体细胞重组定位法介绍
原理相同于基因纯合化的定位方法。由于体细胞交换发生得较少,所以常用 X射线处理杂合体使之发生更多的体细胞交换。......阅读全文
体细胞重组定位法介绍
原理相同于基因纯合化的定位方法。由于体细胞交换发生得较少,所以常用 X射线处理杂合体使之发生更多的体细胞交换。
重组频率定位法介绍
原理和在高等动植物中用杂交子代中重组频率的高低来计算两个基因间的距离没有不同。不过在微生物中一个菌落或一个噬菌斑代表一个个体,因而便于通过大量的杂交子代的观察来进行精细结构分析;而且往往采用选择性培养方法淘汰没有发生重组的亲本,使分析的效率和精密度进一步提高。不过精细结构的重组频率容易受到突变位置本
体细胞重组定位法对基因结构进行分析的方法原理
原理相同于基因纯合化的定位方法。由于体细胞交换发生得较少,所以常用 X射线处理杂合体使之发生更多的体细胞交换。
重组频率定位法对基因结构进行分析的方法介绍
原理和在高等动植物中用杂交子代中重组频率的高低来计算两个基因间的距离没有不同。不过在微生物中一个菌落或一个噬菌斑代表一个个体,因而便于通过大量的杂交子代的观察来进行精细结构分析;而且往往采用选择性培养方法淘汰没有发生重组的亲本,使分析的效率和精密度进一步提高。不过精细结构的重组频率容易受到突变位置本
体细胞重组的概念
淋巴细胞在发育,成熟的过程中,抗原受体基因首先在DNA水平上进行重排,形成可表达BCR和TCR的功能性基因,然后才能得以表达TCR和BCR,这一过程称为体细胞重组。
体细胞重组的概念
淋巴细胞在发育,成熟的过程中,抗原受体基因首先在DNA水平上进行重排,形成可表达BCR和TCR的功能性基因,然后才能得以表达TCR和BCR,这一过程称为体细胞重组。
缺失定位法介绍
原理和基因的缺失定位相同,不过需要具备种类更多而差别更为细微的缺失菌株。在大肠杆菌的 T4噬菌体中曾经获得一系列快速溶菌突变型rⅡ基因部分缺失突变型,利用这些突变型可以迅速测定任何一个 rⅡ点突变在rⅡ基因中的位置。图5中的每一编号标明的横线表示一个缺失突变型的缺失范围。定位分两步进行,首先测定大的
基因定位方法介绍单元化定位法
在构窠曲霉这一类真菌的准性生殖过程中,杂合二倍体细胞在有丝分裂时常随机地丢失它的染色体。染色体在多次有丝分裂过程中逐条丢失而使二倍体细胞终于转变为单倍体细胞的过程称为单元化。如果一对染色体中带有显性的野生型基因的染色体丢失了,那么同源染色体上隐性基因的性状便得以表现。此外,通过体细胞交换也可以从杂合
缺失定位法进行基因定位的方法介绍
一个细胞中的两个同源染色体中的一个上有一个突变基因,另一染色体上有一小段已知范围的缺失,如果这一突变基因的位置在缺失范围内,便不可能通过重组而得到野生型重组体;如果突变基因不在缺失范围内,那么就可以得到野生型重组体。利用一系列已知缺失位置和范围的缺失突变型,便能测定突变型基因的位置。
转录定位法进行基因定位的方法介绍
许多 RNA病毒的整个基因组往往作为一个单位转录。随着转录的进行,由基因组上各个基因所编码的蛋白质也依序在寄主细胞中出现。当寄主细胞被紫外线照射使本身的蛋白质合成受到抑制时,病毒蛋白的出现更为明显。紫外线照射也起着抑制病毒基因组的转录的作用。紫外线在 RNA分子的某一部位造成损伤后,损伤的部位和它后
体细胞交换法进行基因定位的方法介绍
三点测验和着丝粒距离法中所测定的都是发生在减数分裂中的染色体交换。1936年美国遗传学家C.斯特恩在果蝇中发现体细胞在有丝分裂过程中也可以发生染色体交换(见连锁和交换)。50年代中G.蓬泰科尔沃等在研究构窠曲霉时发展起来一种利用体细胞交换的系统的基因定位方法。在进行有丝分裂的杂合二倍体细胞中,体细胞
同源重组法技术介绍
同源重组法:同源重组(homologous recombination)是将外源基因定位导入受体细胞的染色体上,在该座位因有同源序列,通过单一或双交换,新基因片段替换有缺陷的片段,达到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁组装一Neo基因,则在同源重组后,因有Neo基因,可在含有新霉素(neomyci
基因定位方法介绍同线法
如果一个细胞得到或丢失一条染色体则将同时得到或失去这条染色体上的全部基因。如果其中某些基因是已知的,而另一连锁关系未知的基因恰恰和上述基因同时得到或失去,便可以判定后一基因和前一基因属于同一连锁群(表2)。这一原理曾广泛应用于人的基因定位。仙台病毒或聚乙二醇能促使人的体细胞和啮齿类动物的体细胞相融合
用体细胞交换法进行基因定位
体细胞交换法基因定位三点测验和着丝粒距离法中所测定的都是发生在减数分裂中的染色体交换。1936年美国遗传学家C.斯特恩在果蝇中发现体细胞在有丝分裂过程中也可以发生染色体交换(见连锁和交换)。50年代中G.蓬泰科尔沃等在研究构窠曲霉时发展起来一种利用体细胞交换的系统的基因定位方法。在进行有丝分裂的杂合
基因定位方法介绍连锁群法
利用近着丝粒距离基因的定位法 如果某一染色体上有一个离着丝粒距离较近的已知基因,另外有一个基因同样离着丝粒很近,可是不知道它是否属于同一染色体。把这样两个突变型品系进行杂交,如果这两个基因属于同一染色体,它们之间的重组频率不应超过两者的着丝粒距离之和;如果它们不属于同一染色体,那么它们的重组频率应
基因转变的梯度定位法介绍
一个基因内部的各个点突变的基因转变常呈梯度现象,即在这基因的一端发生基因转变的频率最高,在另一端则最低,在两端之间存在着一个转变频率的梯度。对于任何一个未知位置的点突变,可以通过基因转变频率的测定进行精细结构定位。这一方法的应用限于一次减数分裂产物包被在一个囊里面的子囊菌,而且限于影响子囊孢子颜色和
基因定位方法介绍假连锁法
相互易位杂合体只有在减数分裂过程中通过交互离开所形成的平衡配子才能够存活,并使非同源染色体上的基因显示假连锁现象(见染色体畸变)。所以把带有属于已知染色体的标记基因的相互易位品系作为测交品系和一个突变型品系杂交,如果发现这一突变基因经常和标记基因的野生型等位基因相连锁,就可以判定突变基因一定在相互易
用缺失定位法进行基因定位
缺失定位法一个细胞中的两个同源染色体中的一个上有一个突变基因,另一染色体上有一小段已知范围的缺失,如果这一突变基因的位置在缺失范围内,便不可能通过重组而得到野生型重组体;如果突变基因不在缺失范围内,那么就可以得到野生型重组体。利用一系列已知缺失位置和范围的缺失突变型,便能测定突变型基因的位置。
使用转录定位法进行基因定位
许多 RNA病毒的整个基因组往往作为一个单位转录。随着转录的进行,由基因组上各个基因所编码的蛋白质也依序在寄主细胞中出现。当寄主细胞被紫外线照射使本身的蛋白质合成受到抑制时,病毒蛋白的出现更为明显。紫外线照射也起着抑制病毒基因组的转录的作用。紫外线在 RNA分子的某一部位造成损伤后,损伤的部位和它后
微载体细胞培养法介绍
(1)微载体选择:先用利用三种小量微载体做培养实验,观察细胞在一定时间内细胞的吸着率和计算细胞数,以得到最大量细胞为佳。(2)水化:称一定量的微载体放入容器中,按每克微载体加50~100ml的比例,加入无Ca2+和Mg2+的磷酸缓冲液(PBS),室温下放置应不少于3小时,并不时轻微搅动,然后再用新鲜
基因定位方法介绍直接观察法
易位(见染色体畸变)使染色体上的基因改变连锁关系,所以易位可以用来进行基因定位。如果易位所涉及的染色体是可以被识别的,那就更有利于定位工作。如果在遗传学分析中发现某两个连锁群的连锁关系都发生了改变,同时在显微镜下又可以辨认出有两个染色体发生了相互易位,那么就可以知道两个连锁群和两个染色体的对应关系。
乳汁体细胞计数法
推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。 体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接 注:本方法源自奶牛乳房炎防治技术指南(试行)(农医发[20l0]29号) 推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。 体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法
乳汁体细胞计数法
推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。 体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数(SCC),间接计数法就是后面提到的CMT。法。 l主要试剂和材料 美蓝染色液:美蓝乙醇饱和溶液30mL.(美蓝2g,95%乙醇100mL),10%氢氧化钠
分子杂交法进行基因定位的方法介绍
分子杂交和体细胞遗传学相结合的方法也可以用来测定人的基因的绝对位置。用体细胞遗传学方法,可以得到只含有某一条人类染色体的人-仓鼠杂种细胞的克隆。然后可以进一步取得这一人类染色体发生各种缺失的克隆。把从这一系列缺失克隆中提取出来的 DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上。再把人的基因文库中的各个基因的 DNA片
基因定位方法介绍非整倍体测交法
非整倍体测交法非整倍体测交法可以用来测定基因属于哪一个常染色体。用常染色体隐性突变型纯合体(a/a)和野生型二倍体(+/+)杂交,再用子一代杂合体(a/+)和隐性亲本回交,在它们的子代中表型是野生型的和表型是突变型的各占50%(见孟德尔定律)。杂交 a/a × +/+↓回交 a/+ × a/a↓
基因定位方法介绍系谱分析法
系谱分析法基因定位在早期的人类遗传学研究中,基因所属染色体的测定一般都通过系谱分析进行。由于女子有两个X染色体,男子有一个X染色体和一个Y染色体,Y染色体上不存在和X染色体相应的等位基因(也就是说对于 X连锁基因来讲,男子是半合体)。因此男性患者的X连锁致病基因必然来自母亲,以后又必定传给女儿。这种
二倍体细胞培养法介绍
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为: (1)吸除旧培养液注入另瓶中。 (2)用温BSS冲洗1次。 (3)用0.25%温胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。 (4)待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止
亚细胞定位的免疫荧光法介绍
1、直接法 将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。 2、间接法 如检查未知抗原,先用已知未标记的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标记的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应
着丝粒距离法进行基因定位的方法介绍
一个基因与它所属染色体的着丝粒之间的距离称为着丝粒距离。在不同的生物中,可用不同的方法测定着丝粒距离。在粗糙脉孢菌中,着丝粒和基因之间的距离可以根据子囊中子囊孢子的排列顺序来测定,这是1932年美国微生物遗传学家CC.林德格伦所首创的方法。在同一染色体上两个基因的着丝粒距离都被测定后,这两个基因之间
缺失定位法对基因结构进行分析的方法介绍
原理和基因的缺失定位相同,不过需要具备种类更多而差别更为细微的缺失菌株。在大肠杆菌的 T4噬菌体中曾经获得一系列快速溶菌突变型rⅡ基因部分缺失突变型,利用这些突变型可以迅速测定任何一个 rⅡ点突变在rⅡ基因中的位置。图5中的每一编号标明的横线表示一个缺失突变型的缺失范围。定位分两步进行,首先测定大的