异源蛋白表达的密码子偏爱性介绍
原核细胞表达真核基因的cDNA时,会涉及到密码子的偏爱性,真核细胞在表达原核来源的基因、真核基因的cDNA拷贝或其他无内含子的基因时可能表现很多特异问题。富含AT的基因在很多真核细胞中表达时会遭遇很剧烈的障碍。主要的真核信号序列如 加poly-A的位点、酵母转录终止位点和真核mRNA去稳定序列都是富含AT的。内含子序列也趋向于富含AT,尽管他们有参与剪切过程的很特异的识别序列。虽然绝大多数原核基因没有剪切或聚腺苷过程,但这些真核过程需要的保守序列可能存在于原核基因中,因此当这些基因在真核细胞中表达时可能引起特异的问题。而且诸如哺乳动物和单子叶植物细胞的特异真核表达系统可能不能有效地表达无内含子的基因。......阅读全文
酵母表达外源蛋白(foreign-protein)(4)
15、菌体密度:菌体是在BMMY中培养的,可以不用BMMY做对照,在600nm处测OD值,培养基和PBS光吸收都很低,PBS更方便。麦芽浸提液培养酵母(不换液,补料),生长阶段结束后,密度可达到10-12,诱导培养结束后,密度可达到18左右。如果用1体积的BMGY,在生长阶段结束后,换液时,加入1/
异源抗血清的功能介绍
中文名称异源抗血清英文名称heterologous antiserum定 义来源于异种动物(如马对人),含特异性抗体的血清。应用学科免疫学(一级学科),免疫病理、临床免疫(二级学科),感染免疫(三级学科)
异源载体疫苗的基本介绍
中文名称异源载体疫苗英文名称heterologous carrier vaccine定 义一种新型疫苗。即将疫苗附着在大分子载体上,以增强其免疫原性。所用载体一般是具有免疫原性的大分子蛋白质或减毒的活病毒、细菌。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
异源异倍体的概念
中文名称异源异倍体英文名称alloheteroploid定 义染色体来自不同染色体组的异倍体。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
关于异源多倍体的介绍
异源多倍体(allopolyploid)生物学名词,指不同物种杂交产生的杂种后代经过染色体加倍形成的多倍体。常见的多倍体植物大多数属于异源多倍体,例如,小麦、燕麦、棉、烟草、苹果、梨、樱桃、菊、水仙、郁金香等。对应的有同源多倍体,同一物种经过染色体加倍形成的多倍体,称为同源多倍体。
关于异源同源基因的基本介绍
异源同源基因(xenologous gene)是由于基因在不同物种间的横向转移(horizontal transfer)而产生的。异源同源基因在原核生物中研究比较多。最近研究表明,异源同源基因的原位取代xenolo—gous gene displacement in situ)是细菌进化的强大推
用于外源蛋白质生产的细菌表达系统
实验方法原理 实验步骤 一、使用大肠杆菌生产外源蛋白 有越来越多的细菌表达系统可用于外源蛋白的生产。影响选择某个表达系统的因素包括目标蛋白质的天然性质、使用者的经
用于外源蛋白质生产的细菌表达系统
细菌表达系统有各种各样的载体和宿主菌可供选择,大部分工程菌的增殖时间短, 不仅便于快速评价实验结果,而且降低了技术和设备无菌要求的严格性。经过简单的调整, 许多在实验室规模下具有的这些内在优点在大规模的自动生产过程中也具有 。实验步骤一、使用大肠杆菌生产外源蛋白有越来越多的细菌表达系统可用于外源蛋白
关于蛋白表达系统—昆虫表达系统的介绍
昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统,它具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。昆虫杆状病毒表达系统是国内外十分推崇的真核表达系统。利用杆状病毒结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体,可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加
关于蛋白表达系统—植物表达系统的介绍
植物能够表达来自动物、细菌、病毒以及植物本身的蛋白质易于大规模培养和生产,且在基因表达与修饰及安全性方面有特别的优势,因此利用植物生产外源蛋白质的研究展现了极其诱人的前景。多种抗体、酶、激紊、血浆蛋白和疫苗等都已通过基因工程的手段在植物的叶、茎、根、果实、种子以及植物细胞和器官中得到表达,然而提
异源基因的概念
中文名称异源基因英文名称heterologous gene定 义来自不同物种的、在进化过程中不源于共同祖先的基因。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
关于胚胎诱导的异源诱导者介绍
能诱导原肠胚外胚层形成一定的结构,并具有区域性诱导效应的组织称为异源诱导者(heterogeneous inductor)。它们虽不是组织者,却具有与组织者相当的形态发生效应,而且无种的特异性。它们包括许多成体和幼体的多种组织,广泛存在于动物界,甚至某些有机和无机化合物。最初发现成体组织对两栖类
异源多倍体的研究相关介绍
经典的异源多倍体是由G.Karpechenko于1928年合成的。他想培育一种可育的杂种蔬菜,地上部分长有甘蓝(卷心菜Brassica)的叶子而地下部分长萝卜(Raphanus),甘蓝和萝卜这两个物种都是2n=18,而且亲缘关系比较近,可以进行杂交。从种子获得可以生存的杂种后代。但由于两亲本染色
膜蛋白的表达相关介绍
常用于重组膜蛋白的表达系统有真核表达系统、原核表达系统和近些年来发展的无细胞表达系统。其中以大肠杆菌(E.coli)为代表的原核表达系统因为操作简单、成本相对低廉、遗传背景清楚、方便同位素标记,以及有大量可利用的表达载体和宿主菌株等原因,是当下获取重组膜蛋白的最主要途径。对于一些膜蛋白而言,采用
克隆基因的表达(expression-of-cloned-gene)2
在双链 DNA 分子中,只有一条链转录成 mRNA,这条链称为有意义链(sense strand),该基因的另一条链则称反意义链(antisense strand)。在含有许多基因的 DNA 双链中,每个基因的有意义链并不是在同一条 DNA 链上。也就是说,一条链上既具有某些基因的有意义链,
DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达4
(3)CHO细胞稳定表达系统:动物细胞瞬时表达系统中外源基因没有稳定地整合到宿主细胞染色体中,一染色体外DNA的形式存在。因而只能瞬时表达。要使外源基因在宿主细胞中高效、稳定地表达,必须建立一个稳定表达系统,包括适宜的表达载体、有效的基因转染、标记基因和目标基因的选择与共扩增、受体适当的受体细胞和培
在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略
本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。 大肠杆菌具有两个显著特征:操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养,它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌有众多的优点,但并非每一种
DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达2
2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后,离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水,为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般
DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达1
通过外源DNA的重组、克隆、以及鉴定,可以获得所需的特异DNA克隆。外源克隆基因在某种表达载体及适宜的宿主细胞中可表达为相应的蛋白质,这就组成了外源基因的蛋白表达系统。表达后的蛋白质必须具有原来的生物学活性,这是基于正确的基因转录、转录后加工、mRNA翻译及翻译后修饰,同时与表达载体的结构和表达体系
DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达3
(6)遗传标记: 从成千上万个哺乳细胞中,检测出极少数的含DNA重组体的转染细胞,并鉴定已导入外源DNA是哺乳动物细胞基因表达系统的一个关键内容。因此,在真核生物表达载体上必须附有标记基因,才能进行筛选。常用的标记基因有:胸苷激酶基因(thymidine kinase,TK)、二氢叶酸还原酶
外源基因在原核细胞中的表达系统
外源基因在原核细胞中表达是基因工程操作中最初取得成功的途径。1 原核生物基因表达的特点同所有的生命过程一样,外源基因在原核细胞中的表达包括两个主要过程:即 DNA转录成mRNA和 mRNA翻译成蛋白质。与真核细胞相比,原核细胞的表达有以下特点:①原核生物只有一种RNA 聚合酶(真核细胞有三种)识别原
关于密码子密码子的起源介绍
除了少数的不同之外,地球上已知生物的遗传密码均非常接近;因此根据演化论,遗传密码应在生命历史中很早期就出现。现有的证据表明遗传密码的设定并非是随机的结果,有一种解释是,一些氨基酸和它们相对应的密码子有选择性的化学结合力,这就显示现 在复杂的蛋白质制造过程可能并不是一早就存在,而最初的蛋白质很可能
外源基因的诱导表达
1.目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2.原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长,lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖),解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-
原核表达之宿主菌株选择指南
在原核蛋白表达过程中,选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素:表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以获得最满意的表达效果。事实上,在平时的实验中,最容易被忽视的就是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株,或者是载体配套的菌株,而不去追究原因——即使表达结果不佳,大多在表
关于包涵体表达蛋白质的优越性的介绍
为了研究基因的功能,可以把体内的基因转移到其他表达宿主中,研究基因表达性状以确定基因的功能。但是,外源基因的表达,特别是真核生物基因在大肠杆菌中的表达,由于宿主菌缺乏此种基因表达的调控机制,细胞内的化学环境与其天然环境差异,如氧化还原环境、胞内pH、自由水的浓度,以及外源基因的导入,使得表达目的
异源多元单倍体的概念
中文名称异源多元单倍体英文名称allopolyhaploid定 义细胞染色体来自异源多倍体的不同染色体组的一类多元单倍体。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
异源翻译系统的定义
中文名称异源翻译系统英文名称heterologous translational system定 义将基因或信使核糖核酸(mRNA)转移到非自身的宿主表达系统中进行蛋白质的翻译合成,该宿主表达系统即为异源翻译系统。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
异源抗血清的定义
中文名称异源抗血清英文名称heterologous antiserum定 义来源于异种动物(如马对人),含特异性抗体的血清。应用学科免疫学(一级学科),免疫病理、临床免疫(二级学科),感染免疫(三级学科)
异源抗血清的定义
中文名称异源抗血清英文名称heterologous antiserum定 义来源于异种动物(如马对人),含特异性抗体的血清。应用学科免疫学(一级学科),免疫病理、临床免疫(二级学科),感染免疫(三级学科)
异源双链的概念
中文名称异源双链英文名称heteroduplex定 义(1)两种不同来源的单链DNA分子杂交而成的DNA双链,是碱基没有完全互补的DNA双链。(2)DNA与RNA杂交形成的双链。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)