离子交换层析的技术应用
离子交换层析技术已广泛用于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质,也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。......阅读全文
层析技术的应用(二)
(一)凝胶层析法 凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。 ⒈凝胶的选择 根据实验目的不同选择不
层析技术的应用(一)
(一)层析技术的原理层析法是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由
层析技术的应用特点
层析法的最大特点是分离效率高,它能分离各种性质极相类似的物质。而且它既可以用于少量物质的分析鉴定,又可用于大量物质的分离纯化制备。因此,作为一种重要的分析分离手段与方法,它广泛地应用于科学研究与工业生产上。它在石油、化工、医药卫生、生物科学、环境科学、农业科学等领域都发挥着十分重要的作用。
层析技术的应用(五)
(四)亲和层析法 亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力,从而达到分离目的的一类特殊层析技术。具有专一亲和力的生物分子对主要有:抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素(或药物)与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素
层析技术的应用(六)
(五)聚焦层析法 聚焦层析是一种操作简单、廉价的层析技术。它的原理是根据各种蛋白质的等电点不同进行分离的过程,因此本方法具有高分辨、高度浓缩和高度专一等特点。聚焦层析所用的凝胶首先用高pH溶液平衡,然后用多元缓冲液进行洗脱,多元缓冲液pH呈梯度下降。聚焦层析所用凝胶主要有两种:MONOP和多元缓
离子交换层析的基本概述
离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂;而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后
离子交换层析的工作原理
离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有负电荷的称之阳离子交换树脂;而带有正电荷的称之阴离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过
概述离子交换层析的洗脱
离子交换层析的洗脱会受到线性或分步盐梯度或置换展开的影响。一般最好先采用线性的盐梯度洗脱,维持梯度约10个柱体积。在最简单的情况下,梯度操作需两种缓冲液,平衡缓冲液(buffer A)和用于加载相反电荷离子所用缓冲液(buffer B)。大多数情况下,并不需要后半段的梯度,因为多数蛋白质都可以在
离子交换层析的发展简介
1848年,Thompson等人在研究土壤碱性物质交换过程中发现离子交换现象。上世纪40年代,出现了具有稳定交换特性的聚苯乙烯离子交换树脂。50年代,离子交换层析进入生物化学领域,应用于氨基酸的分析。离子交换层析是生物化学领域中常用的一种层析方法,广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核
离子交换层析小知识
离子交换层析利用含有能与周围介质进行离子交换的不稳定离子的不溶 性基质来分离分离物质。 1、离子交换基质Adams 和Holnes 有1935 年通过酚、甲醛和磺酸缩 聚成不溶性树脂,制成了第一个人工合成的离子交换材料。从此以后,人工 合成的离子交换树脂日见增多(多数是从芳香族化合物合成的),
离子交换层析实验(一)
一、实验原理离子交换层析用于蛋白质分离的原理的最简单解释是,基于带相反电荷分子间的相互吸引力。蛋白质表面所带的电荷取决于其 Pl 和环境 PH。构成离子交换剂的基础介质通常为多孔珠形式,可以为蛋白质的吸附提供足够大的表面积。固定于基础介质上的带电配基可以带正电荷也可以带负电荷。为提高介质的结
离子交换凝胶柱层析
原理 在植物生理生化的研究中,往往要从一个组分复杂的混合物中,将性质很相近的生物大分子分离,这是研究工作中一个很关键的问题,需要一种具有高度分辨力的技术,才能满足这一要求。离子交换层析就是这样的技术,能够分离只有很小差异的物质(例如仅有一个氨基酸不同的两种蛋白质),是分离生物大分子的一
阳离子交换层析介绍
中文名称阳离子交换层析英文名称cation exchange chromatography定 义利用不同分子在所设计的条件(如pH、离子强度等)下,携带电荷情况不同,与阳离子交换剂结合的强度不同,可以用不同的条件洗脱出不同的组分的一种层析法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二
离子交换层析法简介
离子交换层析法(Ion Exchange Chromatography简称为IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。常用的离子交换剂有:离子交换纤维素、离子交换葡聚糖和离子交换树脂 。
离子交换层析简要概述
离子交换层析(IEX)基于特定pH下的净电荷差异分离生物分子。蛋白电荷取决于可电离氨基酸侧链基团的数量和类型。每个蛋白具有等电点(pI),即负电荷和正电荷的总数为零的pH。在低于蛋白pI的缓冲溶液中,蛋白带正电并将结合阳离子交换树脂的带负电荷的官能团。在高于蛋白pI的缓冲液中,蛋白是带负电荷的,
阴离子交换层析介绍
中文名称阴离子交换层析英文名称anion exchange chromatography定 义一种含阴离子交换剂的层析系统,根据样品混合物中各成分所含负电荷数量的不同,从而对阴离子交换剂结合的强度不同而得以分离。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
离子交换层析法原理
离子交换层析法(ionexchangechromatography,简称IEC)是从复杂的混合物中,分离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性、极性,也就是所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来
离子交换层析实验(四)
六、实例: 复杂蛋白质混合物的分离采用离子交换层析分离复合蛋白质混合物的一个典型例子就是从乳清中分离蛋白质。它可以进行一定程度的工业化放大,但也可作为一个廉价的检测体系用于离子交换剂的评价。实际上, 我们也已经通过这种蛋白质混合物来比较不同供应商所提供的离子交换剂的吸附能力(Hahnetal.,
离子交换层析实验(三)
五、离子交换层析柱的操作以下是离子交换层析柱操作的一般性步骤。此外还需要一些专用步骤以确保离子交换剂在使用时保持稳定。这些步骤如下:’(1) 加载盐溶液;(2) 平衡层析柱;(3) 蛋白质上样;(4) 洗去未结合物质;(5) 洗脱;(6) 再生;(7) 消毒处理。一般操作条件如表 22.2 所 TK
离子交换层析实验(二)
三、结合条件根据离子交换平衡的一般性原理,很显然,应在很低的盐浓度条件下对蛋白质进行上样 (图 22.1)。盐浓度也必须适当地调节,这具体取决于离子交换剂配体的密度。通常推荐的盐浓度为 1 〇?100_〇 l/L 的缓冲液,其电导率相应为 1?4mS/cm。来源于细菌培养物的一般性原料或细胞
离子交换柱层析分离核苷酸实验_离子交换层析法
本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。旨在了解并掌握RNA 碱水解的原理和方法,掌握离子交换柱层析的分离原理和方法,熟练掌握紫外吸收分析方法。实验方法原理本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离
离子交换柱层析法(层析实验简介)概略
一、 原理:有些高分子物质含有一些可以分离的基因,例如-SO3H,-COOH等,因此可以和溶液中的离子产生交换反应。如:R-SO3H+M+ ———— R-S3M+H+或R-NH3OH+CL- ————— R-NH3CL+OH-这类高分子物质通称离子交换剂,其中使用最普遍的是离子交换树脂。由
离子交换层析技术和常用支持物介绍
支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧甲基(—CH2COOH)和磷酸基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的,如DEAE—(二乙基胺乙基)和QAE—(四级胺乙基)等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中
关于离子交换层析的发展介绍
1848年,Thompson等人在研究土壤碱性物质交换过程中发现离子交换现象。上世纪40年代,出现了具有稳定交换特性的聚苯乙烯离子交换树脂。50年代,离子交换层析进入生物化学领域,应用于氨基酸的分析。离子交换层析是生物化学领域中常用的一种层析方法,广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核
离子交换层析的基本信息
离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有负电荷的称之阳离子交换树脂;而带有正电荷的称之阴离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过
关于离子交换层析的内容介绍
离子交换层析(ion-exchange chromatography,IEC) 是在生物大分子提纯中得到最广泛应用的方法之一。 离子交换层析分离蛋白质是根据在一定pH 条件下,蛋白质所带电荷不同而进行的分离方法。常用于蛋白质分离的离子交换剂有弱酸型的羧甲基纤维素(CM纤维素) 和弱碱型的二乙基
离子交换层析的原理是什么
离子交换层析法是从复杂的混合物中,分离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性,极性,所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来。层析开始前,功能基团与反离子稳定结合,就与反离子发生可逆交换,与层析剂
离子交换层析的原理是什么
离子交换层析法是从复杂的混合物中,分离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性,极性,所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来。层析开始前,功能基团与反离子稳定结合,就与反离子发生可逆交换,与层析剂
离子交换层析的原理是什么
离子交换层析法是从复杂的混合物中,分离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性,极性,所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来。层析开始前,功能基团与反离子稳定结合,就与反离子发生可逆交换,与层析剂
离子交换层析的原理和过程
离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有负电荷的称之阳离子交换树脂;而带有正电荷的称之阴离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过