酶免疫组化的关键环节相关介绍

1)标本固定 固定的目的是①防止标本从玻片上脱落; ②除去妨碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果; ③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用4%多聚甲醛,但睾丸组织、眼可能要选用Bouin’s液或mDF液效果较好。 2)脱水、石蜡包埋和制片 脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则,容易裂片和脱片等。 3)脱蜡和水化 这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先60℃20min,然后立即二甲苯1-3分别10min(这个时间是由二甲苯新鲜程度和室温等综合决定的),但当天制好的切片一般先60℃3-4h。水化用梯度乙醇(由高到低)。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全,而产生非特异性背景着色。 4)抗原修复 由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性;通过抗原修复,......阅读全文

酶免疫组化的关键环节相关介绍

  1)标本固定  固定的目的是①防止标本从玻片上脱落;  ②除去妨碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;  ③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用4%多聚甲醛,但睾丸组织、眼可能要选用Bouin’s液或mDF液效果较好。  2)脱水、石蜡包埋和制片  脱水用梯度乙醇(由

免疫组化方法中关键环节及其原理(二)

  二、免疫荧光方法中的重要环节    1、冰冻切片制备:建议用新鲜组织,否则组织细胞内部结构破坏,易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等,防止裂片和脱片严重。    2、组织切片固定:切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定5-10min,尤其要较长时间保存的白片,一定要及时固定和

免疫组化方法中关键环节及其原理(一)

  一、酶免疫组化的关键环节    1、标本固定:固定的目的是①防止标本从玻片上脱落;②除去防碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;③固定的标本易于保存。    2、脱水、石蜡包埋和制片:脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则,容

免疫组化方法中关键环节及其原理解述

   一、酶免疫组化的关键环节    1、标本固定:固定的目的是①防止标本从玻片上脱落;②除去防碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;③固定的标本易于保存。    2、脱水、石蜡包埋和制片:脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否

免疫组化方法中关键环节及其原理解述

一、酶免疫组化的关键环节1、标本固定:固定的目的是①防止标本从玻片上脱落;②除去防碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;③固定的标本易于保存。2、脱水、石蜡包埋和制片:脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则,容易裂片和脱片等。3、

免疫组化的特点相关介绍

  1)特异性强  免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。  2)敏感性高  在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上

免疫组化的相关分类介绍

  免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。  这些常用免疫组织化学方法的原理如下:  1. 免疫荧光细胞化学技术  将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的

免疫组化方法原理解述及其中关键环节2

12、复染:目的是形成细胞轮廓,从而更好地对目标蛋白进行定位,经常用苏木素复染(胞核染料)。注意苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况,一般数秒-数分钟,胞浆蛋白可以适当时间长一点,而胞核蛋白则要短。不过这个如果染色不理想可以补救的。即:染色深则分化时间稍长些即可;染色浅则再

免疫组化方法原理解述及其中关键环节1

一、酶免疫组化的关键环节1、标本固定:固定的目的是①防止标本从玻片上脱落;②除去防碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;③固定的标本易于保存。2、脱水、石蜡包埋和制片:脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则,容易裂片和脱片等。3、

革兰氏染色的关键环节

革兰氏染色是一项经典的细菌鉴别手段,自19世纪80年代丹麦的医师GRAM创立起,至今已经近一个半世纪,仍旧在细菌的检测和鉴定分类上被广泛应用着。在我国,GB 4789系列的国标中很多致病菌的检测也都需要进行革兰氏染色,可见其重要性。甚至可以说没有精准掌握革兰氏染色的微生物检验员,不会是一个合

PCR反应的关键环节

PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。

关于修饰酶的相关介绍

  体内有些酶可在其他酶的作用下,将酶的结构进行共价修饰,使该酶活性发生改变,这种调节称为共价修饰调节(covalent modification regulation),这类酶称为修饰酶(prosessing enzyme)。  碱性磷酸酶去除5′-P,可防止二分子DNA片段5′端P基团自身空间障

治疗AmpC酶的相关介绍

  由于AmpC酶易于被诱导产生且对β-内酰胺抗菌素抑制剂不敏感,给临床抗感染治疗带来了新挑战。对AmpC酶稳定的药物主要有碳青霉烯类(亚胺培南)和第四代头(头孢吡肟、头孢匹罗)以及某些喹酮类和氨基糖苷类抗生素[2o]。在体外p内胺酰酶抑制剂克拉维酸、舒巴坦、三唑巴坦,与p内胺酰抗生素联合运用实验中

酶标法的相关介绍

  酶标法是指使用 酶联免疫吸附试验( ELISA)来检测HIV抗体。这种方法是根据酶免疫测定原理发展的一种技术,其基本方法分三类:间接法、双抗原夹心法和抗体竞争法。 目前国内外主要使用的是第三代(双抗原夹心法)试剂。血源筛查以第三代 ELISA为主,国际上有些国家和地区已经将第四代 ELISA试剂

关于工具酶的相关介绍

  基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶,连接酶,聚合酶,核酸酶和修饰酶五大类。其中,以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。  DNA限制性内切酶:  生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使

酶体系的作用相关介绍

  酶之所以能够加速化学反应的进行,是因为它能降低反应的活化能。因为任何一种酶,对于它所能催化的反应都有极强的选择性,这种选择性决定着每一个细胞在特定的时候发生特定的化学反应。  酶分子是蛋白质,每种蛋白质都有特定的三维形状,而这种形状就决定了酶的选择性。酶所催化的反应中的反应物称为底物,酶只能识别

RNA复制酶的相关介绍

  即“RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)”RNA聚合酶的一种,存在于大部分RNA病毒中。和细胞中用来转录的RNA聚合酶(DdRp)不同,RNA复制酶的模板是RNA分子。  某些RNA复制酶还有解旋酶活性,正链RNA或双链RNA病毒复制时都会产生双链RNA,RNA复制酶可以解开这些双链,保证RNA

与酶相关的疾病的介绍

酶缺乏所致之疾病多为先天性或遗传性,如白化症是因酪氨酸羟化酶缺乏,蚕豆病或对伯氨喹啉敏感患者是因6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏。许多中毒性疾病几乎都是由于某些酶被抑制所引起的。如常用的有机磷农药(如敌百虫、敌敌畏、1059以及乐果等)中毒时,就是因它们与胆碱酯酶活性中心必需基团丝氨酸上的一个-OH结合而使

乳酸脱氢酶同工酶的相关介绍

  乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)是一类NAD依赖性激酶,有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基,可构成6种四聚体同工酶。 动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体 ,是一个具有5种同工酶形态的分子,即常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶(LDH1~5)。C亚

单胺氧化酶的相关介绍

  单胺氧化酶(MAO)为反映肝纤维化的酶,可分为两类。一类存在于肝、肾等组织的线粒体中,以FAD为辅酶,参与儿茶酚胺的分解代谢。另一类存在于结缔组织,是一种细胞外酶,无FAD而含有磷酸吡哆醛,只对伯胺起作用。血清中MAO和结缔组织中的MAO性质相似,能促进结缔组织的成熟,在胶原形成过程中,参与胶原

酶蛋白的饲养用途相关介绍

  酶蛋白以植物蛋白为原料,酵母菌为主菌,辅以产酶、产维生素的7种菌进行复合发酵,改善了植物蛋白结构,富含消化酶系、菌体蛋白、维生素制作的饲料。通过试验表明:鸡,鸭等家禽在产蛋高峰期,体内消化酶相对不足,代谢极为旺盛,对营养因子和致病因子均非常敏感,体质相对虚弱,抗病力下降,消化酶活性减弱,同化作用

关于反转录酶的相关介绍

  反转录酶(reverse transcriptase,也可写成逆转录酶) 又称为依赖RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中发现了一种特殊的DNA 聚合酶,该酶以RNA 为模板,以dNTP 为底物,tRNA( 主要是色氨酸tRNA) 为引物,在tRNA 3'

酶法生产明胶的相关介绍

  酶催化胶原降解制备明胶,与传统的碱法制备明胶的工艺相比,生产周期将会大大缩短,因此国外的明胶工作者一直重视对酶的研究。酶法制胶的研究从1962年开始,已经有50多年的历史,人们已经认识到了,经过酶对胶原降解能够制取明胶,但这样制取的明胶,其分子量分布偏宽,高分子量组份偏多,工艺上控制较难等。这些

关于内切酶的相关介绍

  内切酶,即限制性核酸内切酶。亦称限制性核酸酶。它是一种能催化多核苷酸的链断裂的酶,只对脱氧核糖核酸内一定碱基序列中某一定位置发生作用,把这位置的链切开。通过内切酶可以把某一个遗传基因切下来,若再连在别的细胞的遗传基因上,便可使这细胞具有新的遗传特性。内切酶的发现和采用,使基因工程成为可能。

血清酶学检查的相关介绍

  ①由肝病引起的ALT升高,只表示肝细胞受损(>300单位时,肝细胞或多或少有坏死性病变),而不能区别肝病性质。无论患甲型肝炎或乙型肝炎或胆汁淤积性肝炎或中毒性肝炎,此酶都会升高,应结合病史、体征进行全面分析。  此外,肝脓肿、肝结核、肝硬变失偿期、血吸虫病、肝癌等,此酶亦可轻度或中度增高。  ②

酶反应器的相关介绍

  酶反应器(enzyme reactor)指以酶作为催化剂进行反应所需的设备。这些设备包括游离酶、固定化酶和固定化细胞的容器及其附加设施如混合、取样、检测等设备。[1]  酶反应器的作用是以尽可能低的成本,按一定的速度由规定的反应物制备特定的产物。酶反应器的特点是在低温、低压的条件下发挥作用,反应

DNA聚合酶的相关介绍

  可分为以下几个类群:  (1)依赖DNA的DNA聚合酶;  (2)依赖RNA的DNA聚合酶;  (3)依赖DNA的RNA聚合酶;  (4)依赖RNA的RNA聚合酶。  前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为P01Ⅰ,P01

生物酶的分类淀粉酶的相关介绍

  淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称,通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料,由于淀粉酶的高效性及专一性,酶退浆的退浆率高,退浆快,污染少,产品比酸法、减法更柔软,且不损伤纤维。淀粉酶的种类很多,根据织物不同,设备组合不同,工艺流程也不同,目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等,由于淀

免疫酶标的相关类型介绍

  (1)双抗体夹心法  为了检测抗原可用夹心法。将特异性抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯制成的小管、小盘或小孔)上,然后加被测溶液,倘样品中有相应抗原,则与抗体在载体表面形成复合物。洗涤后加入酶标记的特异性抗体,后者通过抗原也结合到载体的表面。洗去过剩的标记抗体,加入酶的底物,在一定时间内经酶催化产生

淀粉酶和异淀粉酶的相关介绍

  淀粉酶  葡萄糖淀粉酶,糖化酶,编号E.C.3.2.1.3  γ-淀粉酶(γ-amylase)是外切酶,从淀粉分子非还原端依次切割α(1→4)链糖苷键和α(1→6)链糖苷键,逐个切下葡萄糖残基,与β-淀粉酶类似,水解产生的游离半缩醛羟基发生转位作用,释放β-葡萄糖。无论作用于直链淀粉还是支链淀粉