免疫亲和层析的原理
简单来说，亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常，在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制，例如细胞裂解液，生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中，其中含有某类特定的生物大分子（从DNA到蛋白质，取决于实验需求）。等待一段时间使两相充分混合，随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过破坏非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力，因此能够保持与固定相的结合，而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液，能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用，从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子，称为洗脱液。固定相一般是凝胶基质，常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠，首先将含有烃链的抑制剂连接到琼脂糖珠（固体支持物）上。......阅读全文
亲和层析法的用途
亲和色谱的用途很广泛，可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白，还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性，这些特性使蛋白选择性地与配体结合，从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。
亲和层析的操作实验
试剂、试剂盒非特异性竞争 DNA液氮缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液仪器、耗材EconoCoIumn 柱实验步骤材料与设备EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特异性竞争 DNA液氮试剂缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液(
免疫球蛋白G(IgG)的纯化——蛋白A交联琼脂糖凝胶亲和层析
实验步骤 蛋 白 A 通 常 用 于 人（除 IgG3 夕 h 小 鼠 IgG1 结合力也较弱）、兔 、豚鼠和猪抗体的纯化。材 料腹 水 或 M Ab上 清（单 元 1. 4)PBS, pH8. O和pH7. 3lmol/L NaOH蛋 白 A 交联琼脂糖凝胶CL-4B (Pharmacia Bio
荧光免疫分析的原理
作为免疫分析法的一种，FIA同样存在两种模式，即竞争型和夹心型。其中竞争型（以标记抗原的竞争型为例）的测定原理是基于未标记的抗原（Ag）和标记抗原（Ag-L）竞争结合有限的抗体（Ab）而实现的免疫分析法。检测时，Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后，Ag
免疫荧光的原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原，先
荧光免疫分析的原理
作为免疫分析法的一种，FIA同样存在两种模式，即竞争型和夹心型。其中竞争型（以标记抗原的竞争型为例）的测定原理是基于未标记的抗原（Ag）和标记抗原（Ag-L）竞争结合有限的抗体（Ab）而实现的免疫分析法。检测时，Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后，Ag
免疫荧光的原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原，先
疫苗的免疫原理
疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触
免疫荧光的原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原，先
细胞免疫的防御原理
病原菌侵入机体后主要停留在宿主细胞内者，称为胞内菌感染.例如结核杆菌、麻风杆菌、布氏杆菌、沙门氏菌、李斯特菌、军团菌等，这些细菌可抵抗吞噬细胞的杀菌作用，宿主对胞内菌主要靠细胞免疫发挥防御功能。参与细胞免疫的T细胞主要是TD(CD4+）细胞和TC(CD8+）细胞。此外，分布在粘膜、皮下组织和小肠绒毛
免疫荧光的原理
免疫荧光（Immunofluorescence,IF）原理免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在
细胞免疫的原理机制
同体液免疫一样，细胞免疫的产生也分为感应、反应和效应三个阶段。其作用机制包括两个方面：⑴致敏T细胞的直接杀伤作用。当致敏T细胞与带有相应抗原的靶细胞再次接触时，两者发生特异性结合，产生刺激作用，使靶细胞膜通透性发生改变，引起靶细胞内渗透压改变，靶细胞肿胀、溶解以致死亡。致敏T细胞在杀伤靶细胞过程
亲和层析技术
亲和层析 （一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。
亲和层析法概述
亲和层析法是利用生物大分子与某些对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的色谱方法，也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱。这种特异可逆结合的物质很多，见表6–3。如抗原与抗体、底物与酶、激素与受体等，他们间的这种特异亲和能力又叫亲和力。亲和色谱中，一对互相识别的分子互称对方
亲和层析之蛋白A
球菌的细胞壁，与IgG的Fc片段具有非常强的特异性，分子量约为42×103，如图所示。一般在蛋白 A亲和层析中，配基在中性pH条件下结合抗体，在酸性pH条件下与蛋白解离。蛋白A与抗体IgG的Fc片段结合模式基于蛋白 A 亲和层析的抗体捕获工艺较为稳定，但也存在一些不足，主要包括：（1）介质成本高。（
亲和层析凝胶指南
GE HealthcareBenzamidine Sepharose™ 6B is p-aminobenzamidine covalentlyattached to Sepharose 6B by the epoxy coupling method.p-Aminobenzamidine (PAB),
什么是亲和层析？
亲和色谱也称为亲和层析，是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子，也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。
亲和层析－－抗体纯化
蛋白 A（Protein A）琼脂糖微球蛋白 A（Protein A）是金黄色葡萄球菌的细胞壁成分。它由一条多肽链组成，其中包含五个抗体结合结构域。这些高亲和力结合域和免疫球蛋白 G（IgG）的 Fc 区域特异性结合。其他类型如 IgA 和 IgM 可能可以通过和 抗体 Fab 片段相互作用与蛋白
DNA亲和层析的技术特点
DNA亲和层析是一种检测DNA与蛋白质相互作用的技术手段，属于亲和层析的一种，利用一些蛋白质能结合特定序列的DNA片段的原理，分离与特定DNA序列有相互作用的蛋白质。
简述亲和层析的特殊应用
亲和色谱的用途很广泛，可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白，还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性，这些特性使蛋白选择性地与配体结合，从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。
亲和层析的载体要求
理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非特异性吸附少；③具有相当量的化学基团可供活化；④理化性质稳定；⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过；⑦能抵抗 微生物和醇的作用。 可以做为固相 载体的有 皂土、
DNA亲和层析的技术方法
DNA亲和层析是利用亲和层析的原理与技术分离能与特定DNA序列相互作用的技术方法。总的过程包括两步，即：一、将某一类细胞中所有的蛋白质过含有该类细胞各种片段的DNA层析柱，用低浓度盐溶液洗去不与DNA作用的绝大多数蛋白，用中浓度盐溶液洗脱大部分与能DNA相互作用的蛋白。二、将第一步得到的能与DNA相
影响亲和层析的因素介绍
1、上样体积 若目标产物与配基的结合作用较强，上样体积对亲和色谱效果影响较小。若二者间结合力较弱，样品浓度要高一些，上样量不要超过色谱柱载量的5%~10%。（这个载量是指色谱柱所吸附的配体的量） 2、柱长 亲和柱的长度需要根据亲和介质的性质确定。如果亲和介质的载量高，与目标产物（目标物）的
亲和层析的载体要求
理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非特异性吸附少；③具有相当量的化学基团可供活化；④理化性质稳定；⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过；⑦能抵抗 微生物和醇的作用。 可以做为固相 载体的有 皂土、
亲和层析(affinity－chromatography)的应用
亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。1.抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上,就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低,用离
免疫球蛋白G(IgG)的纯化—蛋白G交联琼脂糖凝胶亲和层析
实验步骤 蛋 白 G 和蛋白A 在 不 同PH 下结合抗体的能力不同：蛋 白 G 在 低 pH 下与抗体结合力强，在 高 pH下与抗体结合力弱。但 一 些 抗 体（小 鼠 IgG1 和兔、人抗体）在 高 pH(8〜 1 0 ) 下仍与蛋白G 结合 。 一 般 推 荐 最 好 在 pH5 时结合抗体，
免疫酶标的原理
它以酶作为标记物，与抗体或抗原联结，与相应的抗原或抗体作用后，通过底物的显色反应作抗原抗体的定性和定量，亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶免疫组织化学技术。 应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验（ELISA），它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从
免疫荧光原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
免疫荧光原理
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 直接法 将
荧光免疫分析原理
荧光免疫检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点，因此它被用于测量含量很低的生物活性化合物，例如蛋白质（酶、接受体、抗体）、激素（甾族化合物、甲状腺激素、酞激素）、药物及微生物等 作为免疫分析法的一种，FIA同样存在两种模式，即竞争型和夹心型。其中竞争型（以标记抗原的竞争型为例）的测定原