免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤
⑴基本原理染色程序分为两步，第一步，用未知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定未知抗体。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗人球蛋白抗体：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释。搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫）荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。⑶实验步骤1）滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原标本片，10min后弃去，使标本片保持一定湿度。2）滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本，覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，......阅读全文
直接免疫荧光抗体法的定义
中文名称直接免疫荧光抗体法英文名称direct immunofluorescence antibody method定 义直接用荧光素标记的抗体检测抗原的一种免疫标记技术。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
间接法测抗体的实验注意事项
1）荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长 ，会使荧光减弱。2）每次试验时 ，需设置以下三种对照：① 阳性对照：阳性血清+荧光标记物② 阴性对照：阴性血清+荧光标记物③ 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物3. 已知抗原标本片需在操作的各个步骤中，始终保持湿润，避免干燥。4. 所滴
间接法检测抗人球蛋白实验
实验方法原理间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。先用Rh（D）阳性O型（或与被检查ABO同型）的正常人红细胞吸附血清中存在的游离不完全抗体（即称致敏）致敏红细胞经盐水洗涤后加入抗人球蛋白血清，如出现凝集即为抗人球蛋白间接试验阳性．试剂、试剂盒生理盐水实验步骤方法一：1. 取受检血青0.5
间接法检测抗人球蛋白实验
实验方法原理间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。先用Rh（D）阳性O型（或与被检查ABO同型）的正常人红细胞吸附血清中存在的游离不完全抗体（即称致敏）致敏红细胞经盐水洗涤后加入抗人球蛋白血清，如出现凝集即为抗人球蛋白间接试验阳性．试剂、试剂盒生理盐水实验步骤方法一：1. 取受检血青0.5
直接法测抗原的所需仪器和试剂
磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制搪瓷桶三只（内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml）有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的
细胞免疫荧光实验步骤
细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速
免疫荧光试验的实验目的和原理
中文名称免疫荧光试验英文名称immunofluorescence test定 义一种免疫标记技术。用于检测相应抗原或抗体。即用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原进行鉴定或定位。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（
直接免疫荧光抗体法的技术特点
中文名称直接免疫荧光抗体法英文名称direct immunofluorescence antibody method定 义直接用荧光素标记的抗体检测抗原的一种免疫标记技术。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
MTT实验原理和实验步骤
MTT原理：MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formaza
免疫荧光染色原理及步骤
免疫荧光又称免疫荧光抗体。免疫荧光实验原理是将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。下面详细介绍免疫荧光染色步骤：1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
elisa的原理和实验步骤
1. ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗
elisa的原理和实验步骤
ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与
elisa的原理和实验步骤
ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与
直接法测抗原的技术优点缺点和应用
将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
间接免疫荧光和直接免疫荧光染色方法的异同
免疫荧光细胞化学方法的原理是根据抗原抗体反应的规律，把已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。方法具体种类有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下，根据其形成复合物所发的荧光，来确定判断检测物的来源、性质和部位。 1、直接法：这是最早
冰冻切片免疫荧光实验步骤
1.组织用4%多聚甲醛固定6-8小时，转至20%蔗糖溶液至组织沉底。2.冰冻切片8-10μm，推荐瑞沃德冷冻切片机，温度稳定，切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片，-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。3.1xPBS洗3次，每次3-5分钟。4.用2%BSA室温或3
冰冻切片免疫荧光实验步骤
1.组织用4%多聚甲醛固定6-8小时，转至20%蔗糖溶液至组织沉底。2.冰冻切片8-10μm，推荐瑞沃德冷冻切片机，温度稳定，切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片，-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。3.1xPBS洗3次，每次3-5分钟。4.用2%BSA室温或3
免疫荧光细胞化学染色方法
免疫荧光细胞化学染色方法 一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 （一）直接法 1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光 抗体或兔抗人 IgG 或 IgA 荧光抗体
酶联免疫吸附（ELISA）实验——间接法（测抗体）
实验方法原理图1：间接法测抗体示意图间接法首先用抗原包被于固相载体，这些包被的抗原必须是可溶性的，或者至少是极微小的颗粒，经洗涤，加入含有被测抗体之标本，再经孵育洗涤后，加入酶标记抗抗体，(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM)，再经孵育洗涤后，加底物显色，底物降解的量，即为欲测抗体的量，
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫荧光组织（细胞）化学技术基本原理
免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，荧光素受激发光的照射，由低能态进入高能态，而高能态的电子是不稳定的，以辐射光量子的形式释放能量后，
免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons等（1950）建立，经过近43年的发展，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与亲合化学技术如葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激
光镜下双/多重免疫标记实验——免疫荧光双重标记TRITCFITC
双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物，达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分（定性、定位、定撤），分析不同抗原成分相互间功能的增消关系，操作遵循的原则与要求同单
免疫荧光组织化学直接法
1.检查抗原法：这是最早的方法，用已知特异性抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。此法很特异和简便，但一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差。 2.检查抗体法将抗原标记上荧光素，即为荧光抗原，用此荧光抗原与细胞或
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
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原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板