间接免疫荧光和直接免疫荧光染色方法的异同

免疫荧光细胞化学方法的原理是根据抗原抗体反应的规律,把已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗原或抗体,然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。方法具体种类有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下,根据其形成复合物所发的荧光,来确定判断检测物的来源、性质和部位。 1、直接法:这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体,染色时将该抗体直接滴在载玻片上进行孵育,使之直接与载玻片上的抗原结合,在荧光显微镜下直接观察,作出判断。该方法评价:简单易行、特异性高、快速方便,常用于肾活检组织几种免疫球蛋白的检测和病原体的检测。但其不足是只能检测相应的一种物质,敏感性较差,效果有时不理想,目前较少作为更多方面的检测。 2、间接法:该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后,继用间接荧光抗体,与前面的抗原抗体复合物结合,形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下,根据复合物的发......阅读全文

ELISA直接法和间接法优缺点

直接法(direct ELISA)将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。缺点:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。间接法(indirect ELISA)此测定方

电流表内接法与外接法误差分析

  若待测电阻R的阻值较小,采用外接法测出的阻值较为准确,误差较小;若待测电阻R阻值较大,采用内接法测出的阻值较为准确。   (1)采用外接法时   电流表中示数应是流过R的电流IR和通过电压表电流IV之和,即I=IR+IV,则R=U/I=U/(IR+IV)   引起误差的原因是电流I中增加了

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

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在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

elisa间接法原理

在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前zui常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM),再

定氮仪测定蛋白质是间接法还是直接法?

测定大米等粮食样品的蛋白质含量,是判断粮食品质的一个重要方法,现代为了操作方便,并有效提高测定的效率和精度,在很多行业中都是采用定氮仪这种仪器来进行测定。而一般来说,蛋白质测定方法主要可以分为两类,分别是间接法和直接法,那么使用定氮仪测定蛋白质采用的是间接法还是直接法呢?首先来让我们看看什么是间接法

电极法测电解质中直接法与间接法的区别

1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度. 2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中

电极法测电解质中直接法与间接法的区别

1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度.2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中

免疫酶标方法(直接法、间接法、PAP法和双PAP法)

一、直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结

电极法测电解质中直接法与间接法的区别

1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度.2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中蛋白

接触器的接法选择

  接法  交流接触器接法一:  一般三相接触器一共有8个点.三路输入.三路输出.还有是控制点两个.输出和输入是对应的.很容易能看出来.如果要加自锁的话.则还需要从输出点的一个端子将线接到控制点上面。  交流接触器接法二:  首先应该知道交流接触器的原理.他是用外界电源来加在线圈上.产生电磁场.加电

免疫荧光染色(间接法)

1、切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液体。 2、再滴加间接荧光抗体(如兔抗人 -球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色30min,37℃,缓冲盐水

免疫酶标技术——直接法

实验方法原理先将酶与抗体结合形成酶标抗体,然后和相应的抗原反应,使抗原抗体复合物上带有酶分子,再与酶的底物H2O2—DAB(3’3—二胺荃联苯胺)发生显色反应,在显微镜下观察,根据颜色产物检测相应抗原。实验材料抗体试剂、试剂盒PBSH2O2血清仪器、耗材显微镜实验步骤1.  标本固定;2.  PBS

检测抗体间接法操作步骤

  间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:  ⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。  ⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗

免疫荧光技术——直接法

免疫荧光技术可应用于:(1)研究特异蛋白抗原在细胞内分布;(2)对抗原进行细胞定位;(3)对特定抗原进行定量检测。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。(北京出版社)实验方法原理直接法是以荧光素标记的抗体直接与标本内的抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。根据荧光的分布位置及强度,确定相应抗原的存

免疫酶标技术——间接法

实验方法原理将酶标记在第二抗体上,再与已形成的抗原抗体复合物中的第一抗体反应。目前广泛应用的PAP法、ABC法是在间接法的原理和技术的基础上发展起来的。实验材料抗体试剂、试剂盒PBSH2O2血清仪器、耗材显微镜实验步骤1.  标本固定;2.  PBS洗涤2×3 分钟;3.  1 %H2O2(或1 %

免疫荧光技术——间接法

实验方法原理基本原理是先用特异性抗体与细胞内相应抗原结合,再用荧光素标记的二抗与特异性抗体相结合,形成抗原-特异性抗体-标记荧光抗体的复合物。因为在复合物上带有比直接法更多的荧光标记物,所以比直接法更敏感。实验材料抗体试剂、试剂盒PBS伊文氏兰仪器、耗材显微镜实验步骤1.  标本固定后,PBS洗涤3

全自动生化分析仪测量电解质直接法优于间接法

一、目前大部分全自动生化分析仪测量电解质所用间接法与直接法实有极大差别,且误差较大。全自动生化分析仪目前在测量血液常规项目时,是以比色法为主,主要原理是运用光谱技术中不同原子吸光不同而测量的,那么对于ISE模块的功能实现,主要有两种方法,一是比色法,二是间接法。比色法因其测量精度,准确度等与所要求的

全自动生化分析仪测量电解质直接法优于间接法

一、目前大部分全自动生化分析仪测量电解质所用间接法与直接法实有极大差别,且误差较大。全自动生化分析仪目前在测量血液常规项目时,是以比色法为主,主要原理是运用光谱技术中不同原子吸光不同而测量的,那么对于ISE模块的功能实现,主要有两种方法,一是比色法,二是间接法。比色法因其测量精度,准确度等与所要求的

全自动生化分析仪测量电解质直接法优于间接法

一、目前大部分全自动生化分析仪测量电解质所用间接法与直接法实有极大差别,且误差较大。 全自动生化分析仪目前在测量血液常规项目时,是以比色法为主,主要原理是运用光谱技术中不同原子吸光不同而测量的,那么对于ISE模块的功能实现,主要有两种方法,一是比色法,二是间接法。比色法因其测量精度,准确度等与所要

全自动生化分析仪测量电解质直接法优于间接法

一、目前大部分全自动生化分析仪测量电解质所用间接法与直接法实有极大差别,且误差较大。全自动生化分析仪目前在测量血液常规项目时,是以比色法为主,主要原理是运用光谱技术中不同原子吸光不同而测量的,那么对于ISE模块的功能实现,主要有两种方法,一是比色法,二是间接法。比色法因其测量精度,准确度等与所要求的

间接法测抗体的实验步骤

1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10min后弃去,使标本片保持一定湿度。2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,37℃保温30min。3)取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol/L,pH7

直接法测抗原的实验步骤

⑴基本原理将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,p

间接法测抗体的操作步骤

间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体

间接法测抗体的实验步骤

⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结

关于间接法测抗体的介绍

  间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:  ⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。  ⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗

直接法测抗原的实验步骤

① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.0

间接法的原理和操作步骤

间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:⑴将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。⑵加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体