离子交换色谱实验常见的问题
一、纯化后样品纯度不高怎么办？ 若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较大，目标蛋白通过穿透步骤获得，通过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较小，目标蛋白通过洗脱步骤获得，过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；再调节洗脱溶液的离子强度和pH，使目标蛋白与杂蛋白逐渐分离；选择合适的离子交换填料及粒径；柱没有经过起始缓冲液的充分平衡；降低洗脱流速；调整样品溶液黏度。 二、纯化后的蛋白收率较低怎么办？ 调整样品pH，使样品pH 与起始缓冲液pH 保持一致；改变洗脱模式，如将线性梯度模式改变为阶段性梯度洗脱；改变洗脱方法，如将pH 洗脱方法改为盐梯度洗脱方法；改变洗脱强度。 三、样品过于粘稠怎么处理？ 样品过于粘稠可能是由于含有的蛋白太多，或者含有大分子量的核酸分子，通常有以下解决方法：增加裂解前稀释细胞所用体积；增加裂解时间，直至黏度下降，或者增加DNase......阅读全文
色谱柱在使用中最常见的问题
(1)色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染； (2)色谱柱头的填料被样品污染； (3)色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出； (4)流动相pH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。 解决办法如下： (1)如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至
气相色谱的常见问题和维护
气相色谱的常见问题和维护 一基线 1,基线向下漂移 可能的原因一:新色谱柱刚安装在设备上,基线续可能连续向下漂移几钟.这是正常现象。 建议采取措施:提高柱温箱温度至色谱柱的最高连使用温度附近,维持该温度到基线走势平稳。如果新色谱柱在初次使用中,以基线连续10分钟没有下降的趋势,应立刻冷却
实验室透析实验常见问题总汇
Q1：如何准备透析膜管？透析膜管的准备因膜管材质和生产工艺的差别而有所不同。注意，我们不推荐煮沸处理，因其可能损坏膜管并改变膜孔径。生物技术级RC、CE及PVDF膜可以用DI水冲洗15-30分钟，去除防腐剂叠氮化钠。Spectra/PorR 7 标准级RC膜已经预处理，去除了重金属和硫化物，只需在去
实验室分析方法液相常见问题色谱柱的维护
1. 如何进行色谱柱的维护?①建议检测前样品和流动相进行过滤。②建议每天做完样品后及时进行清洗。③常规检测:测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min,最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。④使用缓冲盐条件:a等度条件:使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。b梯
实验室分析仪器色谱柱的常见问题一
键合硅胶固定相的稳定性硅烷键合相的流失是由于硅烷键合于硅胶基质上的Si—O—Si键的水解,在高温、长值及水比例高的流动相中,离解加剧。因此稳定性与键合相的类型、流动相pH、所用缓种与有机改性剂的种类等有关,键合硅胶正相、反相、离子对和离子交换色谱柱的稳定差异。在相同条件下应用时,长链的烷基(如C18
做电泳实验常见条带问题分析
一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）： 形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。处理办法：待其充分凝固再做实验。二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）：形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。处理办法：可在两板之间加入适量缓
酵母双杂交实验常见问题
酵母双杂交实验常见问题 1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？ 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0
做电泳实验常见条带问题分析
一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）： 形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再做实验。 二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）： 形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干
高效液相色谱（HPLC）常见问题
1、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足：解决办法为增加样品量样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器检测器衰减太多：调整衰减即可。检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。检测
液相色谱仪使用常见问题
1、流动相不过滤 因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换
液相色谱仪常见问题分析
液相色谱仪问题的可能根源*流动相 *进样器 *在线过滤器 *色谱柱 *检测器 *样品*泵 *保护柱 *连接管线及接头 *软件 *其它偶然因素 判断故障与故障排除的原则规则一：确认问题至少发生两次以上。如果问题不重复出现，很难证实其确实是问题规则二：从z
高效液相色谱（HPLC）常见问题
1、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法样品量不足：解决办法为增加样品量样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器检测器衰减太多：调整衰减即可。检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。检测池
薄层色谱：常见问题解答
薄层色谱（TLC）作为一种快速、经济的分析技术，在化学、生物学和医药等领域中被广泛使用。尽管TLC操作简单，但在实际操作过程中，用户可能会遇到一些问题。本文将针对一些常见的问题进行解答，帮助用户更好地理解和应用TLC技术。 常见问题 1. 如何选择合适的固定相？ 解答： 固定相的选择取决于
高效液相色谱仪常见压力问题
一、色谱反压介绍 流动相流经管路及色谱柱时会有阻力，即所谓的反压，又称系统压力。 影响色谱系统反压的因素： 流动相的粘度是产生反压的主要原因，粘度越大，反压越高； 流速对反压的影响是线性关系，流速越大，反压越高； 温度对反压的影响是反比关系，温度升高，反压降低； 反压与色谱柱
实验室仪器移液器的常见的问题
1. 安装吸头时,用移液器在枪盒上用力敲击?装吸头时下压操作用力不能过猛,也无需敲击管嘴连件,只需将移液器管嘴对准吸头用力插进去左右轻轻旋转即可将吸头安装牢固。2. 在调节量程时,将量程调出标定范围?在设置量程时,所设量程在移液器量程范围内不可将按钮旋出量程,否则会卡住机械装置,损坏了移液器。 3.
氨基酸离子交换柱色谱分离实验
实验概要本实验介绍了氨基酸的离子交换柱色谱分离的原理和操作步骤等。实验原理本实验采用磺酸型阳子交换树脂（732型）分离酸性氨基酸（天冬氨酸Asp pI=2.97）和硷性氨基酸(赖氨酸Lys pI=9.74)的混合液。在pH5.3条件下，因为低于Lys的pI值，Lys可解离成阳离子挂在树脂上；高于
离子交换色谱
实验方法原理离子交换色谱是将离子交换基因（CM、SP、Q、DEAE等）键合于一定的惰性载体（纤维素、交联葡聚糖，交联琼脂糖等）之上，并以此作为固定相，依据样品所带电荷的不同，从而与固定相上的离子交换基团相互作用的程度不同而进行分离的一种色谱方法。离子交换色谱技术已广泛用于蛋白质、多肽、寡核苷酸、病毒
离子交换色谱
洗脱方式的选择,离子交换色谱洗脱方式有三种：一是改变缓冲液pH，使蛋白质从吸附状态变为解吸附状态。如在阴离子交换色谱中，通过降低流动相pH使吸附在柱子上的带负电荷的蛋白质带正电，从而达到解吸附，在阳离子交换色谱中则是通过升高流动相pH的方法达到解吸附；二是增加缓冲液的离子强度，将吸附强的分子从离子交
离子交换色谱
离子交换色谱 实验方法原理 离子交换色谱是将离子交换基因（CM、SP、Q、DEAE等）键合于一定的惰性载体（纤维素、交联葡聚糖，交联琼脂糖等）之上，并以此作
重点分析：实验试剂应用的常见问题
1. 测定范围 每种待测物都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，分析仪将显示结果超过范围的提示。表示试剂已经变质，应更换合格试剂。2. 底物耗尽 使用连续监测法、两点法测定酶活性时，若酶活性非常高，底物接近被耗尽，吸光度上升或下降会超过某一吸光度变化范围，监测期的吸光度将
PCR实验过程中常见的问题分析
开展 PCR 应具有一定的条件。需要一个正规的 pCR 实验室,采集标本、核酸提取、扩增及产物分析应在不同的房间进行；需有严密的防污染措施、假阳性和假阴性结果的质控等。实验者应具有一定的分子生物学理论知识及实验技能,能够及时发现和纠正实验中的问题。目前,我国在 PCR 应用中尤其是在临床诊断中存
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七
在用液相色谱同时分离多种组分时,怎么通过条件色谱条件使各个峰达到比较理想的分离效果?答:这是方法开发的大问题。方法开发建立,要做的就是:针对分析物和基体的情况不同,选择色谱柱类型和分析条件,包括流动相溶剂类型、组成比例、pH 值、温度和流速等参数的确定。这方面的问题,要讲起来内容非常多。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题二
如果在溶剂过滤时把水膜当成有机膜了溶解了而且这样的溶剂又做有机相用了,造成 C18 柱压由 1000 升到 3000,流动相是乙腈和水,问一下这样的柱子还能用么?有没有什么补救方法?答:溶解的膜作为了颗粒物堵塞筛板,引起柱压上升,也只有反冲一下,如果能把堵在筛板上的膜残渣冲走,柱压下降了就 OK 了
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题七十
正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适?答:短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中,一般是正己烷和极少量的异丙醇。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题三
还有溶剂中的金属过滤头生锈了,会有什么影响?会不会影响到柱子的寿命,金属离子和柱子有没有什么反应? 答:我觉得你就把锈当成颗粒物污染的一种,会导致拖尾、柱压上升等。溶解的金属离子一般在反相柱上没有什么保留能力,马上就会被冲出柱子,不会和固定相或者和硅胶基质反应。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题四十
C18 柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,这样做的目的是什么呢?是先用溶剂活化吗?然后再用样品?还有测定短肽总是冲出来,该怎么解决呢?就是和溶剂峰出在一起,或者出在溶剂峰之前。答:C18 柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,因为色谱柱到达用户手中时,时间长短不一,在存储和运输的过程中,可能存
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十四
用乙腈作流动相时,只要那个乙腈比例稍高一点,比如 20%,即使测量波长高于乙腈截止波长比较多,也会产生比较大的溶剂峰,这怎么回事?答:如果出现溶剂峰,对你的分析结果没任何影响,那就让溶剂峰在那儿好了。或者你用规定的溶剂溶解提取样品后,再用流动相稀释一下样品,如果稀释后检测限能达到的话。
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题十八
磺化交联的苯乙烯 - 二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在储存过程未注意放在冰箱中,导致发霉后,柱效急剧下降,能何种方法将此色谱柱修复好?答:聚合物柱子因为不怕酸碱,就直接用强酸强碱清洗。如果是 H 型,用 1M 硫酸冲洗;如果是 Ca 型,可以先用 1M 硫酸冲洗,再用 EDTA 钙盐转换回 Ca 型
实验室分析仪器液相色谱仪色谱柱常见问题九
柱子的柱效影响大吗?一般柱子的柱效规定是多少的呀!理论塔板数一般要达到多少呢?主要有那些因素影响它。答:柱效是柱子性能好坏的一个重要体现指标。柱效会影响分离度,当然是峰形越尖锐,柱效越高,和其它峰越容易分开。另外柱效高峰形尖锐,对峰面积的积分误差就小,甚至可以用峰高来定量。 一般 C18 柱,在测定
实验室分析仪器液相色谱仪常见问题－色谱峰展宽
①样品体积过大:用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%。②在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散。③数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点。④流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相。⑤检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器。⑥保留时间过长:等度洗脱时增加强溶剂含量,也