聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本信息
聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂,以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,pH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由......阅读全文
简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法的基本操作
(1)制胶 用30%丙烯酰胺溶液-分离胶缓冲液-20%十二烷基硫酸钠溶液-10%过硫酸铵溶液(新鲜配制)-四甲基乙二胺-水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分离胶液,灌入模具内至一定高度(剩余体积留作制备浓缩胶用),用水封顶,聚合完毕,倾去水层。再用30%丙烯酰胺溶液-浓
蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
[原理]蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4gSDS/1g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物,该复合物带负电,故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移,且主要由于凝胶的分子筛作用,迁移速率与蛋白质的分子量大小有关,因此可以浓缩和分离蛋白质多肽
表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
一、原理细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋
蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立,1969年由weber和Osborn进一步完善。主要用于(1)蛋白质的分离(2)蛋白质的纯化。实验方法原理蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白质比例的
聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)的基本原理
SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种用于根据蛋白质混合物的大小分离其成分的分析方法。 该技术基于这样的原理,即带电分子将在电场中朝具有相反符号的电极迁移。常规电泳技术不能用于确定生物分子的分子量,因为物质在凝胶中的迁移率取决于电荷和大小。 为了克服这个问题,需要对生物样品进行处理,以
蛋白质的(PAGE)聚丙烯酰胺凝胶电泳制备方法
一.试剂制备: 1.分离胶缓冲液(pH8.9):36.6gTris,48ml1mol/l的HCl,或先加水至80ml,用浓HCl调pH,再定容至100ml. 2.浓缩胶缓冲液(pH6.7):5.98gTris,48ml1mol/l的HCl, 或先加水至80ml,用浓HCl调pH,再定容至
蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
SDS-PSGE 实验方法原理 蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白
关于聚丙烯酰胺凝胶电泳法的操作方法介绍
(1)制胶 取溶液A2ml,溶液B5.4ml,加脲2.9g使溶解,再加水4ml,混匀,抽气赶去溶液中气泡,加0.56%过硫酸铵溶液2ml,混匀制成胶液,立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10cm×0.5cm)中,使 胶层高度达6~7cm, 然后徐徐滴加水少
表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
实验概要细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋
关于聚丙烯酰胺凝胶电泳的常见问题解析
1、 凝胶时间不对,或慢或快,怎么回事? 通常胶在30MIN-1H内凝。如果凝的太慢,可能是TEMED,APS剂量不够或者失效。APS应该现配现用,TEMED不稳定,易被氧化成黄色。如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量过多,此时胶太硬易裂,电泳时易烧胶。 2、 电泳时间比正常要长?
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验步骤介绍
PAGE胶电泳缓冲液配置 1)丙烯酰胺单体贮液:14.55g丙烯酰胺加上0.45g N,N'-甲叉双丙烯酰胺,先用40mL双蒸水搅拌溶解,直到溶液变成透明,再用双蒸水稀至50mL,过滤。用棕色瓶4°C保存备用。 2)浓缩胶缓冲液贮液(0.5mol/L Tris-HCl,pH6.8):
RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE;-polyacrylamide-gel-electrophor...
一、原理核酸(ribonucleicacid,RNA)分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷,将其放入电场中,可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应,核酸分子大小、形状不同,故在电场作用下,核酸分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同,依此可达到分离纯化的目的。 二、材料、仪器设
关于聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的制备和电泳介绍
一、凝胶的制备和电泳 由于氧能抑制丙烯酰胺的聚合反应,灌制聚丙烯酰胺凝胶常在两块封闭的玻璃平板所形成的夹层间进行。在这种装置形式下,仅有顶层的凝胶与空气中的氧气相接触,从而大大减少了氧对聚合的抑制作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳一般采用垂直装置。 二、凝胶的制备和电泳操作如下: (1) 配制试剂
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义和原理
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或称为活性电泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷,它们的分离是依据其电泳迁移率
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验原理介绍
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或称为活性电泳是在不加入SDS 和巯基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷,它们的分离是依据其电泳迁
关于电泳法—聚丙烯酰胺凝胶电泳法的操作介绍
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳法— 制胶 取溶液A2ml,溶液B5.4ml,加脲2.9g使溶解,再加水4ml,混匀,抽气赶去溶液中气泡,加0.56%过硫酸铵溶液2ml,混匀制成胶液,立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10cm×0.5cm)中,使 胶层高度达6~7
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理
2006年生化考研题目,简答第五题。蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理 聚丙烯酰胺凝胶,是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂N,Nˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N, N,NˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙
蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
实验方法原理 蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物,该复合物带负电,故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移,且主要由于凝胶的分子筛作用,迁移速率与蛋白质的分子量大小有关,因此可以
萜的基本信息
萜是一大类碳氢化合物,多为有香味的液体,主要是由植物产生的,尤其是裸子植物;但有些昆虫也可以产生萜类,如燕尾蝶。萜类物质往往具有挥发性,可用水蒸气蒸馏或用乙醚提取。萜类化合物种类繁多,有链形的,环状的,又有饱和程度不同的烯键。萜类经过化学修饰,如氧化,碳链重排,可以形成大量的类萜。很多人把类萜也叫做
阿卓糖的基本信息
中文名称阿卓糖英文名称altrose定 义己醛糖的一种,是甘露糖的C-3位的差向异构体。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),糖类(二级学科)
蒎烯的基本信息
蒎烯,化学式为C10H16,有两种异构体:1、α-蒎烯,CAS:80-56-82、β-蒎烯,CAS:127-91-3
硫酯酶的基本信息
中文名称硫酯酶英文名称thioesterase定 义编号:EC 3.1.2.14。催化脂肪酸链的终止作用,水解脂酰基-S-酰基载体蛋白的硫酯键,释放自由脂肪酸的酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
腺苷的基本信息
中文名称: 腺苷化学名称:9-β-D-呋喃核糖基腺嘌呤英文名称: AdenosineCAS号: 58-61-7分子式: C10H13N5O4分子量: 267.24CAS号:58-61-7MDL号:MFCD00005752EINECS号:200-389-9RTECS号:AU7175000BRN号:93
霉菌的基本信息
霉菌是真菌的一种,其特点是菌丝体较发达,无较大的子实体。同其他真菌一样,也有细胞壁,寄生或腐生方式生存。霉菌有的使食品转变为有毒物质,有的可能在食品中产生毒素,即霉菌毒素。自从发现黄曲霉毒素以来,霉菌与霉菌毒素对食品的污染日益引起重视。对人体健康造成的危害极大,主要表现为慢性中毒、致癌、致畸、致
潘糖-的基本信息
基本信息CAS号:33401-87-5分子式:C18H32O16分子量:504.44纯度:>98.0%(LC)等级:EP潘糖 MDL号:MFCD00151376
癸酸的基本信息
癸酸是一种有机化合物,结构式为CH3(CH2)8COOH。外观为白色具难闻气味的结晶。不溶于水,溶于稀硝酸和多数有机溶剂中。属于月桂油、椰子油或山苍子油水解制取月桂酸时的副产物,主要用于制取癸酸酯类产品,其酯类用作香料、湿润剂、增塑剂和食品添加剂等。
尿刊酸酶的基本信息
中文名称尿刊酸酶英文名称urocanase定 义编号:EC.4.2.1.49。催化3-(5-氧-4,5-二氢-3氢-咪唑基丙酸)形成尿刊酸和水的酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
甲紫的基本信息
本品为氯化四甲基副玫瑰苯胺、氯化五甲基副玫瑰苯胺与氯化六甲基副玫瑰苯胺的混合物。
固绿的基本信息
中文别名:坚牢绿FCF/碱性艳绿/快绿;分子量:808.91;CAS#:2353-45-9;
嘌呤的基本信息
中文名嘌呤外文名Purine化学式C5H4N4分子量120.11CAS登录号120-73-0EINECS登录号204-421-2熔 点216 至 217 ℃沸 点265.06 ℃水溶性易溶密 度1.611 g/cm³外 观淡黄色粉末闪 点114.1 ℃安全性描述S22;