蛋白质印迹的操作步骤
(1)蛋白质样品的制备 :有两种方法(直接加样缓冲液来裂解细胞,制备细胞蛋白质提取液)。(2)十二烷基酸钠-聚丙烯电泳(SDS-PAGE分离原理:根据蛋白质的分子差异)电泳:在直流电场作用下,带电的粒子向着与自身电荷相反的方向移动的现象。电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。(3)蛋白质的电转移 采用的固相支持物有很多种,常用的有硝酸纤维素膜和聚偏氟乙烯。可以根据需要转移蛋白质的分子量大小,选择不同孔径的硝酸纤维素膜。因为可以随着膜孔径的不断减小,这样膜对低分子量蛋白质的结合就更加牢固。蛋白质是带负电荷的,所以应该置于凝胶的负极侧,硝酸纤维素膜置于正极一侧,这样接通电源后,凝胶中的蛋白质就可以由负极向正极转移到硝酸纤维素膜上,完成蛋白质的转移工作。 重要影响因素:转膜缓冲液的组成对于蛋白质与膜和探针的结合起着非常重要的作用。(4)靶蛋白的免疫学检测:1.封闭:在硝酸......阅读全文
蛋白质印迹的操作步骤
(1)蛋白质样品的制备 :有两种方法(直接加样缓冲液来裂解细胞,制备细胞蛋白质提取液)。(2)十二烷基酸钠-聚丙烯电泳(SDS-PAGE分离原理:根据蛋白质的分子差异)电泳:在直流电场作用下,带电的粒子向着与自身电荷相反的方向移动的现象。电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。(3)蛋白质的电转移 采用
蛋白质印迹法操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
1.SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2.匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3.转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
免疫印迹法试验操作步骤
一蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。三转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平
Southern印迹技术原理和操作步骤
实验原理:Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物（如硝酸纤维素膜、尼龙膜）上，使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段，进行琼脂糖凝胶电泳，各片段因分子量不同而彼此分开，然后经碱处理凝胶，使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将
代做实验|蛋白质印迹实验具体操作步骤
蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后，在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上，经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合，经洗涤后，再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合，进一步洗涤后，通过放射自显影或原
代做实验|蛋白质印迹实验具体操作步骤
蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后，在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上，经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合，经洗涤后，再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合，进一步洗涤后，通过放射自显影或原位酶反
蛋白质印迹免疫分析（Western－Blot－Anglysis）原理和操作步骤
【基本原理】 蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后，在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上，经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体作为探针与之结合，经洗涤后，再将滤膜与二级试剂—放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联抗免疫球蛋白抗体结合，进一步洗涤后，通过放射自显影或原
免疫印迹法实验的操作步骤
一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。三转移：（半干式转移）1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平
免疫印迹法的操作步骤有哪些
一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。 二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。 三转移：（半干式转移） 1、电泳结束后将胶条割至合适大小
电泳做Western免疫印迹操作步骤
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。1、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）
Western印迹法（试剂配制和操作步骤） 这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合
蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤
实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或N
蛋白质印迹法的含量测定步骤介绍
1、制作标准曲线（1 ）从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。（2） 取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。（3 ）按下表在各管中加入各种试剂。0μg2.5μg5.0μg10.0μg20.0μg40.0
蛋白质印迹（western－blot）技术实验步骤
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（western blot），它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹（western blot）具有SDS-
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）5
（三） SDS－PAGE电泳（1） 清洗玻璃板：一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。（2） 灌胶与上样1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。）2、按前面方法配10％分离胶，加入
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）（下）
（二）使用液单去污剂裂解液（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％SDS，1mmol/L PMSF）： 1mol/L Tris•HCl（pH8.0）2.5mlNaCl 0.438g10%
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）4
操作步骤： （一） 蛋白样品制备 （1） 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 2、每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1m
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）2
（二）使用液单去污剂裂解液（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100?g/ml PMSF）：1mol/L Tris•HCl（pH8.0） 2.5mlNaCl 0.438gTritonX－100 0.5ml蒸馏水至 50ml混匀后
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）（上）
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、电动匀
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）1
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻
Western－免疫印迹实验原理和操作步骤
[实验原理]Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）6
（五）免疫反应（1）将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。（2）将一抗用TBST稀释至适当浓度（在1.5ml离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）3
10X丽春红染液丽春红S 2g三氯乙酸 30g磺基水杨酸 30g蒸馏水至 100ml使用时将其稀释10倍。TBS缓冲液（100mmol/ L Tris?HCl pH7.5,150mmol/L NaCl）1 mol/ LTris•HCl（pH7.5） 10mlNaCl 8.8g蒸馏水至 1000ml
免疫印迹法的操作步骤及注意事项
操作步骤 一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。 二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。 三转移：（半干式转移） 1、电泳结束后将胶条
免疫印迹法实验的操作步骤和注意事项
操作步骤 一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。 二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。 三转移：（半干式转移） 1、电泳结束后将胶条