免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤

⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4荧光标记的抗人球蛋白抗体:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释。搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。⑶实验步骤1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10min后弃去,使标本片保持一定湿度。2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,......阅读全文

免疫组织化学染色方法

实验原理免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗

免疫组织化学染色方法

实验原理免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗

如何选择适合实验的一抗和二抗?

小编今天给大家分享一些抗体选择的经验~检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:分析或应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗体说明书没有提及的

竞争法测抗体的实验原理

竞争法测抗体的实验原理当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接

简述抗人球蛋白试验(直接法)的临床意义

  抗人球蛋白试验的直接法在临床上主要是检查被检者红细胞表面是否结合有不完全抗体,如新生儿溶血病病儿的红细胞被母体不完全抗体致敏;溶血性(血管外)输血反应时,献血者红细胞被受血者体内不完全抗体致敏;以及自身免疫性溶血性贫血病人红细胞被自身抗体致敏等。在临床上有较大意义,阳性结果可见于自体免疫溶血性贫

免疫荧光技术的原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

免疫组化技术全程原理剖析以及案例解答

1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞

荧光抗体染色三大方法

1.直接染色法将标记的特异荧光抗体直接加在抗原标本上,经一定温度和时间的染色,洗去未参加反应的多余荧光抗体,在荧光显微镜下便可见到被检抗原与荧光抗体形成的特异性结合物而发出的荧光。直接染色法的优点是:特异性高,操作简便,比较快速。缺点是:一种标记抗体只能检查一种抗原,敏感性较差。直接法应设阴、阳性标

酶联免疫吸附测定法的原理

酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用的免疫学检测技术,用于定量或定性检测样品中的抗原或抗体。基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体(如 96 孔酶标板)表面,然后加入待检测的样品,使其中的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体结合。

免疫组化技术的原理、分类和优点介绍

一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半

免疫组化技术的原理、分类和优点

一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半

免疫组化技术的原理、分类和优点

一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半

简述抗人球蛋白试验(间接法)-临床意义

  抗人球蛋白试验的间接法是用已知抗原的红细胞检查被检者血清中的不完全抗体,也可用已知抗血清测定被检红细胞是否含有相应抗原。在临床上此法可用于血型鉴定(如DU、Daffy、Kidd等),抗体的检出和鉴定。尚有助于D的检出,凡酶介质或其他方法为“d” 红细胞,必须用本法证实。本法多用于检测母体Rh(D

免疫荧光标记技术是什么

.原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记

免疫荧光标记技术是什么

.原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记

免疫荧光标记技术

.原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记

免疫荧光是什么

.原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记

DNA荧光组织化学染色的方法

一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色,再用FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫荧光组织

蛋白质分析技术(WesternBlot-ELISA免疫荧光与免疫组化技术)2

2 类型(1)间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体,检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。 常用于临床血清中自身抗体的检测,以及杂交瘤上清特异性抗体的筛选。如血清中PDCD5自身抗体的检测。(2) 双抗体夹心法测抗原是检测抗原最常用的方法。只要获得针对受检抗原的特

细菌的观察与培养实验材料设备和原理仪器详细步骤!

把实验用于日常生活中, 以不同来源的水质样品作材料,检测水中微生物的数目与种类,并由培养结果中观察各种细菌的菌落型态。由单一个细菌分裂,繁殖而形成的细菌族群称为菌落(colony),不同种类的细菌所形成的菌落形态也各不相同,其形态指标包括菌落的大小、颜色、气味、表面光滑或粗糙、边缘平整或呈锯齿状,是

蛋白质的性质实验原理和操作步骤12

2. 不可逆的沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质的分子内部结构,空间构象遭到破坏,失去其天然蛋白质的性质,这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中,这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超生波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。重

细胞膜的通透性观察实验原理和操作步骤

一、实验目的1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。2.了解溶血现象及其发生机制。 二、实验原理 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜,可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的,水是生物界最普遍的溶剂,水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞

DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤

一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法,具有操作方便、经济快速等优点。本实验学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术,掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。 二、实验原理 琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在

免疫酶标方法(直接法、间接法、PAP法和双PAP法)

一、直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结

试述PCR扩增的原理和步骤

PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR

免疫学检验常用技术有哪些

以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清 中的相应抗原(或抗体)的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同,可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。间标荧光抗体中

免疫学检验常用技术有哪些

以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清 中的相应抗原(或抗体)的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同,可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。间标荧光抗体中

免疫学检验常用技术有哪些

以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清 中的相应抗原(或抗体)的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同,可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。间标荧光抗体中

免疫学检验常用技术有哪些

以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清 中的相应抗原(或抗体)的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同,可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。间标荧光抗体中

常用的免疫学技术有哪些

以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术 免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、 细胞或血清 中的相应抗原(或抗体)的方法.由于荧光抗体具有安全、 灵敏的特点,因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域.根据荧光素标记的方式不同,可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体.间标荧光