HPLC是做什么的？原理？操作方法？
HPLC是高效液相色谱，英文全称是High Performance Liquid Chromatography。该方法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中被用来做重要的分离分析技术。用途：高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。原理：高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析和分离。操作方法：如下图所示，溶剂贮器中的流动相被泵吸入，经梯度控制器按一定的梯度进行混合然后输出，经测其压力和流量，导入进样阀（器）经保护柱、分离柱后到检测器检测，由数据处理设备处理数据或记录仪记录色谱图，馏分收集器收集馏分，废......阅读全文
食品中香兰素的高效液相色谱仪(HPLC)检测方案
香兰素(Vanillin)，又名香草醛，为一种广泛使用的可食用香料，可在香荚兰的种子中找到，也可以人工合成，有浓烈奶香气息。广泛运用在各种需要增加奶香气息的调香食品中，如蛋糕、冷饮、巧克力、糖果;还可用于香皂、牙膏、香水、橡胶、塑料、医药品。 目前还没有相关报道说香兰素对人体有害。但是不可过量，据欧
HPLC法中，等度与梯度洗脱有什么区别
1、洗脱的改变与不改变的配比不同等度洗脱：流动相的组成比例和流速恒定不变。梯度洗脱：改变流动相的浓度配比。2、它们的定义不同等度洗脱定义：液相色谱操作中，等度洗脱即在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。与梯度洗脱对应。梯度洗脱定义：梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一
高效液相色谱仪HPLC流动相配制注意事项
一、流动相的选择 1、流动相的混合 双泵主要是在探讨流动相的配比或者梯度洗脱是比较方便，知道确切的液相色谱仪条件时，建议配好后使用的话，混合比较均匀，效果较好。 2、脱气 HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。 系统中气泡的产生：流动相本身
HPLC法同时测定杜仲叶中8种成分的含量
杜仲叶为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的干燥叶,收载于2015年版《中国药典》(一部),具有补肝肾､强筋骨的功能,可用于肝肾不足､头晕目眩､腰膝酸痛､筋骨瘘软等症的治疗｡杜仲是我国传统名贵滋补药材,传统药用部位为其树皮｡由于杜仲从种植到剥皮通常需要10年以上时间
HPLC常见问题和解决方法－压力持续偏高
压力持续偏高原 因解决方法1、流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a、在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板c、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度
日常工作中如何保养HPLC高压输液泵？
高压输液泵是液相色谱仪分析系统中重要单元部件，用于将流动相和样品输入到色谱柱和检测器中，从而使样品的一分析，其性能的好坏直接影响整个仪器和分析结果的可靠性。
半制备型hplc的最大上样量可以到多少
可以，但要考虑样品的极性大小选择适当的色谱柱和其它色谱条件，通常分析型HPLC进样一次可得到1mg样品;半制备型的HPLC视进样量而定，一般一次可得到不少于100mg的样品。选定合适的色谱条件是关键
HPLC常见问题和解决方法压力降为零
原 因解决方法1、电源问题1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足6、a、补充流动相b、更换入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀8、漏
半制备型hplc的最大上样量可以到多少
要考虑样品的极性大小选择适当的色谱柱和其它色谱条件，通常分析型HPLC进样一次可得到1mg样品;半制备型的HPLC视进样量而定，一般一次可得到不少于100mg的样品。选定合适的色谱条件是关键。
HPLC常见问题和解决方法色谱图异常汇总
A、 峰拖尾原 因解决方法1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反
安捷伦液相色谱仪HPLC系统的酸清洗和钝化
酸洗的目的之一是为钝化处理创造有利条件，保证形成的钝化膜。因为通过酸洗使不锈钢表面平均有10μm厚一层表面被腐蚀掉，酸液的化学活性使得缺陷部位的溶解率比表面上其它部位高，因此酸洗可使整个表面趋于均匀平衡，一些原来容易造成腐蚀的隐患被清除掉了。 但更重要的是，通过酸洗钝化，使铁与铁的氧化物比铬与铬的氧
中药材中黄曲霉毒素检测：HPLC（药典方法）
黄曲霉毒素危害：黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管
有效规避HPLC使用过程中的问题（二）
让我们再次回到OQ及PQ讨论。在仪器生命周期中需要对OQ及PQ的不同角色进行持续满足与支持，而实现这一目标具有多种选择。由USP中关于HPLC仪器的内容总结出PQ测试应：定义PQ测试的用户性能指标，以证明仪器可实现预期应用的无故障运行。 通常以实验室中的仪器应用为基础，基于良好的科学性，
HPLC法测定鲜切富士苹果中多酚类物质
方案优势 高效液相色谱法(HPLC)是利用不同物质在流动相 和固定相中的选择性分配实现对目标物的分离, 重复 性好、操作方便, 是现如今运用最广泛的用于多酚类物 质检测的方法。 采用标准方法/原理/步骤 苹果的鲜切加工 红富士苹果经自来水清洗后,在灭菌砧板上用灭菌的削皮刀削皮
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十）
反相高效液相色谱和质谱（MS）的联用为蛋白质/多肽分析提供了强大的工具。20世纪80年代，约翰·贝内特·芬恩和他的同事们开发了电喷雾离子源，使质谱与反相高效液相色谱得以联用。采用液相色谱-质谱联用的好处包括：质谱是非常灵敏的检测技术。 质谱可以提供所分离多肽/蛋白质的分子量。 质谱可利用分子
提高效率的方法转换从HPLC到UHPLC
从HPLC到UHPLC的方法转换来提高实验室工作效率，在科学研究和质量控制过程中常常要在HPLC高效液相色谱和UHPLC超高效液相色谱两种检测分析方法之间进行转换。现代化的HPLC高效液相色谱仪和它的控制软件支持用户将这种方法移植到其他系统中使用，接下来就和小析姐一起学习一下吧。 在制药和食品工
液相色谱仪HPLC紫外检测器需要信噪比指标
zui常用的检测器，目前市场上生产厂家及型号很多，厂家通常采用检测器的噪音，基线漂移等技术参数作为产品的灵敏度性能评价指标。考虑到样品的紫外吸收响应值主要与样品有关，与仪器的关系不大，一般认为这可以基本反映仪器在灵敏度方面的性能。本文在实验的基础上证明对同一样品各检测器的响应值实际上也存在不同程序的
SPEHPLC测定饲料中5种磺胺类药物
方案优势 采用SPE-HPLC-UV 测定饲料中磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉5种磺胺类药物的方法，简单快速，准确。 采用标准 国家相关标准 方法/原理/
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十三）
图17. TFA浓度对峰形和选择性的影响 洗脱液：加入如图所示的TFA，以20%~32%的乙腈（ACN）梯度洗脱，洗脱时间为15分钟。样品1.血管紧张素II 2.血管紧张素III3.血管紧张素I其它离子对试剂。尽管目前为止TFA仍是最常用的离子对试剂，但蛋白质/多肽分离有时会采用磷酸和七氟丁酸（H
简介高效液相色谱(HPLC）流动相的性质要求
（1）流动不会相应地改变填料的任何性质 低交联度离子交换树脂和排斥色谱填料有时会遇到一些有机相的膨胀或收缩，从而改变色谱柱填料床的性能。碱性流动相不能用于硅胶柱体系中，酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附柱体系中。 （3）必须与探测器配套。当使用紫外检测器时，所用的流动相在检测波长上不应吸收
实验室液相色谱仪(hplc)的日常维护保养
1.HPLC的日常操作条件： 温度：10—30℃; 相对湿度
HPLC法中，等度与梯度洗脱有什么区别
1、洗脱的改变与不改变的配比不同等度洗脱：流动相的组成比例和流速恒定不变。梯度洗脱：改变流动相的浓度配比。2、它们的定义不同等度洗脱定义：液相色谱操作中，等度洗脱即在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。与梯度洗脱对应。梯度洗脱定义：梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一
高效液相色谱仪(HPLC)检测水中的多环芳烃
高效液相色谱仪检测水中的多环芳烃;此方法适用范围：仅适用于水中的多环芳烃的检测取样； 取1000mL水样(富集时可根据水质情况适当增减)，加入5g氯化钠和10mL甲醇待净化。 净化； SPE柱 ：WelchromCI8E ( 500mg / 6ml ) 活化：10ml二氧甲烷、10ml甲醇以及 10
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（二）
色谱分析色谱技术已发展成一种强大的分离技术，能够分离大量蛋白质和多肽。但任何一种单独的色谱技术仍然只能分离出一小段蛋白质。因此，多种色谱技术的结合使用已成为蛋白质组分析中蛋白质分离的一种普遍方法。二维色谱在长期的蛋白质纯化模式的基础上，John Yates和同事开发了一种名为多维蛋白质鉴定技术（Mu
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十一）
HPLC-MS 联用的两个重要因素是电喷射接口的最佳流速及三氟乙酸对肽电离的影响 基本电喷雾接口的信号在5~10μL/min的流速区间上迅速下降（图28）。这与采用标准分析型HPLC柱的流速不相容。目前，商用电喷雾提供一种高剪切流氮气辅助的电喷雾（气流辅助电喷雾），它将电喷雾的最佳流速区间提升到了2
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（八）
肽图分析法 - 蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南反相高效液相色谱已成为蛋白质分析和表征的标准方法，尤其是治疗性药物的分析和表征。反相色谱分析法分辨率高，检测灵敏度好，能够提供大量关于蛋白质的信息。有些时候，蛋白质作为完整的分子分析，但更多的时候采用蛋白水解酶作用于特殊的氨基酸残基将碳骨架断开，
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十二）
蛋白质/多肽液相分析中的流动相选择有机溶剂可将吸附在疏水界面的蛋白质洗脱（图14）。在梯度洗脱期间，当有机溶剂量达到针对每一蛋白质的特定浓度时，蛋白质就会从疏水界面上解吸，继续顺着柱向下，从而从柱中洗脱。图14. 当有机改性剂的浓度达到特定值时，蛋白质从疏水界面洗脱。乙腈。在多肽的反相色谱分离时最常
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（一）
蛋白质组学蛋白质组学是鉴定和定量细胞、组织或生物体蛋白质的科学，目的是了解生物学变化和疾病状态，开发疾病的生物标记和治疗药物的靶点。如果将一个基础蛋白的各个修饰蛋白算作一个蛋白，那么哺乳动物细胞含多达3~4万个蛋白。当计算各个修饰后的蛋白时，蛋白质的数量远远超过了10万。细胞内不同蛋白质的丰度或浓度
如何提高实验室常用仪器HPLC的灵敏度？
1、提高柱温； 2、减小柱径； 3、缩短检测器的响应时间； 4、使用高纯硅胶柱； 5、改变流动相pH值； 6、改变有机相%； 7、改变键合相； 8、改变有机添加剂。
HPLC压力持续偏高原因分析及解决办法
1、流速设定过高。解决方法：将流速调整到适当数值。2、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀。解决方法：更换流动相，冲洗色谱柱。3、柱前筛板堵塞。解决方法：在允许情况下反冲色谱柱，更换筛板，更换色谱柱。4、保护柱堵塞。解决方法：清洗或更换保护柱。