关于石蜡切片的抗原修复及方法介绍

石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。 常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。......阅读全文

病理制片技术——组织石蜡切片

组织经石蜡包埋后制成的蜡块,用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。石蜡切片法现使用的切片机有平推式切片机、轮转式切片机两种。一、平推式切片机石蜡切片法1.切片前的准备:清洗过的载物片(或免清洗的),毛笔,铅笔,小竹片,水槽,雾化器,摊片器,切片刀,刀架。2.切片制作步骤:刀架的粗削部放在头端,在切片机

组织病理实验_石蜡切片法

实验方法原理石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。实验

石蜡切片有什么优缺点

教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。优点:1、组织细胞形态清晰2、切片可长期保存,供教学、科研及病理诊断及复察,并可利用蜡块作其他项目的回

组织石蜡包埋和切片技术

包埋剂embedding agent   在制作切片或超薄切片时,由于组织是柔软的,或局部的软硬不均,这样制作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部,整个组织一样硬化,以利于切成薄片,这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片,用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂;电子显微镜则

石蜡切片阴性染色产生的原因

⑴一抗和二抗浓度不合适或孵育条件不妥。⑵荧光素提前衰退。荧光素质量不佳或操作过程中没有注意避光等防止荧光素衰退的事项。⑶血清封闭时间过长。⑷抗体稀释液PH值不合适,影响抗原抗体反应。⑸组织切片不平、裂片或脱片很严重,易引起大块阴性着色。⑹组织标本不新鲜或已经冷冻组织制成的切片中抗原易弥散,易引起本来

石蜡切片术的制作过程

光学显微标本的制作技术【实验目的】了解光学显微镜切片制作技术的基本方法步骤。【实验原理】采用光学显微镜研究一般生物体的内部结构,在自然状态下是无法观察清楚的,多数动、植物材料都必须经过某种处理,将组织分离成单个细胞或薄片,光线才能通过细胞。为了适应这个需要,就产生了光学显微镜制片技术。光学显微镜的制

常用抗原修复方法

用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片: 1)抗原热修复 可根据实验室的具体条件,选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液,如TBS、PBS、重金属盐溶液等,但实验证明,以0.01M枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)效果最好。请选用我公司提供的ZLI-9064

常用抗原的修复方法

用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片:1)抗原热修复 可根据实验室的具体条件,选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液,如TBS、PBS、重金属盐溶液等,但实验证明,以0.01M枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)效果最好。请选用我公司提供的ZLI-9064 枸橼酸盐缓

石蜡切片法在切片步骤后为什么二甲苯无法溶掉石蜡

你在粘片后,直接将玻片放入二甲苯里面了么,如果是这样的话,你看看玻片上面是否还存在多余的水分,如果有,我建议你在粘片后,先将之烘干,等水分完全干去,再将玻片投入二甲苯里,

组织免疫荧光是用石蜡切片还是冰冻切片

二者应该都是可以的,具体要看自身的实验条件哪个操作更方便以及抗体的性质。看你的实验要求,冰冻片要求较高(低温环境,液氮,冰冻切片机,OCT包埋剂等等),石蜡片的制作就比较简单,试剂也较便宜。另外看你购买的抗体适用于哪种片子免疫组化的话,一般大都使用石蜡切片。免疫荧光染色的话,都可以的,冰冻切片比较容

石蜡切片免疫组化染色

实验概要掌握石蜡切片免疫组化染色实验中载玻片的处理,常用酶消化,抗原热修复及基本实验步骤。实验步骤1. 载玻片的处理     1) APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱

石蜡切片免疫组化实验

即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法免疫组化可应用于:(1)确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究;(2)诊断异常细胞,指导治疗。实验方法原理根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入

石蜡切片免疫组化实验

实验方法原理 根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入底物显色。实验材料 石蜡切试剂、试剂盒 PBS柠檬酸盐缓冲液蒸馏水增强剂酶标抗鼠 兔聚合物苏木素酒精二甲苯树胶盐酸二氨基联苯胺仪器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头

石蜡切片免疫组化实验

即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法 卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法 链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(SABC)法            

石蜡切片免疫组化染色

实验概要掌握石蜡切片免疫组化染色实验中载玻片的处理,常用酶消化,抗原热修复及基本实验步骤。实验步骤1. 载玻片的处理     1) APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱

石蜡切片免疫组化步骤

实验概要石蜡切片免疫组织化学染色主要试剂染色缸;染色架;保湿盒;晾片盘;微量移液器;0.2MPBS,乙醇,二甲苯,BSA,中性树胶等实验步骤1.     石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟;2.     脱蜡和水化:二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95

HE染色石蜡切片制作的基本过程

HE染色石蜡切片制作的基本过程:1、取材与固定从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。2、脱水透明一般用由低浓度到高浓度酒精作脱

抗原修复锅的使用方法

免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露.组织经甲醛固定.甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联,使决定簇的构像改变.从而影响检测蛋白表达.要充分暴露抗原决定簇,通常用到抗原修复锅Antigen Retriever。强烈推荐EMS最具有竞争力的一款产品,适于甲醛固定的组织,经石蜡包埋后进行免疫

抗原修复锅的使用方法

免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露.组织经甲醛固定.甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联,使决定簇的构像改变.从而影响检测蛋白表达.要充分暴露抗原决定簇,通常用到抗原修复锅。强适于甲醛固定的组织,经石蜡包埋后进行免疫染色前的处理,配合特别的抗原修复缓冲液确保你得到最搞质量的免疫染色效果

免疫组织化学的常见问题有哪些

  免疫组化实验所用的抗体  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。  免疫组化实验所用的组织和细胞

关于免疫组织化学实验的相关问题

  免疫组化实验所用的抗体  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。  免疫组化实验所用的组织和细胞

免疫组织化学的常见问题

  免疫组化实验所用的抗体  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。  免疫组化实验所用的组织和细胞

在什么情况下进行组织抗原修复及抗原修复的条件

(1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。 (2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的

免疫组织化染色

实验材料 新鲜组织试剂、试剂盒 二甲苯酒精H2O2抗原修复液枸橼酸钠缓冲液石蜡福尔马林PBSDAB苏木素树胶丙酮打孔液柠檬酸钠APES仪器、耗材 恒温摇床高压锅塑料切片架耐温玻璃容器-80℃冰箱恒冷冰冻切片机载玻片实验步骤 一.石蜡切片免疫组化染色实验步骤:1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置

免疫组织化染色

验材料新鲜组织试剂、试剂盒二甲苯酒精H2O2抗原修复液枸橼酸钠缓冲液石蜡福尔马林PBSDAB苏木素树胶丙酮打孔液柠檬酸钠APES仪器、耗材恒温摇床高压锅塑料切片架耐温玻璃容器-80℃冰箱恒冷冰冻切片机载玻片实验步骤一.石蜡切片免疫组化染色实验步骤:1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置60℃ 1

免疫荧光技术两种检测方法

免疫荧光技术有两种检测方法:用荧光标记抗体示踪或检测相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光标记抗原示踪或检测相应抗体的方法称荧光抗原法。其中以荧光抗体方法较常用。 1.在开始实验研究前,有哪些因素需要考虑? A:1.根据抗原选择合适的抗体:确认抗原可以识别哪一种异构体以及抗原

石蜡切片或细胞的原位杂交实验

细胞RNA的原位杂交实验用于在混杂的细胞群体和组织中、定位特异的mRNA在细胞中的存在位置。实验材料石蜡切片试剂、试剂盒HCl二甲苯乙醇SSCPBS链霉蛋白酶甘氨酸DTTRNA酶消化液乙酸铵仪器、耗材染色盘加湿盒载玻片烘箱水浴锅培养箱实验步骤1.  准备脱蜡/再水化系统(可重复使用数次)及0.2 m

石蜡块做超薄切片的样品制作流程

石蜡块做超薄切片的样品制作流程如下: 1、取材:从石蜡块上相应部位切下约1mm3 的小块。 2、溶蜡:将取下的标本放在一张滤纸上,40℃烘箱内烘1小时,然后转放入二甲苯溶液中40℃烘箱内继续浸泡8—12h。 3、水化:纯丙酮30分钟、90%、80%、70%丙酮各15分钟。 4、漂洗:用缓冲液漂洗(0

石蜡切片或细胞的原位杂交实验

实验材料 石蜡切片试剂、试剂盒 HCl二甲苯乙醇SSCPBS链霉蛋白酶甘氨酸DTTRNA酶消化液乙酸铵仪器、耗材 染色盘加湿盒载玻片烘箱水浴锅培养箱实验步骤 1.  准备脱蜡/再水化系统(可重复使用数次)及0.2 mol/l HCl同时,将载有切片样品的载玻片(玻片盒中,于-20℃或-70℃贮存)置

石蜡切片或细胞的原位杂交实验

            实验材料 石蜡切片 试剂、试剂盒 HCl 二甲苯 乙醇 SSC