离子交换色谱实验常见的问题
一、纯化后样品纯度不高怎么办？ 若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较大，目标蛋白通过穿透步骤获得，通过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较小，目标蛋白通过洗脱步骤获得，过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；再调节洗脱溶液的离子强度和pH，使目标蛋白与杂蛋白逐渐分离；选择合适的离子交换填料及粒径；柱没有经过起始缓冲液的充分平衡；降低洗脱流速；调整样品溶液黏度。 二、纯化后的蛋白收率较低怎么办？ 调整样品pH，使样品pH 与起始缓冲液pH 保持一致；改变洗脱模式，如将线性梯度模式改变为阶段性梯度洗脱；改变洗脱方法，如将pH 洗脱方法改为盐梯度洗脱方法；改变洗脱强度。 三、样品过于粘稠怎么处理？ 样品过于粘稠可能是由于含有的蛋白太多，或者含有大分子量的核酸分子，通常有以下解决方法：增加裂解前稀释细胞所用体积；增加裂解时间，直至黏度下降，或者增加DNase......阅读全文
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八十
柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢?原来也讨论过这个问题,我也拆下来清洗过,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了,但使用寿命会不会减少呢?答:柱头污染了,就取出污染的,再装一些填料。因为加入你刮了些填料,那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多,仅表面,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五
哪些原因会造成色谱峰变宽、峰高变低,有哪些解决办法?答:确实是这样,如果其它色谱条件没有改变,柱效下降是导致峰变宽的主要原因。对于易电离的极性物质,如果流动相 pH 选择不合适,分析物既有中性分子态存在,又有离子态存在,峰也会变宽变矮。色谱柱使用后柱效逐步下降是正常现象,如突然降低则属异常。柱效下降
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三十
超高压快速高分离度色谱柱是不是未来液相色谱柱普及应用的一个发展趋势?答:这是个大话题,今后使用会越来越多是肯定的,但是否会替代普通压力的液相还有争议。超高压也有使用上的不便,譬如容易堵,对设备硬件要求高等。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二十
柱子才用了四个月,是什么原因呢?是不是塌陷了呢?有什么补救的办法吗?答:用了四个月峰形拖尾是很正常的,需要维护清洗一下色谱柱以清除引起拖尾的柱头污染。如果柱头塌陷,则不好办,从其它废柱子里取点填料填补塌陷,可以一试,但效果不一定好。色谱柱是耗材,测定进样针数如果达到 500 以上了,也算是物有所值,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十六
同样都是 C18 柱子,液相色谱柱和 SPE ，有什么区别?答:HPLC 柱子和 SPE 小柱的对比:对比项目 HPLC SPE柱管 不锈钢管 塑料管粒径(um) 3,5,10
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六十
普通的 C18 柱能作为正相色谱柱使用吗?正相色谱体系中最常用也最普通的是那种色谱柱。正相柱在使用过程中与反向柱相比有什么需要注意的地方?答:普通 C18 柱作为正相柱使用,我还没听说过。正相色谱分离模式是指固定相的极性比流动相的极性大,反过来,流动相极性大就是反相。C18 固定相属于疏水性相对比较
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十九
流动相里之前有酸的,做完后单纯用乙腈冲洗,能把酸冲洗干净吗?之前他们是这样冲的,现在怀疑柱子塌陷了,会不会是长时间在酸性环境中造成的呢?答:流动相里有酸,应该先用纯水或 80:20 的水 / 乙腈溶剂冲洗吧。如果一直在酸性环境,固定相容易流失,造成保留时间前移和其它色谱性能下降。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四
不同的基质杂质含海量是不同的,我用 C18 分析时有可能一次就污染了,我用高流速,和反向冲洗都解决不了,是不是这根柱子就废了,有没有其他的办法?答:高流速反向冲洗是对的,关键你用了什么溶剂冲洗呢?用原来的流动相冲洗肯定不管用,要不然就不会累积在柱子上了。你应该用流动相中的强溶剂 B 冲洗,如果不行,
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题五十
常规 LC 的柱子粒度小,柱效高,现在有 3.5um 的常规柱,不知道用 3.5um*250 的压力与 4.6um 的压力相差多少?答:一般柱子 4.6mmx250mm 指的是其内径和长度。粒径才用 um 的单位,但一般标的是 5um,也有 3.5um 的。其它条件一样,光粒径是 3.5um 和 5
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十二
峰形后拖尾是什么原因造成的?答:[柱物理损坏]色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。[柱内填料污染]流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。流动相所用的各种溶剂至少是分析纯,尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用 0.45um 溶剂微孔
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二
如果在溶剂过滤时把水膜当成有机膜了溶解了而且这样的溶剂又做有机相用了,造成 C18 柱压由 1000 升到 3000,流动相是乙腈和水,问一下这样的柱子还能用么?有没有什么补救方法?答:溶解的膜作为了颗粒物堵塞筛板,引起柱压上升,也只有反冲一下,如果能把堵在筛板上的膜残渣冲走,柱压下降了就 OK 了
实验室分析仪器液相色谱仪常见问题－色谱峰展宽
①样品体积过大:用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%。②在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散。③数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点。④流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相。⑤检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器。⑥保留时间过长:等度洗脱时增加强溶剂含量,也
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十
正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适?答:短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中,一般是正己烷和极少量的异丙醇。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题九
柱子的柱效影响大吗?一般柱子的柱效规定是多少的呀!理论塔板数一般要达到多少呢?主要有那些因素影响它。答:柱效是柱子性能好坏的一个重要体现指标。柱效会影响分离度,当然是峰形越尖锐,柱效越高,和其它峰越容易分开。另外柱效高峰形尖锐,对峰面积的积分误差就小,甚至可以用峰高来定量。 一般 C18 柱,在测定
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题八
流动相中加入四氢呋喃对柱子有损害吗? 我现在分析一样品流动相中用到 20% 的四氢呋喃才能把峰分到基线. 但柱子只能用一个星期分离效果就不好了. 请问是四氢呋喃损坏了柱子吗?答:四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂,比甲醇和乙腈都强很多。在流动相中加入 THF 能改善某些难分离的物质对的
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十七
在碱性条件下硅胶溶解,又生成硅羟基的机理是什么?反应方程式如何写?答:二氧化硅溶解的反应式是:SiO2+2OH-=Si032-+H2O或者表示成水解的形式:SiO2+H2O=Si032-+2H+这说明硅胶会在碱性条件下溶解而生成硅酸根。但我们这里说的是硅胶颗粒表面的部分溶解,含有键合固定相的硅胶原表
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题六
是样品过载问题, 按药典检测方法检验一些药品有关物质时, 都要注入高浓度的供试液, 这样往往使得柱过载而峰变形, 按老师的方法减小浓度和注入量均是不允许的, 怎么处理这问题?答:药典方法中注入高浓度供试液测定有关物质,提高注入浓度是为了把杂质峰的信号增强。有时候为了把杂质峰显现出来,主峰因过载有所变
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十八
磺化交联的苯乙烯 - 二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在储存过程未注意放在冰箱中,导致发霉后,柱效急剧下降,能何种方法将此色谱柱修复好?答:聚合物柱子因为不怕酸碱,就直接用强酸强碱清洗。如果是 H 型,用 1M 硫酸冲洗;如果是 Ca 型,可以先用 1M 硫酸冲洗,再用 EDTA 钙盐转换回 Ca 型
色谱仪的维护与保养常见问题
我们不应该在仪器有故障反映时才想到应该对仪器进行维护，不仅要定期有目的地做，还要树立一个观念 ， 维护与保养的一个重要作用就是保障保证一个良好的检测状态，确保得到准确的检测数据 ， 影响分析仪器的可持续运行有因素主要有： 1.易损件清理更换不及时； 2.硬件使用不科学； 3.仪
色谱仪的维护与保养常见问题
我们不应该在仪器有故障反映时才想到应该对仪器进行维护，不仅要定期有目的地做，还要树立一个观念 ， 维护与保养的一个重要作用就是保障保证一个良好的检测状态，确保得到准确的检测数据 ， 影响分析仪器的可持续运行有因素主要有： 1.易损件清理更换不及时； 2.硬件使用不科学； 3.仪
液相色谱样品预处理的常见问题
1、色谱图中出现无关的峰，原因有可能是样品过滤器带来污染，解决方法如下： （1）将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验； （2）改变过滤器类型； （3）采用交替清洗技术； 2、一些或全部化合物的峰比预期的小，尤其是低浓度的样品，原因可能是样品过滤器表面吸附下降，解决方法如下： （1）改变过
气相色谱工作站的常见问题
1、校正过程中出现提示某些峰的面积或者浓度为零。 检查组分表中所有组份峰的浓度是否已经全部设置完成，时间间隔设置是否合适，因为时间间隔设置的太大，则可能误判其他峰为组份峰，太小的话，则不够把所有浓度的组份峰完全的识别出来。总之时间间隔设置要恰到好处，不能太大也不能太小。 2、色谱工作站没有信号
液相色谱仪的常见问题有哪些？
液相色谱仪的常见问题：1、高效液相色谱仪是如何实现高效、快速、灵敏的？解：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏渡得到启发，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速；设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液
高效液相色谱仪的常见问题分析
常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。 1、柱压问题 柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳
实验室分析仪器离子色谱中常见问题分析
一、压力异常1、现象:无压力,流动相不流动1)保险丝断或电源问题2)柱塞杆折断3)泵头内有空气或流动相不足4)单向阀损坏或单向阀上粘附固体颗粒5)漏液6)压力传感器损坏(流动相流动正常,但无压力)2、现象:压力持续偏高或不断上升1)流速设定过高2)保护柱或色谱柱筛板堵塞3)流动相使用不当或有缓冲盐
实验常见问题解答汇集
BSP甲基化扩增得到的PCR产物可否直接测序，为什么需要构建TA克隆后测序？由于基因组DNA的每个CG位点甲基化程度各不相同，未发生甲基化的C会被重亚硫酸盐修饰成为U，而C若发生甲基化则不变，这样如果进行PCR产物测序就有可能在原有的C位点得到双峰图，无法确定甲基化的程度，必需通过回收PCR产物，进
载体构建实验常见问题大解析
大家是否在实验中经常遇到载体构建的各种问题，浪费大量的时间和精力，各种各样的问题让人头疼，海创科业小编作为科研老司机特意为各位科研君整理了载体构建实验常见问题及解决方法，希望能够帮助到大家。1. PCR载体构建大部分时候都要通过PCR的方法获取目的片段，扩增PCR的时候大家尽量选用高保真
ELISA试剂盒实验常见问题
ELISA顶用的蒸馏 水或去离子水，ELISA试剂盒包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定（如血清 、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。 血清标本可按常规方法采集，应留意避免溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血
实验分析方法离子交换色谱固定相的相关介绍
离子交换色谱固定相也称离子交换剂，主要有键合硅胶和聚合物两类。离子交换剂上的活性离子交换基团決定着其性质和功能，表1列出了一些主要的有机离子交換剂的类型和性质。表1 常见有机离子交换剂的类型和性质种类缩写官能团基质材料类型PKa值阳离子交换剂S—SO3—树脂强酸性SM—CH2SO3—树脂强酸性SE—
气相色谱常见问题及处理方法
一、气相色谱系统的基本组成是什么? 气相色谱系统的基本组成有： 1.气源：常用的有N2、H2、Air、Ar、He等高压气体钢瓶，也可采用氢气发生器、氮气发生器、无油空气泵； 2.气路控制系统：由开关阀、稳定阀、针形(调节)阀、切换阀和气阻、压力表、流量计等组成； 3.进样系统：即汽化室，