简述核酸杂交的步骤

(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直接转印到支持膜上并使其牢固结合。这样等检测片段在凝胶上的位置就直接反映在了转印在膜上。RNA样品则可直接在变性条件下电泳分离,然后转印并交联固定。 (2)制备探针:探针是指一段能和待检测核酸分子依碱基配对原则而结合的核酸片段。它可以是一段DNA、RNA或合成的寡核苷酸。在核酸杂交实验中,探针需要被标记上可直接检测的元素或分子。这样,通过检疫与恩印膜上的核酸分子结合上的探针分子,既可知道被检测的核酸片段在膜上的位置,也就是在电泳凝胶上的位置,也就知道了它的分子大小。 (3)杂交:首先要进行预杂交,即用非特异的核酸溶液封闭膜上的非特异......阅读全文

简述核酸杂交的步骤

  (1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直

核酸杂交的步骤

(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直接转

核酸杂交的技术操作步骤

(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直接转

关于核酸杂交的步骤介绍

  (1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直

简述提取核酸的步骤

一、DNA的分离利用核蛋白溶于水和高盐溶液,但不溶于生理盐溶液的性质进行分离。流程:破细胞→浓盐溶液提取→生理盐溶液沉淀→苯酚变性除蛋白→水相DNA用冷乙醇沉淀。

简述核酸杂交的基本原理

  其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Nort

简述分子杂交仪的操作步骤

  1.接通电源打开开关,进行参数设定。参数设定,接通电源→按“选择”键到相应的参数行→按“设定”键,该行第一位开始闪烁,进入修改状态→按“置数”键,数字0~9循环到达所需的数字后按“移位”键到下一位数字修改最后修改完后,按“设定”键确认。按“选择”键可选择修改其他数据或回到正常显示状态。  2.达

简述核酸的分子杂交的临床意义

  针对白领族长期紧张工作状态引起的脂肪肝、肥胖症、高血脂、心血管病等慢性病进行健康筛查,及早发现潜在的危害健康危险因素,同时提出全面健康改善方案  异常结果: 各种病原微生物感染导致的病症以及各种不健康症状。  需要检查的人群:有各种病原微生物感染者、肿瘤或者癌症患者。

简述酵母双杂交系统的技术步骤

  1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒;  2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母;  3.再将文库质粒转化到酵母中;  4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。

简述核酸分子杂交技术的基本原理

  具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补还原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针(probe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生

核酸杂交的原理

其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Northe

杂交核酸的定义

中文名称杂交核酸英文名称hybrid nucleic acid定  义来源不同的单链DNA或单链RNA,通过碱基配对所形成的异质双链的核酸分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

什么核酸杂交?

具有互补序列的不同来源的单链核酸分子,按碱基配对原则结合在一起称为核酸杂交(hybridization)。杂交可发生在DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA之间。杂交是分子生物学研究中常用的技术之一,利用它可以分析基因组织的结构,定位和基因表达等,常用的杂交方法有Southern印迹法,No

核酸分子杂交的概念

核酸分子杂交(简称杂交,hybridization)是核酸研究中一项最基本的实验技术。互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链DNA或RNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。

关于核酸的杂交介绍

  具有互补序列的不同来源的单链核酸分子,按碱基配对原则结合在一起称为核酸杂交(hybridization)。杂交可发生在DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA之间。杂交是分子生物学研究中常用的技术之一,利用它可以分析基因组织的结构,定位和基因表达等,常用的杂交方法有Southern印迹法,

核酸杂交技术的概述

  DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。

核酸分子杂交的简介

  核酸分子杂交(简称杂交,hybridization)是核酸研究中一项最基本的实验技术。互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链DNA或RNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。  杂交过程是高度特异性的,可

核酸杂交的技术原理

其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Northe

核酸分子杂交的类别

核酸分子杂交可分为液相杂交和固相杂交。1.液相杂交液相杂交是让DNA探针和待测核酸在溶液中进行反应。在溶液中,待测核酸和探针均自由运动,增加了两者结合的机会,因此液相杂交要比固相杂交快5~10倍。但液相杂交不易分离杂交体和游离核酸探针,常规应用不易。2.固相杂交固相杂交是先将待测核酸样本结合到固相载

核酸分子杂交的应用

核酸分子杂交作为一项基本技术,已应用于核酸结构与功能研究的各个方面。核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性,因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断

什么是核酸杂交?

  核酸杂交(Hybridization): 互补的核苷酸序列(DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等)通过Watson-Crick碱基配对形成非共价键,从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程,称为核酸分子杂交技术,又称核酸杂交。

什么是核酸杂交?

核酸杂交(Hybridization): 互补的核苷酸序列(DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等)通过Watson-Crick碱基配对形成非共价键,从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程,称为核酸分子杂交技术,又称核酸杂交。

Southern杂交步骤

Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:(1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。(2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。(3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。(4) 让探针与

核酸杂交的概念和意义

核酸杂交(Hybridization): 互补的核苷酸序列(DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等)通过Watson-Crick碱基配对形成非共价键,从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程,称为核酸分子杂交技术,又称核酸杂交。

核酸分子杂交探针的介绍

  若杂交的目的是识别靶DNA中的特异核苷酸序列,这需要牵涉到另一项核酸操作的基本技术─探针(probe)的制备。探针是指带有某些标记物(如放射性同位素32P,荧光物质异硫氰酸荧光素等)的特异性核酸序列片段。若我们设法使一个核酸序列带上32P,那么它与靶序列互补形成的杂交双链,就会带有放射性。以适当

关于核酸分子杂交的应用

  核酸分子杂交作为一项基本技术,已应用于核酸结构与功能研究的各个方面。核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性,因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床

核酸的变性、复性和杂交

变性在一定理化因素作用下,核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂,变成单链的现象称为变性(denaturation)。引起核酸变性的常见理化因素有加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。在变性过程中,核酸的空间构象被破坏,理化性质发生改变。由于双螺旋分子内部的碱基暴露,其A260值会大大增加。A260值的增

分子杂交技术Southern杂交的操作步骤

  (1) 约50μl体积中酶切10pg-10μg的DNA, 然后在琼脂糖凝胶中电泳12-24小时(包括DNA分子量标准物)。  (2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙锭,将凝胶放置其中染色30分钟, 然后照相。  (3) 依次用下列溶液处理凝胶,并轻微摇动: 500ml 0.2m

分子杂交技术Northern杂交的操作步骤

  (1)RNA经变性电泳完毕后,可立即将乙醛酰RNA转移至硝酸纤维素滤膜上。转移方法与转移DNA的方法相似。  (2)转移完毕后 ,以6×SSC溶液于室温浸泡此膜5分钟,以除去琼脂糖碎片。  (3)将该杂交膜夹于两张滤纸中间,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小时。  (4) 用下列两种溶液之一进行

细胞化学词汇杂交核酸

中文名称:杂交核酸英文名称:hybrid nucleic acid定  义:来源不同的单链DNA或单链RNA,通过碱基配对所形成的异质双链的核酸分子。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)