关于免疫荧光的技术的间接法测抗体的原理介绍
⑴基本原理 染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。 ⑵试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4 荧光标记的抗人球蛋白抗体:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释。 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml) 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫) 荧光显微镜 玻片架 滤纸 37℃温箱等。......阅读全文
关于免疫荧光的技术的间接法测抗体的原理介绍
⑴基本原理 染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体
免疫荧光技术直接法测抗原的检测原理介绍
⑴基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 ⑵试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.0
关于间接法测抗体的介绍
间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下: ⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。 ⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗
免疫荧光的技术的间接法测抗体注意事项
1)荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4℃保存4h,时间过长 ,会使荧光减弱。 2)每次试验时 ,需设置以下三种对照: ① 阳性对照:阳性血清+荧光标记物 ②阴性对照:阴性血清+荧光标记物 ③ 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物 3)已知抗原标本片需在操作的各个步骤中,始终保持湿润,
免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤
⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结
简述免疫荧光的技术的间接法测抗体的实验步骤
1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10min后弃去,使标本片保持一定湿度。 2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,37℃保温30min。 3)取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol
免疫荧光技术直接法测抗原的实验步骤介绍
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。 ② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。 ③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按
免疫荧光技术荧光抗体染色方法介绍直接法
直接法是指用特异荧光抗体直接滴加于待检的标本上,由荧光标记的抗体与抗原发生特异结合(图)。标本中如有相应的抗原存在,即与荧光抗体特异性结合,在镜下可见有荧光的抗原复合物。此法的优点是操作简单、特异性高。其缺点是检查每种抗原均需制备相应的特异性荧光抗体,且敏感性低于间接法。
免疫荧光技术荧光抗体染色方法介绍间接法
间接法是根据抗球蛋白试验的原理,用荧光素标记抗球蛋白抗体(简称标记抗抗体)的方法(图)。间接法的检测过程分为两步:第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中在37℃下保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体;第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、
间接法测抗体的基本原理
染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可
免疫荧光技术直接法测抗原的注意事项
1)对荧光标记的抗体的稀释,要保证抗体的蛋白有一定的浓度,一般稀释度不应超过1:20,抗体浓度过低,会导致产生的荧光过弱,影响结果的观察。 2)染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化,染色时间可以从10 min到数小时,一般30 min已足够。染色温度多采用室温(25℃左右),高于
免疫荧光技术直接法测抗原实验步骤
直接法测抗原⑴基本原理将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01m
间接法测抗体基本原理
间接法测抗体基本原理:将抗原连接到固相载体上,样品中待测抗体与之结合成固相抗原-受检抗体复合物,再用酶标二抗(针对案检抗体的抗体,如羊抗人ICG抗体)与固相免疫复合物中的抗体结合,形成固相杭原-受检抗体-酶栝二抗复合物,测定加底物后的显色程度,测定待测抗体含量.
间接法测抗体基本原理
间接法测抗体基本原理:将抗原连接到固相载体上,样品中待测抗体与之结合成固相抗原-受检抗体复合物,再用酶标二抗(针对案检抗体的抗体,如羊抗人ICG抗体)与固相免疫复合物中的抗体结合,形成固相杭原-受检抗体-酶栝二抗复合物,测定加底物后的显色程度,测定待测抗体含量。
免疫荧光直接法测抗原法的原理和实验步骤
⑴基本原理将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,p
间接法测抗体的实验步骤
1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10min后弃去,使标本片保持一定湿度。2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,37℃保温30min。3)取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol/L,pH7
间接法测抗体的操作步骤
间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体
间接法测抗体的实验步骤
⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结
疫荧光技术间接法测抗体实验步骤
间接法测抗体⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的
免疫荧光技术——直接法
免疫荧光技术可应用于:(1)研究特异蛋白抗原在细胞内分布;(2)对抗原进行细胞定位;(3)对特定抗原进行定量检测。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。(北京出版社)实验方法原理直接法是以荧光素标记的抗体直接与标本内的抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。根据荧光的分布位置及强度,确定相应抗原的存
免疫荧光技术——间接法
实验方法原理基本原理是先用特异性抗体与细胞内相应抗原结合,再用荧光素标记的二抗与特异性抗体相结合,形成抗原-特异性抗体-标记荧光抗体的复合物。因为在复合物上带有比直接法更多的荧光标记物,所以比直接法更敏感。实验材料抗体试剂、试剂盒PBS伊文氏兰仪器、耗材显微镜实验步骤1. 标本固定后,PBS洗涤3
间接法测抗体的实验注意事项
1)荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4℃保存4h,时间过长 ,会使荧光减弱。2)每次试验时 ,需设置以下三种对照:① 阳性对照:阳性血清+荧光标记物② 阴性对照:阴性血清+荧光标记物③ 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物3. 已知抗原标本片需在操作的各个步骤中,始终保持湿润,避免干燥。4. 所滴
ELISA测定的常用模式间接法测抗体
基本方法的操作如下: 1.将病原体的抗原在碳酸盐缓冲液中4~C过夜包被,形成固相抗原,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗原后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。 2.加入含待测抗体的临床样本如血清等,温育一定时间后洗板;此时,待测抗体就会与固阳上特异抗原反应而
关于免疫荧光技术—荧光抗体染色的基本介绍
免疫荧光技术(immunofluorescence techniques) 该法是以荧光素,如异硫氰酸荧光素(fluorescence isothiocyanate,FITC)、罗丹明等标记抗体或抗原,以检测标本中抗原或抗体的方法。免疫荧光技术也包括两种基本类型,即荧光抗体染色(fluoresc
间接法测抗体所需试剂与仪器
磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4荧光标记的抗人球蛋白抗体:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释。搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。
直接法测抗原的基本原理
将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
关于免疫荧光技术的方法原理的简介
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 直接法 将
直接法测抗原的技术优点缺点和应用
将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
免疫荧光染色(间接法)
1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体(如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色30min,37℃,缓冲盐水
免疫荧光技术的技术原理
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看