细胞融合技术的操作过程
(以人鼠细胞杂交为例)人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,让这些标记抗体同融合细胞膜上相应的抗原结合。开始,融合的细胞一半是红色,一半是绿色。在37℃下40分钟后,两种颜色的荧光在融合的杂种细胞表面呈均匀分布,这说明抗原蛋白在膜平面内经扩散运动而重新分布。这种过程不需要ATP。如果将对照实验的融合细胞置于低温(1℃)下培育,则抗原蛋白基本停止运动。这一实验结果令人信服地证明了膜整合蛋白的侧向扩散运动。......阅读全文
细胞融合技术的操作过程
(以人鼠细胞杂交为例)人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,
单克隆抗体技术的方法细胞融合操作过程
首先制备细胞培养基、 氨基喋呤(A)贮存液、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷(HT)贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞,之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其他活细胞使之繁殖,
细胞融合技术
细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)是指真核细胞通过介导和培养,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。人工的细胞融合开始于20世纪50年代, 60年代到70代作为一门新兴的技术, 发展非常快, 应用范围也极为广泛, 除了同种类细胞间可以
细胞融合技术的意义
⒈理论上说任何细胞,都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。⒉融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制,为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。⒊体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统,在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DN
细胞融合技术的发展
19世纪30年代,科学家们相继在肺结核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。细胞融合19世纪70年代,科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象,但是当时科学发展水平的限制,没有给予足够重视。1962年,日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。1965年,英国
细胞融合技术简介
细胞融合技术是用自然的或人为的方法,使种类不同的两种生物细胞直接融合,产生能够同时表达二者有益性状新杂种细胞的技术。自然进行的细胞融合,即卵子和精子受精形成合体,只能发生在同一种生物或亲缘关系很近的生物种之间。然而,细胞融合技术的问世不仅为细胞学、遗传学的研究提供了有力的手段,而且开创了动物、植
细胞融合技术的相关概述
人工细胞融合一般都采用化学和物理因素的诱导技术。如目前化学诱导常用促融合剂聚乙二醇(PEG);物理诱导采用电融合。为了改善和提高细胞融合的有效性,植物和微生物细胞的融合必须先除去细胞壁,使其成为原生质体。因此,对于植物和微生物来讲,细胞融合常被称为原生质体融合。细胞融合技术是在20世纪60年代建
细胞融合技术的应用价值
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。
细胞融合技术的前期发现
人们很早就注意到了在自然条件下发生的细胞融合现象,首先在病料组织中发现了由细胞融合产生的多核细胞,紧接着发现在脊椎动物和无脊椎动物的正常细胞中也可发生细胞融合,随后在体外组织培养中也发现了离体细胞的融合现象。自从发现活病毒可在体内介导癌细胞融合后,人们又实现了利用灭活病毒促进动物异种细胞融合,从而打
细胞融合技术的实验操作
人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,让这些标记抗体同融合细
细胞融合技术的应用价值
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。
细胞融合技术的成功案例
生物种类细胞来源甘蓝—青菜叶—根大豆—马唐草愈伤组织—叶矮牵牛—龙面花叶—花瓣大麦—花生种子—种子大麦—大豆叶—悬浮细胞小麦—矮牵牛叶—花瓣油菜—大豆叶—悬浮细胞玉米—大豆叶—悬浮细胞大豆—野豌豆悬浮细胞—悬浮细胞大麦—蚕豆叶—根大豆—香草木犀悬浮细胞—叶酵母菌—鸡原生质体—血红细胞大豆—烟草悬浮细
细胞融合技术的发展历程
19世纪30年代,科学家们相继在肺结核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。19世纪70年代,科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象,但是当时科学发展水平的限制,没有给予足够重视。1962年,日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。1965年,英国科学家进
细胞融合技术的应用价值
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。
细胞融合过程技术分析
细胞融合过程技术分析融合的方法很多,常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或5:1zui为常用。1.试剂与材料(1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。(2)1640培养液100ml。(3)完全1640液100ml。(4)2.5%FCS-1640液50ml。(
细胞融合技术诱发融合
异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。
细胞融合技术自发融合
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合。
细胞融合技术的临床意义
⒈理论上说任何细胞,都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。⒉融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制,为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。⒊体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统,在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DN
细胞融合技术的融合方法介绍
同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并,称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合,称诱发融合。仙台病毒法融合①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚;②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0
细胞融合技术的诱导物介绍
细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有生物法用灭活的仙台病毒(Sendai virus),化学法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如电脉冲,振动、离心、电激。目前应用最广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚,它可能引起细胞膜
细胞融合技术的发展和研究
19世纪30年代,科学家们相继在肺结核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。19世纪70年代,科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象,但是当时科学发展水平的限制,没有给予足够重视。1962年,日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。1965年,英国科学家进
细胞融合技术离心振动法
物理方法之一,使用离心机等机器实现细胞之间的融合。
细胞融合技术电融合法
在直流电脉冲的诱导下,细胞膜表面的氧化还原电位发生改变,使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂,进而质膜开始连接,直到闭和成完整的膜,形成融合体。优点:融合率高、重复性强、对细胞伤害小;装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
细胞融合技术电融合法
在直流电脉冲的诱导下,细胞膜表面的氧化还原电位发生改变,使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂,进而质膜开始连接,直到闭和成完整的膜,形成融合体。优点:融合率高、重复性强、对细胞伤害小;装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。
细胞融合技术物理振动法
离心振动物理方法之一,使用离心机等机器实现细胞之间的融合。
细胞融合技术的基本内容介绍
有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合,即由两个配子融合形成一个新的二倍体。而细胞融合为在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。其中人工诱导的细胞融合,在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合,也能产生种间细胞的
关于细胞融合技术的历史发展简介
19世纪30年代,科学家们相继在肺结核,天花,水痘,麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。 19世纪70年代,科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象,但是当时科学发展水平的限制,没有给予足够重视。 1962年,日本科学家发现日本血凝型病毒能引起艾氏腹水瘤细胞融合的现象。 1965
关于细胞融合技术的意义价值介绍
细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等优点。 ⒈理论上说任何细胞,都有可能通过体细胞杂
细胞融合仪的主要技术参数
交流电场参数 方波成串脉冲电压:峰一峰值 0-48V(0-±24V),连续可调。 方波成串脉部频率:30KHZ-3MHZSK可调 直流电场参数 方波融合脉冲电压:0-600V连续可调(电极间距)1.0mm时场强可达6000V/cm. 方波融合脉冲幅度:1us-5ms分十档可任选 随机
单克隆抗体技术:细胞融合
实验概要本文介绍了单克隆抗体技术——细胞融合实验的操作流程。实验原理细胞融合的方法有物理法,如电融合、激光融合,化学融合法和生物融合法,如仙台病毒,此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇(PEG),在分子量为200~700时,呈无色、无臭的粘稠状液体,分子量大于1 000时,呈乳