关于DNA聚合酶I的基本介绍
DNA聚合酶I(DNA-pol I),分子量109kD,为单肽链组成,400分子数/细胞,是原核生物的DNA聚合酶,由于发现最早命名为DNA聚合酶I,其他原核生物的DNA聚合酶,按发现的先后顺序分别命名为DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶Ⅴ。......阅读全文
DNA聚合酶的基本信息和共性
DNA聚合酶,又称DNA依赖的DNA聚合酶(DNA—dependent DNA polymerase,DNA pol),它是以亲代DNA为模板,催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。此酶最早是美国科学家Arthur Komberg于1957年在大肠杆菌中发现的,被称为DNA聚合酶Ⅰ(DNA
DNA聚合酶的基本信息和特性
也称耐高温DNA聚合酶。1988年,Saiki从嗜热水生真菌Thermus aquatics YT-1株中分离得到,该菌株于1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离出。特性良好的热稳定性;70℃ 2h,残留90%活性;93℃ 2h,残留60%活性;94℃ 2h,残留40%活性。5’→3’聚合酶
关于HTLVI病毒的基本信息介绍
人类嗜T细胞病毒(HTLV),是20世纪70年代后期发现的第一个人类逆转录病毒,有Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)和Ⅱ型(HTLV-Ⅱ)之分,分别是引起T细胞白血病和毛细胞白血病的病原体。属逆转录病毒科的RNA肿瘤病毒亚科。HTLV-Ⅰ可通过输血、注射或性接触等途径传播,也可经胎盘、产道或哺乳等垂直传播。
关于I超家族的基本信息介绍
已发现了几十个I-超家族芋螺毒素(I-CTX),该家族毒素比一般的芋螺毒素要大,并且成熟肽超变异。I-超家族芋螺毒素通常由33~46个氨基酸组成,含有4对二硫键。分子生物学研究发现,每个芋螺毒素均有单一的mRNA编码,原始翻译产物是它们的蛋白前体。前体通常由N-端的信号肽,中间的Pro区和C-端
关于DNA的转座的基本介绍
细菌、病毒和真核细胞的染色体上含有一段可在基因组中移动的DNA片段,这种转移称之为转座。携带为转座过程所需要的基因并可在染色体上移动的DNA片段称为转座因子或转座子。这种现象常是由转座子(jumping gene)上编码的转座酶所控制。 与其他的识别DNA的过程不一样,转座不需要转座子和它的目
关于基因扩增技术—聚合酶链反应的影响因素耐热DNA聚合酶的介绍
基因扩增技术—聚合酶链反应之所以能得到广泛应用,主要是因为Taq DNA聚合酶取代了大肠杆菌DNA聚合酶I大片段。Taq DNA聚合酶是从水生栖热菌Thermus Aquaticus(Taq)中分离出的热稳定性DNA聚合酶,使用Taq DNA聚合酶不仅简化了PCR程序,也极大地增加了基因扩增技术
关于DNA螺旋酶的基本介绍
至今在大肠杆菌中发现的1 )'VA螺 旋酶就有数种,分别称为螺旋酶I、ii、和mp蛋自等,都与 大肠杆菌DNA交制有关。作用是催化双螺旋DNA的解旋 和解链,在这解旋的过程中需水解ATP提供能巳(切开个l1. T对约需5目·mol,一切开一个C.一‘_;对约需21刘· mnl’)。在复制
关于外源DNA的基本介绍
外源DNA,是通过基因工程技术或病毒感染等途径引入靶细胞中的DNA序列。 对于一个细胞来说,内源DNA是其基因组的序列(本身生物就有的DNA),而外源的DNA是通过基因工程导入的其他物种或细胞的DNA,也可以是人工合成的一段DNA。
关于HBVDNA的基本介绍
HBV-DNA即是乙肝病毒的脱氧核糖核酸(即乙肝病毒基因)。 HBV-DNA是HBV感染最直接、特异性强和灵敏性高的指标,HBV-DNA阳性,提示HBV复制和有传染性。HBV-DNA越高表示病毒复制越厉害,传染性强。
关于抗DNA抗体的基本介绍
1957年Ceppelini等首次报道了系统性红斑狼疮(SLE)患者的血清成分可与DNA发生反应,随后建立了几种定性和定量检测抗DNA抗体的方法。随着研究的不断深入,发现定量检测IgG型抗DNA抗体对SLE更具诊疗参考价值。在SLE患者的血清中存在三种类型的抗DNA抗体,其中的抗dsDNA抗体和
关于DNA印迹法的基本介绍
Southern印迹法(Southern Blot)是将基因组 DNA经限制性内切酶酶解、琼脂糖凝胶电泳分离,使DNA片段按分子量大小排列在琼脂糖凝胶上。经碱处理凝胶使DNA变性(使双链DNA变成单链),通过具有一定盐离子浓度溶液的毛细管作用,将凝胶中变性的单链DNA片段原位地吸印到硝酸纤维素滤
耐高温DNA聚合酶的相关介绍
特性 良好的热稳定性; 70℃ 2h,残留90%活性; 93℃ 2h,残留60%活性; 94℃ 2h,残留40%活性。 5’→3’聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性; 5’→3’外切酶活性; 无3’→5’外切酶活性。 用途 聚合酶链反应(polymerase chain re
大肠杆菌DNA聚合酶的介绍
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 ⑴理化性质:纯化的DNApolⅠ由一条 多肽链组成,约含1000个 氨基酸残基,
RNA聚合酶的基本介绍
RNA聚合酶(RNA polymerase):以一条DNA链或RNA为模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。 催化转录的RNA聚合酶是一种由多个蛋白亚基组成的复合酶。如大肠杆菌的 RNA聚合酶有五个亚基组成,其分子量为480000,含有α,β,β’,σ,ω等5种不同的多肽,其中α为两个分
关于T4DNA聚合酶的简介
最近年来在枯草杆菌,鼠伤寒沙门氏杆菌等细胞及噬菌体T4、T5、T7中分离到DNA聚合酶,这里只介绍T4DNA聚合酶。T4DNA聚合酶与大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ相似,也是一条多肽链,分子量亦相近,但 氨基酸组成不同,它至少含有15个半胱氨酸残基。但是,它在作用上与大肠杆菌DNApol不同;[1]它无
用大肠杆菌-DNA-聚合酶-I-Klenow-片段进行双脱氧测序实验
当 Sanger 及其同事建立第一个 DNA 链终止延伸法时,只有一种合适的 DNA 聚合酶可用,即大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在时聚合 dNTP 的活性,但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,
关于I型内含子的基本信息介绍
一类具有酶催化功能的内含子,转录成RNA后,可以自我剪接。此类内含子转录后可以形成9个由碱基配对形成的特定二级结构,分别命名为P1至P9,P1和P7是保守的。 I型内含子具有自我剪接的功能,在剪接反应中,要有一种鸟嘌呤核苷(含有游离的3'-OH)G-OH。G首先结合到内含子的5'
关于聚合酶的介绍
1957年,美国科学家阿瑟·科恩伯格(Arthur Kornberg)首次在大肠杆菌中发现DNA聚合酶,这种酶被称为DNA聚合酶I(DNA polymerase I,简称:Pol I)。1970年,德国科学家罗尔夫·克尼佩尔斯(Rolf Knippers)发现DNA聚合酶II(Pol II)。随
DNA聚合酶的特性
DNA聚合酶有多种,E.coli就有三种。通常DNA聚合酶具有以下共同特点: ①需要DNA模板,因此这类酶又称为依赖DNA的DNA聚合酶;②需要RNA或DNA作为引物(primer),即DNA聚合酶不能从头催化; ③催化dNTP加到引物的3'-OH末端,其速率为1000nt/min,因而DN
DNA聚合酶的特性
原核生物大肠杆菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中发现,到目前为止已确定有5种类型,分别为DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V,都与DNA链的延长有关。 其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比较明确。DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe
DNA聚合酶的应用
E.coli的DNA pol Ⅰ涉及DNA损伤修复,在半保留复制中起辅助的作用。DNA polⅡ在修复损伤中也具有重要的作用。DNA polⅢ是一种多亚基的蛋白质,在DNA新链的从头合成中起复制酶的作用。复制的忠实性问题会影响到翻译的精确性,这种忠实性主要依赖于碱基的特异性配对。据估计每个碱基对将有
DNA聚合酶的定义
真核细胞有5种DNA聚合酶,分别为DNA聚合酶α(定位于胞核,参与复制引发,不具有5'-3'外切酶活性及3'-5'外切酶活性,有5'-3'聚合酶活性),β(定位于核内,参与高保真度复制,不具有5'-3'外切酶活性,其中疑似存在5
DNA聚合酶的功能
[1] 聚合作用:在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸 加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。 酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有 催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的 构象发生变化,促进3&
DNA聚合酶的功能
1)通过核苷酸聚合反应,使DNA链沿5’→3’方向延长(DNA聚合酶活性)[1] 2)催化由3’端水解DNA链(3’→ 5’核酸外切酶活性,用于切除错配的碱基)[1] 3)催化由5’端水解DNA链(5’→ 3’核酸外切酶活性,用于切除引物)[1] 4)催化由3’端使DNA链发生焦磷酸解
DNA聚合酶的特性
良好的热稳定性;70℃ 2h,残留90%活性;93℃ 2h,残留60%活性;94℃ 2h,残留40%活性。5'→3'聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;5'→3'外切酶活性;无3'→5'外切酶活性。
DNA聚合酶的用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物,3'末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。
DNA聚合酶的缺点
缺点无3'→5'阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu扩增产物为平末端。
DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶(DNA polymerase)是 细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、 引物、dNTP 等的情况下)及其相辅的活性。 真核细胞有5种DNA
DNA聚合酶的发现
在50年代的中期,A. Kornberg和他的同事们就想到DNA的复制必然是一种酶的催化作用,于是决心分离出这种酶并研究其结构和作用机制。为了达到这个目的,他们分离的蛋白,然后加到体外合成系统中即 同位素标记的dNTP、Mg2+及模板DNA,经过大量的工作,于1956年终于发现了DNA聚合酶Ⅰ(
DNA聚合酶的种类
原核生物大肠杆菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中发现,到目前为止已确定有5种类型,分别为DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V,都与DNA链的延长有关。其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比较明确。 DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe