DNA连接酶的基本介绍
DNA连接酶也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是把两条DNA黏合成一条。无论是双股或是单股DNA的黏合,DNA黏合酶都可以借由形成磷酸酯键将DNA在3'端的尾端与5'端的前端连在一起。虽然在细胞内也有其他的蛋白质,例如像是DNA聚合酶在其中一股DNA为模版的情况下,将另一边的DNA单股断裂端,通过聚合反应的过程形成磷酸双脂键(phosphodiester bond)来黏合DNA(DNA连接酶将DNA片段缝合起来,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸双脂键)。但是DNA聚合酶的黏合过程却只是聚合反应一个附带的功能而已,真正在细胞内扮演DNA黏合反应的工作还是以DNA黏合酶为主。DNA黏合酶的功能便是黏合断裂的DNA,而细胞内只有DNA复制与DNA修复的反应牵涉到DNA断裂的合成,因此DNA黏合酶就是在上述的两个机制扮演重要的角色。除了细胞内的黏合反应,随着分子生物学的进展,几乎大......阅读全文
关于DNA重组的基本信息介绍
DNA重组(DNA recombination)实质上指的是遗传重组(genetic recombination),也称为遗传改组(genetic reshuffling),是指两个不同姐妹染色体间遗传物质的交换。DNA重组导致后代产生不同于任一亲本的新性状。真核生物减数分裂期间的DNA重组产生
关于DNA探针的基本内容介绍
DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段,可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以
关于治疗性DNA疫苗的基本介绍
“治疗性DNA疫苗”是由解放军总医院第五医学中心免疫室主任奚永志团队申报的正式获得国际标准“三方”发明ZL授权的疫苗。 解放军总医院第五医学中心免疫室主任奚永志团队申报的《基于B7-1-PE40KDEL外毒素融合基因的DNA疫苗及其用途》,正式获得国际标准“三方”发明ZL授权。该成果是具有完全
关于卫星DNA的基本信息介绍
卫星DNA(satelliteDNA)是一类高度重复序列DNA。在介质氯化铯中作密度梯度离心(离心速度可以高达每分钟几万转)时,DNA分子将按其大小分布在离心管内不同密度的氯化铯介质中,小的分子处于上层,大的分子处于下层。从离心管外看,不同层面的DNA形成了不同的条带。根据荧光强度的分析,可以看
关于叶绿体DNA的基本信息介绍
叶绿体DNA,英文chloroplast DNA,缩写cpDNA,存在于叶绿体内,双链环状,长度中间值通常为45微米,具有独立基因组。一个叶绿体含有10~50个cpDNA。 chloroplast DNA(cpDNA),存在于叶绿体内的DNA。高等植物叶绿体的DNA为双链共价闭合环状分子,其长
关于DNA疫苗的基本信息介绍
DNA疫苗——对目标细胞,藉由改造过的病毒或细菌感染,以插入基因或调节基因表现(gene expression)的手法,引起免疫系统的活化,若这些细胞因此在表面呈现异于接种者本身的物质,将会被免疫系统辨识后受到攻击,尽管此项技术仍在试验中,却有可能成为未来治疗癌症、遗传疾病的重要疗法。
关于DNA效应的基本信息介绍
一个国际研究小组通过单分子生物物理等手段严谨地证实了DNA中确实存在别构效应。该研究揭示了DNA一个新的基本性质,不但在物理上非常有趣,而且有重要的生理意义。相关研究发表在近期的《科学》杂志上。 别构效应广泛存在于蛋白质特别是酶中。别构效应是描述远离活性中心的结合到变构位点的效应因子能够通过蛋
关于端粒DNA的基本信息介绍
端粒DNA,包括非特异性DNA和由高度重复序列组成的特异DNA序列,通常是由富含鸟嘌呤核苷酸(G)的短的串联重复序列组成,伸展到染色体的3'端。人工合成四膜虫端粒的重复DNA片段(TTGGGG)4端。人和小鼠的端粒DNA重序列为TTGGG,人类端粒的长度约为15Kb碱基。由于dsDNA存
DNA的基本组成单位介绍
DNA的基本组成单位有:腺嘌呤脱氧核糖核苷酸(A),鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸(G),胞嘧啶脱氧核糖核苷酸(C),胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸(T)。RNA的基本组成单位有:腺嘌呤脱氧核糖核苷酸(A),鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸(G),胞嘧啶脱氧核糖核苷酸(C),尿腺嘧啶脱氧核糖核苷酸(U)。在碱基互补配对时,胸腺嘧
关于DNA变性的基本信息介绍
变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变: 1)溶液粘度降低。DNA双螺旋是紧密的刚性结构,变性后代之以柔软而松散的无规则单股线性结构,DNA粘度因此而明显下降。 2)溶液旋光性发生改变。变性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构性改变,使DNA溶液的旋光性发生变化。 3)增色效应(hy
关于DNA滚环复制的基本介绍
滚环式复制(rolling circle replication)是噬菌体中常见的DNA复制方式。许多病毒DNA的复制、质粒、F因子在接合(conjugation)转移时其DNA的复制,以及许多基因扩增时都采用这种方式。 在以这种机制进行的复制中,亲代双链DNA的一条链在DNA复制起点处被切开
T4-RNA连接酶的基本信息
T4 RNA Ligase,即T4 RNA连接酶,是一种ATP-依赖的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。
连接酶链式反应的基本原理
LCR ,即在D N A 连接酶的作用下,通过连接与模板D N A互补的两个相邻寡核苷酸链,快速进行D N A 片段扩增。D N A连接酶可将与模板D N A 链互补的两条毗邻寡核苷酸片段连接起来,两条寡核苷酸链接头处存在碱基错配则阻止连接反应的发生。所以通过连接酶反应,可明确区分寡聚核苷酸是否与模
连接酶链反应的基本概念和应用
连接酶链反应(Ligase chain reaction,LCR),是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上,引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR 技术的新方法。LCR 既可扩增,又可鉴定D N A 异常,与PCR 技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查。
泛素蛋白质连接酶的基本信息
中文名称泛素-蛋白质连接酶英文名称ubiquitin-protein ligase定 义泛素化级联反应中的第三个酶(E3),催化将结合在泛素缀合酶上的泛素传递给目标蛋白质,泛素G76与目标蛋白质的赖氨酸上的ε氨基形成异肽键。泛素化由泛素激活酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白质连接酶共同完成,总反应为:AT
T4-DNA连接酶对目的DNA片段和载体连接的一般方案
1.连接反应一般在灭菌的0.5ml离心管中进行。2.10μl体积反应体系中:取载体50-100ng,加入一定比例的外源DNA 分子(一般线性载体DNA分子与外源DNA分子摩尔数为1∶1~5∶1),补足ddH2O 至8μl。3.轻轻混匀,稍加离心,56℃水浴5min后,迅速转入冰浴。4.加入含ATP的
关于工具酶的连接酶的介绍
它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 连接酶有T4噬菌体
DNA滚环式复制基本介绍
在以这种机制进行的复制中,亲代双链DNA的一条链在DNA复制起点处被切开,其5'端游离出来。这样,DNA聚合酶Ⅲ便可以将脱氧核糖核苷酸聚合在3'-OH端。当复制向前进行时,亲代DNA上被切断的5'端继续游离下来,并且很快被单链结合蛋白所结合。因为5'端从环上向下解链的
单纯疱疹病毒DNA疫苗的基本介绍
单纯疱疹病毒DNA疫苗(herpes simplex virus DNA vaccine)是2019年全国科学技术名词审定委员会公布的感染病学名词。 将编码单纯疱疹病毒(HSV)2型gD2和pRSVmt免疫Balb/c小鼠制备的DNA疫苗。初步动物试验获得满意免疫结果,提示该疫苗对动物有保护作
关于DNA聚合酶I的基本介绍
DNA聚合酶I(DNA-pol I),分子量109kD,为单肽链组成,400分子数/细胞,是原核生物的DNA聚合酶,由于发现最早命名为DNA聚合酶I,其他原核生物的DNA聚合酶,按发现的先后顺序分别命名为DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶Ⅴ。
关于随体DNA的基本信息介绍
随体DNA更广泛地是指染色体DNA和独立存在的小型DNA。 若将DNA放在氯化铯中,用平衡密度梯度离心,则按GC含量,在特定的密度部位形成带。采用该法将从细胞抽提的DNA分离,除主要的DNA带外,有时可出现小的带,后者就叫做随体DNA。有的随体DNA像细胞内的质环DNA那样是独立的分子,但也有
关于DNA甲基化检测的基本介绍
DNA甲基化是基因表达调控的一种重要机制,DNA甲基化检测是指利用各种方法对肿瘤细胞DNA甲基化程度进行测定。在恶性肿瘤的发展中,甲基化的状态并不是一成不变,肿瘤细胞内全基因组的低甲基化程度与疾病进展、肿瘤大小和恶性程度都有密切的关系,DNA甲基化检测对肿瘤恶性程度的判断有重要意义。
卫星DNA的基本系统特点介绍
多态性和保守性卫星DNA具有多态性和保守性,卫星位点由微卫星的核心序列与其两侧的侧翼序列构成,侧翼序列使某一卫星特异地定位于染色体的某一部位,而卫星本身的重复单位变异则是形成微卫星多态性的基础。在某一个体基因组中两条同源染色体的相对(侧翼序列相同)位置上如两侧翼序列间所包含的卫星重复单位数相同与不同
关于抗双链DNA抗体的基本介绍
抗双链DNA抗体是抗DNA抗体中的一种,是系统性红斑狼疮(SLE)的血清学标志物,而且是临床上最常进行的一项实验室检测指标。SLE是一种常见的慢性自身免疫性疾病,其发病原因和机制尚未明确,通常认为,是由于细胞和体液免疫紊乱,机体正常的免疫耐受性受损,导致对自身组织产生免疫反应而出现组织损害。抗d
关于小卫星DNA的基本信息介绍
小卫星DNA (minisatellite DNA )又称可变数目串联重复(variable number tandem repeat, VNTR),由15~65bp的基本单位串联而成,总长通常不超过20kb,重复次数在群体中是高度变异的。多态性由于重复单位之间的不平衡交换,从而产生不同等位基因
关于DNA双螺旋的基本信息介绍
DNA双螺旋(外文名DNA double helix)指的是一种核酸的构象,在该构象中,两条反向平行的多核苷酸链相互缠绕形成一个右手的双螺旋结构。 DNA双螺旋的碱基位于双螺旋内侧,磷酸与糖基在外侧,通过磷酸二酯键相连,形成核酸的骨架。碱基平面与假想的中心轴垂直,糖环平面则与轴平行,两条链皆为
连接酶链反应的原理及应用介绍
1.定义:连接酶链反应(Ligase chain reaction,LCR),是一种新的DNA体外扩增和检测技术,主要用于点突变的研究及靶基因的扩增。2.LCR的基本原理:利用DNA连接酶.特异地将双链DNA 片段连接,经变性-退火-连接三步骤反复循环,从而使靶基因序列大量扩增。其程序为:在模DNA
连接酶的分类
连接酶在EC编号中分类为EC6,并再细分为6个子类:EC6.1包括形成C-O键的连接酶EC6.2包括形成C-S键的连接酶EC6.3包括形成C-N键的连接酶EC6.4包括形成C-C键的连接酶EC6.5包括形成磷酯键的连接酶EC6.6包括形成N-金属键的连接酶
DNA拓扑异构酶的基本信息介绍
在闭环状双链DNA的拓扑学转变中,要暂时的将DNA的一个链或两个链切断,根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶(top -oisomeraseⅠ),通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶(topoisomeraseⅡ)。属于Ⅰ型的拓扑异构酶,有大肠杆菌的ω
关于核糖体DNA的基本信息介绍
核糖体DNA(Ribosomal DNA,rDNA)是一种DNA序列,该序列用于rRNA编码。核糖体是蛋白质和rRNA分子的组合,翻译mRNA分子以产生蛋白质的组件。真核生物的rDNA包括一个单元段,一个操纵子,以及由NTS、ETS、18S、ITS1、5.8S、ITS2和28S束组成的串联重复序