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简述RNA干扰回复实验的原理

如果脱靶干扰的部分基因,正好与目的基因位于同一信号通路中,或者与目的基因的生物学功能相似,那么,如果因脱靶而干扰了其它基因,亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上,可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰,或者虽然干扰了目的基因,但是并不会引起预期的细胞表型改变。 基于以上原因,自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后,越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明,您所获得的实验结果,不是由于Off-target效应而产生的。......阅读全文

简述RNA干扰回复实验的原理

  如果脱靶干扰的部分基因,正好与目的基因位于同一信号通路中,或者与目的基因的生物学功能相似,那么,如果因脱靶而干扰了其它基因,亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上,可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰,或者虽然干扰了目的基因,但是并不会引起预期的细胞表型改变

RNA干扰回复实验原理介绍

RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce

RNA干扰回复实验

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RNA干扰回复实验

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RNA干扰回复实验介绍

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RNA干扰回复实验的方法和原理介绍

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RNA干扰回复实验的基本介绍

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简述RNA干扰的特征

  ①RNAi是转录后水平的基因沉默机制;  ②RNAi具有很高的特异性,只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA;  ③RNAi抑制基因表达具有很高的效率,表型可以达到缺失突变体表型的程度,而且相对很少量的dsRNA分子(数量远远少于内源mRNA的数量)就能完全抑制相应基因的表达,是以催化放大的

简述RNA干扰效率的检测

  一般应该从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测干扰效率。  mRNA水平:RT-PCR、Real-time PCR;蛋白质水平:Western-blot、ELISA、免疫组化;细胞表型水平:MTT、克隆形成实验、流式细胞检测、细胞小室实验等。RNA干扰效率在动物模型上的进一步验证