关于反转录酶的质量控制介绍

1.切口酶:在与200单位酶37oC保温60分钟后,超螺旋质粒保留在90%以上。 2.DNase测定:200单位酶与50ng3H-DNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于1%。 3.RNase测定:200单位酶与50ng3H-RNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于3%。 4.第一链cDNA的反应:在标准化的反应中,200单位酶催化从1mg1.2kbRNA或1mg7.5kbRNA将同位素掺入到cDNA中,通过放射自显影,对于1.2kb的RNA,产物cDNA是单一的、全长的条带。对于7.5kb的RNA产物有部分是全长的条带。用这二种RNA放射性转换到cDNA中有12%。 5.RNaseH活性:200单位酶与polyA:polydT37oC保温60分钟,释放出的放射性要低于1%。 6.物理纯度:在SDS-PAGE上>90%纯。 储存缓冲液:20mMTris-HClpH7.5;200mMNaCl;0.......阅读全文

血栓与止血的质量控制

     在血栓与止血检验的全过程中,实验结果会受到诸多因素的影响。质量控制是保证实验结果准确的重要措施。当实验出现意想不到的结果时,应从各方面寻找原因,最后找到问题所在,通过改进措施,得到一个准确的结果。一、受检状态的影响:    受检者的状态,如被测者生理变化、饮食改变、环境因素、服用药物等引起

细胞库的质量控制原则

细胞库的质量控制应对主细胞库的表型和基因型标记进行鉴定。应采用分子生物学或其他适合的技术对表达载体基因拷贝数、基因插入或缺失、整合位点数量等情况进行分析。核苷酸序列应与表达载体一致,并与所预期的表达蛋白质的序列吻合。应对细胞库进行支原体、外源病毒因子等相关微生物污染的检测,并确认细胞基质没有被污染。

培养基的质量控制

本文对微生物实验室在培养基购置、贮存、制备、使用等方面应采取的质量控制措施进行讨论,谈一些观点和看法。希望有助于微生物检测工作的同行们更好的开展工作。1 培养基、抗血清和试剂对微生物检验质量的影响1.1 购置培养基、抗血清和试剂时要求供应商提供产品质控证书,尽量选择通过ISO9000认证的生产厂家。

质量控制的基本概念

   质量控制(Quaility Control,Q.C)质量控制是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的。     1.确定控制的对象;     2.规定控制对象的标准(预期值);     3.制定或选择控制方法和手段;     4.测量实际

白细胞计数的质量控制

1.经验控制: (1)与红细胞数比较:红细胞数/白细胞数约为500~1000:1.(2)与血涂片白细胞分布密度一致性。2.计数误差: (1)技术误差:通过熟练操作、仪器校准而减小,甚至避免。(2)固有误差:是计数室内每次血细胞分布不可能完全相同所致的误差。若白细胞数太低(<3×109/L),可增加计

交叉配血的质量控制

(1)血液标本:交叉配血的血液标本,受血者标本应为新鲜血,供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。 (2)选用方法:用试管法做交叉配血 (3)溶血现象:配血管出现溶血现象,为配血不合。

关于十二指肠胃反流及胆汁反流性胃炎的诊断依据介绍

  如果有明确的胃手术、胆肠吻合术等病史,有典型的症状和胃镜检查及病理组织学检查,诊断DGR和BRG并不困难;如无手术史、DGR和BRG的临床症状并无特异性,诊断较为困难。可借助于超声检查、核素技术、胃内24小时pH监测或胃内24小时胆红素监测手段评估和诊断。

RNA复制的转录与逆转录的过程介绍

  转录是以DNA为模板合成RNA的过程,经过转录DNA分子中的贮存信息传递到RNA分子中,再由mRNA做为模板合成蛋白质分子。逆转录也是从RNA的一个特定位置开始的,以RNA分子中的一条链为模板,在逆转录酶的作用下,以四种脱氧核苷酸为原料,合成方向仍是5'→3',完成cDNA的合成

关于逆转录病毒载体的优点介绍

  (1)逆转录病毒结构基因gag、env和pol的缺失不影响其他部分的活性;  (2)包装好的假病毒颗粒易于分离制备;  (3)逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞;  (4)前病毒通过LTR高效整合至靶细胞基因组中,有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。

关于反转录转座子的基本信息介绍

  反转录转座子(retrotransposon或retroposon)指通过RNA为中介,反转录成DNA后进行转座的可动元件。这样的转座过程称为反转座作用(retrotrans—position)。  反转座作用出现在真核生物,包括能自由地感染宿主细胞的反转录病毒,以及通过以RNA为中介进行转座的

关于逆转录病毒感染的内容介绍

  反转录病毒的感染能否实现,取决于细胞的特性,细胞的分裂时相以及与病毒有关的受体是否存在。而病毒的感受性则由细胞基因所决定。只有在许多条件都具备时,肿瘤因子才能感染细胞。首先,病毒吸附在细胞表面。在这一过程中,细胞受体及膜蛋白起主导作用,细胞没有相应的受体就不会被病毒感染。在敏感的细胞里,吸附的病

关于染色质结构对转录调控的影响介绍

  真核细胞中染色质分为两部分,一部分为固缩状态,如间期细胞着丝粒区、端粒、次溢痕,染色体臂的某些节段部分的重复序列和巴氏小体均不能表达,通常把该部分称为异染色质。与异染色质相反的是活化的常染色质。真核基因的活跃转录是在常染色质进行的。转录发生之前,常染色质往往在特定区域被解旋或松弛,形成自由DNA

关于逆转录PCR的三种循环介绍

  ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;  ②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;  ③

关于反转录转座子的基本信息介绍

  反转座作用出现在真核生物,包括能自由地感染宿主细胞的反转录病毒,以及通过以RNA为中介进行转座的DNA序列。除反转录病毒外,反转录转座子可以分成两类:一类是病毒超家族(viral superfamily),这类反转录转座子编码反转录酶或整合酶(integrases),能自主地进行转录,其转座的机

基因的顺反效应介绍

顺式排列和反式排列的组成都一样,只是排列方式不同,从而引起表型效应的不同,这种现象称为顺反效应(cis-trans effect)。在20世纪40年代中,为了研究基因的分子结构,人们用曲霉菌(aspergillus nidulans)和果蝇进行了许多杂交实验。在曲霉中,发现有的需在培养基中添加腺嘌呤

关于老年人胃食管反流病的基本介绍

  胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)是指过多胃、十二指肠内容物反流入食管引起的疾病,常有烧心、反酸等症状,并可导致食管炎和咽、喉、气道等食管以外的组织损害。由于内窥镜的普及应用,发现尚有部分有反流症状,但镜下无食管黏膜炎性病变的患者,故反流性食

关于小儿原发性膀胱输尿管反流的辅助检查介绍

  1.超声波检查 实时B超检查适用于诊断反流的过筛检查,若见输尿管、肾盂扩张应考虑有反流的存在,现在有采用彩流多普勒超声波检查,待膀胱充盈后排尿期观察反流情况,并可观察输尿管开口位置,有利于早期诊断,方法安全,无损伤痛苦。  2.放射性核素膀胱造影 能准确确定有无反流,但对确定反流分级不够精确,只

关于-十二指肠胃反流显像的方法介绍

  1.显像剂 主要有99mTc-EHIDA、99mTc-DISIDA、99mTc-mebrofenin、99mTc-PMT等。  2.给药方法 静脉注射。成人剂量185MBq(5.0mCi);儿童剂量7.4MBq(0.2mCi)/kg,不超过37MBq(1mCi)。  3.仪器 大视野γ照相机或S

关于胃食管反流测定和显像的相关疾病介绍

  1、相关疾病   老年人食管裂孔疝,小儿贲门失弛缓症,胃病,溃疡病穿孔,溃疡病出血,复发性溃疡,胃溃疡,后壁穿孔性溃疡,溃疡分枝杆菌感染,全身黏液性水肿  2、相关症状  胃虚气逆,吞酸,泛酸,胃糜烂,肠粘膜有坏死溃疡,溃疡

关于聚合酶的介绍

  1957年,美国科学家阿瑟·科恩伯格(Arthur Kornberg)首次在大肠杆菌中发现DNA聚合酶,这种酶被称为DNA聚合酶I(DNA polymerase I,简称:Pol I)。1970年,德国科学家罗尔夫·克尼佩尔斯(Rolf Knippers)发现DNA聚合酶II(Pol II)。随

关于生物酶的介绍

  生物酶是由活细胞产生的具有催化作用的有机物,大部分为蛋白质,也有极少部分为RNA。  生物酶的制造和应用领域逐渐扩大,生物酶在纺织工业中的应用也日臻成熟,由过去主要用于棉织物的退浆和蚕丝的脱胶,至现在在纺织染整的各领域的广泛应用,体现了生物酶在染整工业中的优越性。  酶在人体皮肤护理领域也于20

关于肝素酶的技术介绍

  目前,酶降解法中的肝素酶产品来源主要是肝素黄杆菌(Flavobacterium heparinum)中肝素酶I的分离纯化。但此法所得到的肝素酶产量低、纯化困难,造成酶的成本非常昂贵,也极大地限制了酶法制备低分子肝素的发展。而利用重组菌株生产肝素酶I是一条极有前景的途径,但通常的表达体产生的肝素酶

关于AmpC酶的分类介绍

  AmpC 酶按其产生的方式分为3 类:诱导高产酶、持续高产酶和持续低产酶。  (1) 诱导高产酶:AmpC 酶的合成往往与β2内酰胺类抗生素的存在有关。绝大部分肠杆菌科细菌和绿脓假单胞菌在正常条件下(即无β内酰胺类抗生素存在的条件下) 只产生少量的AmpC 酶。而当有诱导作用的β内酰胺类抗生素存

关于肝素酶的-应用介绍

  肝素酶具有许多重要的医药用途,主要用途如下:  (1)制备低分子和超低分子肝素  低分子量肝素和超低分子量肝素具有抗凝血功能,在抑制血管增生,阻止肿瘤转移,治疗癌症,抗过敏等方面也有特殊的功效。利用肝素酶生产低分子肝素条件比较温和,环境友好而且不会作用于硫酸基团,是理想的工业生产方法。  (2)

关于AmpC酶的检测介绍

  1)头孢西丁敏感试验:AmpC酶可以水解头孢西丁(FOX),即产AmpC酶的菌株对头孢西丁耐药。而超广谱β内酰胺酶(ESBLs)等其他β内酰胺酶一般不能分解头孢西丁,即产ESBLs的菌株对头孢西丁敏感。利用AmpC酶的这一特性,可以对产AmpC酶的菌株进行初步筛选。  2)三维试验:三维试验也是

关于消化酶的介绍

  消化酶(digestive enzyme ):参与消化的酶的总称。 一般消化酶的作用是水解,有的消化酶由消化腺分泌,有的参与细胞内消化。细胞外消化酶中,有以胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、羧肽酶原等一些不活化酶原的形式分泌然后再被活化的。  缺少消化酶会导致食物的不完全分解,然后集中在结肠,容易造成消化

关于叶绿体ATP酶的介绍

  催化在叶绿体中合成ATP的酶与线粒体中的ATP酶十分相似。叶绿体中ATP酶也像门把位于类囊膜外侧。存在于不垛叠的类囊膜中。ATP酶可分为CF1和CF0两部分。CF0插在膜中,起质子通道作用,CF1由α3、β3、γ、δ、ε亚基组成,α、β亚基有结合ADP的功能,γ亚基控制质子流动,δ亚基与CF0结

关于等位酶的基本介绍

  等位酶作为一种特殊形式的同工酶,它由一个基因位点、不同等位基因编码。根据等位酶谱带的遗传分析确定出每种等位基因在居群中的频率,从而计算出它们的遗传相似度或遗传距离,再根据遗传距离分析植物对污染的适应过程中遗传结构变化,依据分子钟进化理论计算出遗传进化的理论时间,从而评估污染对植物进化影响的速度和

关于修饰酶的相关介绍

  体内有些酶可在其他酶的作用下,将酶的结构进行共价修饰,使该酶活性发生改变,这种调节称为共价修饰调节(covalent modification regulation),这类酶称为修饰酶(prosessing enzyme)。  碱性磷酸酶去除5′-P,可防止二分子DNA片段5′端P基团自身空间障

关于整合酶的基本介绍

  整合酶(Integrase)是帮助逆转录病毒把携带病毒遗传信息的DNA整合到宿主的DNA的酶。通常由病毒自身携带,并且不存在于宿主细胞,所以可以作为抗病毒药物的一个合适靶标。  研究人员也许找到了对付艾滋病病毒(HIV)的新方法,那就是抑制一种被称为“整合酶”的HIV酶,研究人员正在试验一种新的