实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十三
做一个模拟胃内容物中药物反应试验,需要动态测定某药品含量变化。分析时碰到一个棘手问题,进样量同样用 20ul,用对照品进样时色谱峰形不错,进样品时却一直不能得到好的峰形。后来分析是模拟胃内容物样品的酸度过高的因素,可我通过稀释的方法让样品酸度和流动相接近,虽然峰形没问题了,却发现因稀释导致分析物在样品中含量下降,低于最低检测限了,如何是好呢?答:稀释很方便,但灵敏度更高的检测器不容易找,不过还是有个简单的解决方案。当用流动相稀释样品时,只要稀释后样品中有机相含量比流动相中的有机相比例低 10 个百分点以上(如流动相中甲醇含量是 40%,则样品中甲醇含量一定要低于 30%),样品流动会被色谱柱进口端延缓或阻挡,称为 “柱上富集”。由于“柱上富集” 作用的存在,这种情况下进行大体积样品进样,可避免样品溶剂组成和流动相一样时进样量过大产生的“峰展宽”。针对你提的这个实例,可用稀的 NaOH 溶液调节样品 pH 和流动相匹配,......阅读全文
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十三
做一个模拟胃内容物中药物反应试验,需要动态测定某药品含量变化。分析时碰到一个棘手问题,进样量同样用 20ul,用对照品进样时色谱峰形不错,进样品时却一直不能得到好的峰形。后来分析是模拟胃内容物样品的酸度过高的因素,可我通过稀释的方法让样品酸度和流动相接近,虽然峰形没问题了,却发现因稀释导致分析物在样
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十三
滤膜的材质分了这么几种:再生纤维素、聚四氟乙烯、硝酸纤维和醋酸纤维等,之前只知道有有机系和水系之分?各种不同材质的滤膜适合于什么样的样品?答:再生纤维素膜:具有蛋白质吸收低,适用于水溶性样品和有机溶剂;聚四氟乙烯:适用于所有有机溶剂,酸和盐;尼龙 66:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可用于强酸,7
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十三
填料方法的前三种都是湿法吗,能不能对四种填充方法做一个简短的说明?资料显示:在正常条件下,填料粒度>20µm 时,干法填充制备柱较为合适;颗粒
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十三
新出厂液相色谱柱,保护溶剂一般是什么?怎样进行平衡清洗比较好,一般要平衡多长时间比较好?答:柱子类型不同,保存溶剂也会不一样吧,具体要看说明书的说明。对于反相柱,一般用甲醇(乙腈)保存,也有用 80% 左右甲醇浓度的甲醇 / 水保存的。一般用流动相平衡冲洗 10-20 个柱体积即可(注意:柱体积不等
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十三
据说液相色谱柱柱压达到一定高度就不能使用了,请问一般达到多高,用甲醇和乙腈是不是不一样?答:柱压不是色谱柱不能使用的唯一因素,分离度才是最重要的。柱压只要没高到仪器不能承受的地步,例如超过 300bar,就可以一直使用。甲醇的粘度比乙腈高,同样状况的柱子,如果用甲醇做流动相,柱压可能超了,换用乙腈会
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十三
色谱柱的接头,出口处用的是 peek 接头,请问都用 peek 接头不行么,为什么?答:都用 PEEK 接头我认为都可以的,当然 PEEK 接头的质量要过关。有人认为 PEEK 接头不耐压,估计是针对品质不好的产品说的。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十三
同样类型柱子还有长度,粒径等差异,这些该怎么去选择?答:长度和粒径都是用来改变柱效的,选择原则是够用就好。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十三
采用国标用 C18 柱测定辣椒精辣度,将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精,请问乳化剂对 C18 柱是否有影响?答:乳化剂和离子对试剂类似,有极性端和非极性端,肯定会对 C18 柱有影响。不过如果辣椒精是极性物质,乳化剂的存在到可以提高其在 C18 柱上的保留能力。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十三
氨基柱在进酸性样品时,很伤柱子,如使用一段时间后,柱效降低,峰形改变,如何恢复?答:氨基柱测酸性样品,应该是用氨基柱的 HILIC 模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议:用 5-10 倍的柱体积的含 0.5-1
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七
在用液相色谱同时分离多种组分时,怎么通过条件色谱条件使各个峰达到比较理想的分离效果?答:这是方法开发的大问题。方法开发建立,要做的就是:针对分析物和基体的情况不同,选择色谱柱类型和分析条件,包括流动相溶剂类型、组成比例、pH 值、温度和流速等参数的确定。这方面的问题,要讲起来内容非常多。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十
C18 柱,后面黑色的是我以前跑的图,前面是我现在跑的图形,完全一样的东西,只是流动相不是一批配的(流动相的成分没变),中间柱子别人用过了,峰型怎么发生了这么大的变化啊?可能的原因是什么啊?是不是柱子出了问题啊?答:从两个图对比很明显可以看出是柱效严重下降,且伴有肩峰。不同时间配的流动相,如果成分
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十四
用乙腈作流动相时,只要那个乙腈比例稍高一点,比如 20%,即使测量波长高于乙腈截止波长比较多,也会产生比较大的溶剂峰,这怎么回事?答:如果出现溶剂峰,对你的分析结果没任何影响,那就让溶剂峰在那儿好了。或者你用规定的溶剂溶解提取样品后,再用流动相稀释一下样品,如果稀释后检测限能达到的话。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十六
同样都是 C18 柱子,液相色谱柱和 SPE ，有什么区别?答:HPLC 柱子和 SPE 小柱的对比:对比项目 HPLC SPE柱管 不锈钢管 塑料管粒径(um) 3,5,10
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十
柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢?原来也讨论过这个问题,我也拆下来清洗过,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了,但使用寿命会不会减少呢?答:柱头污染了,就取出污染的,再装一些填料。因为加入你刮了些填料,那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多,仅表面,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四
不同的基质杂质含海量是不同的,我用 C18 分析时有可能一次就污染了,我用高流速,和反向冲洗都解决不了,是不是这根柱子就废了,有没有其他的办法?答:高流速反向冲洗是对的,关键你用了什么溶剂冲洗呢?用原来的流动相冲洗肯定不管用,要不然就不会累积在柱子上了。你应该用流动相中的强溶剂 B 冲洗,如果不行,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二
如果在溶剂过滤时把水膜当成有机膜了溶解了而且这样的溶剂又做有机相用了,造成 C18 柱压由 1000 升到 3000,流动相是乙腈和水,问一下这样的柱子还能用么?有没有什么补救方法?答:溶解的膜作为了颗粒物堵塞筛板,引起柱压上升,也只有反冲一下,如果能把堵在筛板上的膜残渣冲走,柱压下降了就 OK 了
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十
正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适?答:短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中,一般是正己烷和极少量的异丙醇。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题一
保护柱和预柱的作用是不是一样的,如果不一样有什么区别么?保留时间漂移多少为可以接受的范围?答:保护柱一般带填料,相当于一根缩短了的色谱柱(一般是 1-2cm 长度),卡套里可更换的柱芯,柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队,流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物,保护柱就自
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六
是样品过载问题, 按药典检测方法检验一些药品有关物质时, 都要注入高浓度的供试液, 这样往往使得柱过载而峰变形, 按老师的方法减小浓度和注入量均是不允许的, 怎么处理这问题?答:药典方法中注入高浓度供试液测定有关物质,提高注入浓度是为了把杂质峰的信号增强。有时候为了把杂质峰显现出来,主峰因过载有所变
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十
普通的 C18 柱能作为正相色谱柱使用吗?正相色谱体系中最常用也最普通的是那种色谱柱。正相柱在使用过程中与反向柱相比有什么需要注意的地方?答:普通 C18 柱作为正相柱使用,我还没听说过。正相色谱分离模式是指固定相的极性比流动相的极性大,反过来,流动相极性大就是反相。C18 固定相属于疏水性相对比较
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三
还有溶剂中的金属过滤头生锈了,会有什么影响?会不会影响到柱子的寿命,金属离子和柱子有没有什么反应? 答:我觉得你就把锈当成颗粒物污染的一种,会导致拖尾、柱压上升等。溶解的金属离子一般在反相柱上没有什么保留能力,马上就会被冲出柱子,不会和固定相或者和硅胶基质反应。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十一
流动相与柱子如何才能做到匹配,达到最好的分离效果。目前我们实验室有购买好的色谱柱,可是对样品的分离效果不是很好。答:不同填料的色谱柱都有自己的选择性,相同填料不同厂家以及相同厂家不同品牌之间的选择性都是不一样的,一般情况下根据物质的性质将分离的大方向如:正相分析或者反相分析,确定后,一般可以根据调节
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十
C18 柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,这样做的目的是什么呢?是先用溶剂活化吗?然后再用样品?还有测定短肽总是冲出来,该怎么解决呢?就是和溶剂峰出在一起,或者出在溶剂峰之前。答:C18 柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,因为色谱柱到达用户手中时,时间长短不一,在存储和运输的过程中,可能存
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十
常规 LC 的柱子粒度小,柱效高,现在有 3.5um 的常规柱,不知道用 3.5um*250 的压力与 4.6um 的压力相差多少?答:一般柱子 4.6mmx250mm 指的是其内径和长度。粒径才用 um 的单位,但一般标的是 5um,也有 3.5um 的。其它条件一样,光粒径是 3.5um 和 5
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十九
流动相里之前有酸的,做完后单纯用乙腈冲洗,能把酸冲洗干净吗?之前他们是这样冲的,现在怀疑柱子塌陷了,会不会是长时间在酸性环境中造成的呢?答:流动相里有酸,应该先用纯水或 80:20 的水 / 乙腈溶剂冲洗吧。如果一直在酸性环境,固定相容易流失,造成保留时间前移和其它色谱性能下降。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十五
RP18 和 C18 的区别?答:RP18 和普通 C18,肯定有其不同的适应性,农药种类这么多,可能大部分农药两者都能用,有些就不一定。你问的 C18 适用于哪些农药,应该从相关农药分析方面的书籍手册中可以查到具体什么农药用什么色谱条件合适,其中里面肯定有选择什么类型柱子,我这边没办法一一列举。液
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十
柱子才用了四个月,是什么原因呢?是不是塌陷了呢?有什么补救的办法吗?答:用了四个月峰形拖尾是很正常的,需要维护清洗一下色谱柱以清除引起拖尾的柱头污染。如果柱头塌陷,则不好办,从其它废柱子里取点填料填补塌陷,可以一试,但效果不一定好。色谱柱是耗材,测定进样针数如果达到 500 以上了,也算是物有所值,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十
超高压快速高分离度色谱柱是不是未来液相色谱柱普及应用的一个发展趋势?答:这是个大话题,今后使用会越来越多是肯定的,但是否会替代普通压力的液相还有争议。超高压也有使用上的不便,譬如容易堵,对设备硬件要求高等。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十八
磺化交联的苯乙烯 - 二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在储存过程未注意放在冰箱中,导致发霉后,柱效急剧下降,能何种方法将此色谱柱修复好?答:聚合物柱子因为不怕酸碱,就直接用强酸强碱清洗。如果是 H 型,用 1M 硫酸冲洗;如果是 Ca 型,可以先用 1M 硫酸冲洗,再用 EDTA 钙盐转换回 Ca 型
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十七
在碱性条件下硅胶溶解,又生成硅羟基的机理是什么?反应方程式如何写?答:二氧化硅溶解的反应式是:SiO2+2OH-=Si032-+H2O或者表示成水解的形式:SiO2+H2O=Si032-+2H+这说明硅胶会在碱性条件下溶解而生成硅酸根。但我们这里说的是硅胶颗粒表面的部分溶解,含有键合固定相的硅胶原表