核糖核酸酶保护实验的原理
其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交,标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合,形成双链RNA;未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸,而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA,免受RNA酶的消化,故该方法命名为RNA酶保护实验。 对于32P标记的探针,杂交双链进行变性聚丙酰胺凝胶电泳,用放射自显影或磷屏成像系统检测被保护的探针的信号; 对于生物素标记的探针,杂交双链经过变性聚丙酰胺凝胶电泳后电转移至尼龙膜,采用链霉亲和素-辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)和化学发光底物与膜上biotin标记的探针结合,X射线胶片或化学发光图像分析仪检测杂交信号。......阅读全文
核糖核酸酶保护实验的原理
其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交,标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合,形成双链RNA;未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸,而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA,免受RNA酶的消化,故该方
核糖核酸酶保护实验的基本原理
核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay,RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交,标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合,形成双链RNA;未结合的
核糖核酸酶保护实验的定义
核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay,RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。
核糖核酸酶保护分析
一、体外转录在无菌1.5 ml 微型离心管中,结合以下内容:4 ul 5倍转录缓冲液2 ul 0.1 M DTT4 ul 2.5 MM NTP(A,C,G)0.8 ul RNA酶抑制剂(25 U/ul)RNA酶抑制剂(Promega)中100 UM冷UTP1 ul/ug UL线性DNA模板5 ul
核酸酶保护实验
实验材料核酸酶试剂、试剂盒ATPCTPGTPMUTPEDTANaCl甲酰胺Tris-HClRNase ARNase T1RNasinDTTUTPT7RNA聚合酶DNaseⅠ饱和酚氯仿酵母tRNANaAc无水乙醇SDS蛋白酶K异丙醇丙烯酰胺亚甲双丙烯酰胺TBE尿素过硫酸胺TEMED仪器、耗材低温离心机
核酸酶保护实验
实验材料 核酸酶试剂、试剂盒 ATPCTPGTPMUTPEDTANaCl甲酰胺Tris-HClRNase ARNase T1RNasinDTTUTPT7RNA聚合酶DNaseⅠ饱和酚氯仿酵母tRNANaAc无水乙醇SDS蛋白酶K异丙醇丙烯酰胺亚甲双丙烯酰胺TBE尿素过硫酸胺TEMED仪器、耗材 低温
核酸酶保护实验
实验材料 核酸酶 试剂、试剂盒 ATP CTP GTP MUTP
核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针...
核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图)实验方法原理 核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。实验材料
核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记RNA探针)
实验方法原理 核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。
核糖核酸酶(胰腺)的测定实验
实验方法原理RNaseⅠ分解 RNA 形成 3'-磷酸单核苷酸和 3'-磷酸多核苷酸,以 Cp 或 Up 结尾形成一个 2',3'-环状磷酸中间体。实验材料酶样品试剂、试剂盒乙酸缓冲液乙酸铀酰-高氯溶液RNA(酵母)溶液核酸核酸酶仪器、耗材分光光度计实验步骤实验所需「
核糖核酸酶(胰腺)的测定实验
基本方案 实验方法原理 RNaseⅠ分解 RNA 形成 3'-磷酸单核苷酸和 3'-磷酸多核苷酸,以 Cp 或 Up 结尾形成一个 2'
实验室塑料制品中核糖核酸酶和去氧核糖核酸酶的去除
通常RNA提取和RT-PCR实验操作失败的原因是由于器皿被核糖核酸酶(RNase)和去氧核糖核酸酶(DNase)污染。实验中应尽量使用不含 RNase的一次性塑料制品。重复使用的塑料制品可用0.1%二乙基焦碳酸(DEPC)水溶液于37℃浸泡2小时,再用去离子水冲洗,然后放入高压蒸汽灭菌器中,高压灭菌
多探针核糖核酸酶保护试验同时测定-mRNA-表达
实验步骤 基 本 方 案 多 探 针 核 糖 核 酸 酶 保 护 试 验材 料R i b o Q u a n t 体 外 转 录 试 剂(B D Pharmingen) 包含下面:40U /ul RNasinG A C U 库(2.75m m o l / L G T P /2.75m m o l /
核糖-核酸酶H的定义
所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的RNA部分的核内降解,产生不同链长带3'羟基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。
核糖-核酸酶H的特征
在许多反转录病毒中与多功能酶的反转录酶有关,在病毒基因组进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规则D
核糖-核酸酶H的定义
所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的RNA部分的核内降解,产生不同链长带3'羟基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。
核糖核酸酶的分类
(一)核糖核酸酶A核糖核酸酶A(RNase A)来源于牛胰脏,是一种内切核糖核酸酶,可特异攻击RNA上嘧啶残基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键,反应终产物是3’嘧啶核苷酸和末端带3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。无辅助因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可以被胎盘RNA酶抑制剂
核糖核酸酶A的用途说明
生化研究,测定核酸的结构· RNase 保护检测· 去除非特异结合的RNA· 分析RNA 序列· 水解蛋白样品中的RNA· 纯化DNA此外,它具有显著的细胞毒性,可以杀灭许多肿瘤细胞系,可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制,可以治疗乙肝。(1)从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除
核糖核酸酶(胰腺)的测定
实验方法原理 RNaseⅠ分解 RNA 形成 3'-磷酸单核苷酸和 3'-磷酸多核苷酸,以 Cp 或 Up 结尾形成一个 2',3'-环状磷酸中间体。实验材料 酶样品试剂、试剂盒 乙酸缓冲液乙酸铀酰-高氯溶液RNA(酵母)溶液核酸核酸酶仪器、耗材 分光光度计实验步骤
核糖核酸酶H的定义
所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的RNA部分的核内降解,产生不同链长带3'羟基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。
核糖核酸酶的基本介绍
去氧核糖核酸酶在高等动物的胰液中发现。核苷酶,发现存在于高等动物的肠液中。 人体的消化功能依靠胃肠运动的机械性消化和消化酶作用的化学性消化来完成。消化液中含有大量消化酶,可促进食物中糖、脂肪、蛋白质的水解。由大分子物质变为小分子物质,以便被人体吸收利用。葡萄糖、甘油、甘油-酯、氨基酸等都是可溶
核糖核酸酶的用途说明
生化研究,测定核酸的结构· RNase 保护检测· 去除非特异结合的RNA· 分析RNA 序列· 水解蛋白样品中的RNA· 纯化DNA此外,它具有显著的细胞毒性,可以杀灭许多肿瘤细胞系,可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制,可以治疗乙肝。(1)从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除
什么是核糖核酸酶?
指能水解RNA磷酸二酯键的酶称核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)。不同的RNase其专一性不同,例如牛胰核糖核酸酶(RNase I),它的作用位点是嘧啶核苷3’一磷酸与其他核苷酸之间的连接键,而核糖核酸酶T1(RNase T1)的作用位点是3’鸟苷酸与其他相邻核酸之间的5’一OH
核糖核酸酶的基本信息
指能水解RNA磷酸二酯键的酶称核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)。不同的RNase其专一性不同,例如牛胰核糖核酸酶(RNase I),它的作用位点是嘧啶核苷3’一磷酸与其他核苷酸之间的连接键,而核糖核酸酶T1(RNase T1)的作用位点是3’鸟苷酸与其他相邻核酸之间的5’一OH间的
核糖核酸酶a的使用说明
生化研究,测定核酸的结构 · RNase 保护检测 · 去除非特异结合的RNA · 分析RNA 序列 · 水解蛋白样品中的RNA · 纯化DNA 此外,它具有显著的细胞毒性,可以杀灭许多肿瘤细胞系,可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制,可以治疗乙肝。 (1)从DNA-R
关于核糖核酸酶H的简介
核糖核酸酶H是从小牛胸腺中发现而被分离的(Stein and Hausen 1969,Hausen and Stein 1970),但该酶现已知广泛存在于哺乳动物细胞、酵母、原核生物及病毒颗粒中。 所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的R
核糖核酸酶的作用与用途
核糖核酸酶能催化核糖核酸(RNA)的降解,现已能人工合成。药用油膏局部外用于治疗外伤及关节疼痛。据报道,核糖核酸酶能改变宿主细胞新陈代谢,抑制病毒合成,在体外能抑制流感病毒增殖,在鸡胚内能抑制痘苗、疱疹病毒形成。临床用核糖核酸酶每天肌注180毫克,对治疗流行性脑炎有益。
核糖核酸酶的作用与用途
核糖核酸酶能催化核糖核酸(RNA)的降解,现已能人工合成。药用油膏局部外用于治疗外伤及关节疼痛。据报道,核糖核酸酶能改变宿主细胞新陈代谢,抑制病毒合成,在体外能抑制流感病毒增殖,在鸡胚内能抑制痘苗、疱疹病毒形成。临床用核糖核酸酶每天肌注180毫克,对治疗流行性脑炎有益。
核糖核酸酶A的基本信息
核糖核酸酶A是内切核糖核酸酶,可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3'端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3'磷酸及末端带嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。无辅因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburn et al.1977)或氧钒
核糖核酸酶的基本分类
(一)核糖核酸酶A核糖核酸酶A(RNase A)来源于牛胰脏,是一种内切核糖核酸酶,可特异攻击RNA上嘧啶残基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键,反应终产物是3’嘧啶核苷酸和末端带3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。无辅助因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可以被胎盘RNA酶抑制剂