循环次数
聚合酶链式反应（PCR）的原理和具体过程
原理就是DNA半保留复制吧过程只要记住1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物
基因的PCR扩曾反应（聚合酶链式反应）
实验原理： 聚合酶链式反应（PCR，polymerase chain reaction）实质是体内DNA复制的体外模拟。当双链DNA变性为单链以后，DNA聚合酶以单链DNA为模版，并利用反应混合物中的四种dNTP，以与模板互补的寡聚核苷酸链为引物，合成新的DNA互补链。新合
聚合酶链式反应（PCR）循环参数有哪些？
预变性模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。 变性步骤循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。 引物
聚合酶链式反应（PCR）引物设计软件介绍
Primer Premier5.0 （自动搜索）vOligo6 （引物评价）vVector NTI SuitvDNAsisvOmigavDNAstarvPrimer3 （在线服务）
聚合酶链式反应（PCR）出现假阴性的原因分析
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及溴乙锭的使用， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
聚合酶链式反应（PCR）最佳复性温度的选择标准
最佳复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。在使用温度梯度的方法寻找最佳复性温度时,新手往往会选择扩增产物最多的温度条件,然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是最佳复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增,通过温度梯度实验发现,能扩增出来的温度范
逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）
实验概要提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因
PCR（聚合酶链式反应）反应方法注意事项
1. PCR引物设计： 引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳，可能导致扩增产物不足，甚至扩增失败，其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体，此又成为PCR反应的竞争性产物，从而进一步抑制PCR产物形成。 在引物设计时必须考虑以下几个因素，其中最重要的是引
热启动PCR的原理应用及优缺点介绍
1.热启动PCR概述：尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚 合酶在室温仍然有活性。因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。 热启动就是PCR仪达到变性温度再加入Taq DNA聚合酶，从而抑制一种基本成分延迟DN
简述聚合酶链式反应检查的临床意义
PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。 异常结果： 各种疾病所致的异常，例如梅毒。 ①一期梅毒。即硬下疳 ，潜伏期
原位聚合酶链式反应（in－situ－PCR）和原位反转录聚合酶...
原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式反应原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式反应（in situ RT-PCR）操作规程 （一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤
聚合酶链式反应（PCR）引物设计的基本原则
引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。引物内部不应出现互补序列。两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。引物与
聚合酶链式反应（PCR）扩增和扩增产物克隆
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤：(1) 变性(Denature)：目的双链DNA片段在94℃下解链；(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过
聚合酶链式反应（PCR）－检测肉毒梭菌技术
是运用PCR方法检测肉毒神经毒素基因以鉴定肉毒梭菌，只需2～3天。特别是基层CDC在购买不到试验动物的情况下，PCR所具有快速、简便、特异型强的优点无疑可作为肉毒中毒的辅助检测手段和一项有价值的指标。P．Fach（1993）报道，应用PCR可检出食品样品的肉毒梭菌A型菌株。赵晋、郭宗琪、杨小蓉等（2
原位聚合酶链式反应（in－situ－PCR）和原位反转录
一、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。二、操作流程（一）原位PCR步骤1、预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织37℃ 30min； （5）梯度酒精脱水，
PCR（聚合酶链式反应）反应方法所需材料和试剂
【材料】 1. 试剂和溶液 （1）10 × PCR缓冲液 500 mM 氯化钾 100 mM Tris-Cl (室温时pH 8.3) 15 mM 氯化镁 （2）10 mM脱氧三磷酸核苷(dNTPs) 溶液－含有所有四种dNTPs(pH 8.0) （3）耐热的DNA 聚合酶： ①
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
第一节 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上
biorad－PCR仪的热启动是什么意思
在传统的PCR反应中，极易发生引物错配和二聚体的形成，继而导致非特异性产物的扩增。热启动方法的问世有效地解决了这些问题，不仅优化了目标扩增产物，同时也减少了非特异性扩增，而且使得在传统PCR技术中较难扩增的单拷贝基因以及超长片段变得更简便。金思德 E1000-PCR仪是目前市场上唯一具有热启动功能的