怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正常现象，也可算作没有扩增）。2、溶解曲线：（1）溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线；（2）一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间；（3）出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因所致；（4）基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。3、溶解曲线......阅读全文
SYBRGreen－QPCR－in－the－ABI－7700
MaterialsROX Passive Reference Dye 25 µM, 50x (Invitrogen, Cat. No. 12223-012)SYBR Green I, "10,000x" concentrate (Molecular Probes, Cat. No. S7563)Su
QPCR实验操作流程
Q-PCR实验流程一、 ①实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台照射紫外，
QPCR实验操作流程
Q-PCR实验流程 一、 ①实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净
定量PCR实验技术－QPCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
qpcr拷贝数大于1.5
是正常的。查融合基因时候，拷贝数大于3w才能正式有效性。 pcr荧光定量检测下限25拷贝，意思是样本中原有目标DNA的最少数量。在另外的一组管子中，加入已知拷贝数的DNA同时扩增，每个管子中加入的数量是不同的，但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。PCR反应完成后，把已知拷贝
QPCR常见问题及解决方法
Q-PCR常见问题及解决方法Q1．CT值出现过晚A2.1.扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。2.PCR各种反应成分的降解或加样
Chip－QPCR定量分析方法分享
相关专题Q-PCR定量分析CHIP最近做了CHIP，用Q-PCR方法进行定量分析，现将我对一些文献资料的总结传上，希望对大家有帮助！i. Normalizeeach ChIP DNA fractions’ Ct value to the Input DNA fraction Ct valuefor
怎么验证qpcr引物设计得好不好
引物是一小段核苷酸。PCR中，两个引物分别与目地DNA的2条子链的两端互补，也就是如果从图的平面来看：一个引物与上一条链的左端互补，另一个引物与下一条子链的右端互补。 所以两个引物的序列是不相同的，这样才不会乱。
ELISA、WB、QPCR采样及取样注意事项
ELISA取样及运输注意事项一、血清提取方法：1.全血促凝管取血，轻轻颠倒两三次，放置片刻让全血凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。2.全血普通EP管取血，室温放置2h左右，让其凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。特别注意：取血清避免震荡，以防止溶血，溶血会对结果有影响。
怎么验证qpcr引物设计得好不好
引物是一小段核苷酸。PCR中，两个引物分别与目地DNA的2条子链的两端互补，也就是如果从图的平面来看：一个引物与上一条链的左端互补，另一个引物与下一条子链的右端互补。 所以两个引物的序列是不相同的，这样才不会乱。
qpcr溶解曲线中rn值是什么意思
ΔRn 的值表示PCR过程中,探针降解的量,就是PCR产物的量
qpcr的目的基因cp值太大怎么办
每个样本RNA量都确保取500ng反转吗？如果这些没问题的话，我建议多做几个内参，比如GAPDH/B2M...选做三个内参 再取平均值，得到的数据会可靠些。
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
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1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
怎么通过QPCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果
1、扩增曲线（如果做双ΔCT法）：（1）扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正
qPCR溶解曲线虽然呈单峰，但峰的高度不同，代表什么
熔解曲线纵坐标为荧光强度对温度的一次导数的负值，高度应该是反应其产物的产量不同。
qPCR溶解曲线虽然呈单峰，但峰的高度不同，代表什么
熔解曲线纵坐标为荧光强度对温度的一次导数的负值，高度应该是反应其产物的产量不同。
qPCR溶解曲线虽然呈单峰，但峰的高度不同，代表什么
熔解曲线纵坐标为荧光强度对温度的一次导数的负值，高度应该是反应其产物的产量不同。
实时荧光定量PCR的研究进展及其应用（二）
1.3 定量方法 在real-time Q-PCR中，模板定量有两种策略；相对定量和绝对定量。相对定量指的是在一定样本中靶序列相对于另一参照样本的量的变化。绝对定量指的是用已知的标准曲线来推算未知的样本的量。 1.3.1 标准曲线的法的相对定量 由于在此方法中量的表达是相对于某个参照物的量而言的
qpcr融解曲线主峰前面有个向下的小峰，怎么回事
有点波动可能是由于仪器精密度引起的，不必太在意
QPCR内参太高，什么原因
提取组织RNA反转录后做Q-PCR，选18S做内参基因。以前做一般都10个循环左右，最近这一批组织却22个循环。溶解曲线也是好的，反转录体系也没有问题（用以往的RNA同时反转录做Q-PCR，18S的CT值还是10左右）。提取RNA好像也没有问题。我是分离了脂肪组织中的成熟脂肪细胞部分，确实不好提RN
实时荧光定量PCR
Real Time PCR实时荧光定量PCR 其定量的基本原理是在 PCR 反应体系中加入非特异性的荧光染料（如： SYBR GREEN I ）或特异性的荧光探针（如： Taqman 探针），实时检测荧光量的变化，获得不同样品达到一定的荧光信号（阈值）时所需的循环次数： CT 值（ Cycle