用RNaseⅢ消化长片断双链RNA制备siRNA的方法特点
其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA ，然后用RNase Ⅲ (or Dicer) 在体外消化，得到一种siRNAs“混合鸡尾酒”。在除掉没有被消化的dsRNA后，这个siRNA混合物就可以直接转染细胞，方法和单一的siRNA转染一样。由于siRNA混合物中有许多不同的siRNAs，通常能够保证目的基因被有效地抑制。dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse Ⅲ通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。最适用......阅读全文
双链RNA病毒的特点
双链RNA病毒有两个特点：一是它的基因组为10-12条双链RNA分子；二是它有双层衣壳，而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中，在该聚合酶的作用下病毒基因组转录正链RNA，它们自髓核逸出。它们既能作为mRNA，又能作为病毒基因组的模板。MRNA翻译结构蛋白，装配内层衣壳后，正链RNA进
双链RNA病毒的特点
双链RNA病毒有两个特点：一是它的基因组为10-12条双链RNA分子；二是它有双层衣壳，而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中，在该聚合酶的作用下病毒基因组转录正链RNA，它们自髓核逸出。它们既能作为mRNA，又能作为病毒基因组的模板。MRNA翻译结构蛋白，装配内层衣壳后，正链RNA进
RNA干扰的详细实验步骤
步骤包括:(一)siRNA的设计1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：GenesilAmbion2. RNAi目标序列的选取原则：(1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够
RNAi实验原理与方法
RNAi实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（
RNAi的实验原理与方法
近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNA
RNAi实验原理与方法选择（一）
一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证
RNAi的实验原理和操作实用技术
几十年来生物学上最重要的进展，也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉（RNAi）是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象，是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。 此后，科学家们明白，RNAi还有其他形式，它既是一种了解基因功能的强大工具，又是很多生
双链RNA结合域的特点
中文名称双链RNA结合域英文名称dsRNA-binding domain定 义双链RNA或RNA中的双链区能被特异蛋白质所结合的区域。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
RNAi：制备siRNAs的方法
越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference p
siRNA表达框架制备方法的特点
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
RNAi的作用机制及siRNA的合成方法
RNAi的作用机制及siRNA的合成方法RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA， dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达，用特异性的抗体几乎检测不到靶向
果蝇Dicer2结合双链RNA加工生成siRNA的分子机制
RNA干扰（RNAi）是许多真核生物中一种保守的RNA沉默机制， 小干扰RNA是RNA干扰的关键组成部分。在小RNA的加工过程中，Dicer家族蛋白起到了重要的作用，它们发挥作用的过程中常需要双链结合蛋白（dsRBP）作为辅因子来帮助它们发挥功能。在果蝇中，siRNA的产生是由ATP依赖型的Dice
siRNA表达载体制备方法的特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
关于siRNA的体外制备的介绍
1、化学合成siRNA 合成siRNA应用广泛，这种方法的得率和纯度都比较高。对合成siRNA还可以进行一系列化学修饰以提高siRNA的稳定性、降低脱靶效应，以及（或者）阻止激活天然免疫反应。多家公司，包括Ambion、Thermo Scientific Dharmacon、QIAGEN和Si
RNAi的作用机制及siRNA的合成方法（二）
2.3 倍增阶段 siRNA在RNA依赖性RNA聚合酶(RdRP)的作用下，以mRNA为模板，siRNA为引物，扩增产生足够数量的dsRNA作为底物提供给Dicer酶，产生更多的siRNA， 可再次形成RISC，并继续降解mRNA，从而产生级联放大效应。并作用于靶mRNA。如此反复
RNAi相关术语
1.RNAi ：（RNA interference）RNA干扰一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi ，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制
RNAi实验中双链短RNA（dsRNA）制备过程
RNAi 实验中双链短RNA（dsRNA）制备过程，本实验方法来自于加州大学Jim教授实验，很权威！Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi1. Design polymerase chain reaction (PCR ) prim
siRNA表达框架制备siRNA的方法介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
基因技术专题1
专题一：RNA干扰技术（RNAi）1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA。这些
RNA干涉实验
化学合成siRNA分子实验 体外转录合成siRNA分子实验 采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子 采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验 实验方法
RNA干涉实验——体外转录合成siRNA分子实验
实验方法原理采用噬菌体 RNA 聚合酶（T7、T3 或 SP6 RNA 聚合酶）可以很方便地在体外合成 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链，然后再通过退火形成双链的 siRNA 分子。体外转录合成 siRNA 分子与化学合成双链 RNA 分子相比，其成本相对要低得多，而且有研究报道前者对靶基因
siRNA表达载体制备siRNA的方法介绍
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
双链RNA病毒的复制
虽然同为双链核酸分子，但双链RNA的复制方式和双链DNA不同，双链RNA不是半保留复制，而是全保留复制，复制需要经过mRNA中间体。双链RNA病毒有两个特点，一是它的基因组为10-12条双链RNA分子；二是它有多层衣壳，而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中，在该聚合酶的作用下病毒双链
RNAi技术研究进展
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现，植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post transcri
RNAi技术研究进展
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现，植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post tran
RNAi技术研究进展
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现，植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post transcri
哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计，实验和分析siRNA效应
转录后基因沉默，也称为RNA干扰，是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。这种现象可能是作为一种抑制病毒感染和转座子跳跃的细胞防御机制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratcliff
RNAi技术专有名词(1)
1.RNAi：（RNA interference）RNA干扰 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机
用siRNA或其生物合成前体RNAi诱导
通过转染外源siRNA进行的基因敲低通常是不令人满意的，因为该效应仅是短暂的，特别是在快速分裂的细胞中。这可以通过产生siRNA的表达载体来克服。修饰siRNA序列以在两条链之间引入短环。得到的转录物是短发夹RNA（shRNA），其可以通过Dicer以其通常的方式加工成功能性siRNA。典型的转