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亲和层析法概述

亲和层析法是利用生物大分子与某些对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的色谱方法,也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱。这种特异可逆结合的物质很多,见表6–3。如抗原与抗体、底物与酶、激素与受体等,他们间的这种特异亲和能力又叫亲和力。亲和色谱中,一对互相识别的分子互称对方为配体,如激素可认为是受体的配体,受体也可以认为是激素的配体。其他组分不产生这种专一性的结合,而直接流出色谱柱。然后,便可以利用洗脱剂将吸附在柱中的生物大分子洗脱下来。亲和色谱法具有高度的专一性,而且色谱过程简单、快速,是一种理想的有效分离纯化生物大分子的手段。(一)固相载体的选择对于一个成功的亲和色谱分离来说,一个重要的因素就是选择合适的固体载体。一个理想的载体,首先它必须尽可能少地同被分离的物质进行相互作用,以避免非特异的吸附作用。因此,优先选用的是中性聚合物,例如,琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶。其次,载体必须具有良好的通透性,即使在亲......阅读全文

层析技术及离心技术

(一)层析技术层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。可分为吸附层析法、分配层析法、离子交换层析法、凝胶层析法、亲和层析法、高效液相层析法等。在层析法中,根据层析峰的位置及峰高或峰面积,可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用,可检测出层析后各组分的浓度或质量,同时绘出层析图。

常用的层析分析(chromatographic analysis)方法

    在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。   一、 吸附层析   1、 吸附柱层析   吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构

常用的层析分析方法

在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。 一、吸附层析 1、吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。 2、薄层层析 薄层

常用的层析分析方法

  在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。   一、 吸附层析   1、 吸附柱层析   吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。   2、

常用的层析分析方法

 在分离分析特别是蛋白质分离分析中,层析是相当重要、且相当常见的一种技术,其原理较为复杂,对人员的要求相对较高,这里只能做一个相对简单的介绍。  一、 吸附层析  1、 吸附柱层析  吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。   2、 薄层层析  

亲和层析原理及分析方法

  亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似,每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中,特异的废物(S')才能和一定的酶(E)结合,产生复合物(E-S')一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力,并产生

GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定

食品中黄曲霉毒素的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法 1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中

硼酸亲和层析法检测糖化血红蛋白A1c 的效果评估

摘要:目的评估硼酸亲和层析法检测GHbA1c 的临床效果。方法利用高效液相色谱法(HPLC(B 法))硼酸亲和层析法(A 法)同步盲测118 例全血GHbA1c 水平,计算二者的相关系数、灵敏度、特异性和总符合率,同时对溶血、黄疸等可能的干扰因素进行评估。结果两种方法的灵敏度、特异性和总符合率分别为

层析技术的应用(一)

(一)层析技术的原理层析法是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由

蛋白质分离纯化技术详解

沉淀法沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质,进而导致有效成分的溶解度发生变化。1、盐析法盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐

HbA1c: 标准化以及临床实验室检测

学习目的 1. 了解美国糖尿病的差异情况 2. 理解平均血糖与血红蛋白A1c(HbA1c)值之间的相关性 3. 了解美国与国际HbA1c标准化工作情况 4. 描述一些常用的临床实验室HbA1c检测方法 5. 列举HbA1c作为长期平均血糖浓度的评估手段时所存在的一些潜在干扰与问题 一名住在美国东南

GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定(一)

1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。样品中黄曲霉毒素的检出限:免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和

黄曲霉毒素一般检测方法概述

  【薄层色谱法】    1.薄层层析(TLC)法    TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法,在薄层板展开后,在365 nm紫外灯下,黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2分别显示紫色、蓝紫色、绿色和绿色荧光。TLC法的特异性较差,灵敏度相对较差,且测定黄曲霉毒

荧光分光光度法在黄曲霉毒素含量测定上的应用

摘要: 荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法。目前国家标准对于测定食品中黄曲霉毒素含量的方法以免疫亲和层析法为主,其中荧光分光光度法是一个比较常用的方法。本文依据国家标准G B/T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》

紫外分析仪检测乳和乳粉中黄曲霉毒素M1

ICS 67.100.10X 04GB/T 18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和 荧 光 光 度 法Determination of aflatoxin M1 content in milk and milk powder-Cleanup by immu

亲和层析法(affinity chromatography)纯化胰蛋白酶-1

一、实验目的 1.熟悉亲和层析纯化蛋白质的的原理。 2.初步掌握亲和层析法纯化胰蛋白酶的方法步骤。 二、实验原理 亲和层析已经广泛应用于生物分子的分离和纯化,如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等,也可用于分离细胞

黄曲霉毒素介绍及检测方法

  黄曲霉毒素主要由黄曲霉菌产生,其他曲霉菌和青霉菌也可产生少许,这些真菌主要寄生于花生、玉米、大米、小麦等谷物及油料。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质。   黄曲霉毒素检测通用方法   薄膜层析法和液相色谱法是目前国

糖化血红蛋白的检测方法简介

  糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高压液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。     成人红细胞中的血红蛋白有HbA(占95%~97%以上),HbA2(占2.

糖化血红蛋白的检测方法简介

   糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高压液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。    成人红细胞中的血红蛋白有HbA(占95%~97%以上),HbA

糖化血红蛋白的检测方法简介

    糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高压液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。    成人红细胞中的血红蛋白有HbA(占95%~97%以

糖化血红蛋白的检测方法简介

糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高压液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。    成人红细胞中的血红蛋白有HbA(占95%~97%以上),HbA2(占2.5%),HbF(占0.2%

糖化血红蛋白几种常见检测方法

目前临床实验室中应用的糖化血红蛋白检测方法主要有两大类: 一类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同, 如离子层析法、电泳等方法; 另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点, 如亲和层析、离子捕获法和免疫法等。其中高效液相离子层析法(HPLC )被公认为金标法。1. 离子层析法 离子层

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用

所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用,通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用,是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上,免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用,不同的部分在于, 层析后需要回收

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析-2

(二)乳过氧化物酶法(LPO)  本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。  1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。  2.方法

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(九)

3.4.3 亲和吸附剂选择并制备合适的亲和吸附剂是亲和层析的关键步骤之一。它包括基质和配体的选择、基质的活化、配体与基质的偶联等等。这里主要介绍一些基本的原理,关于活化、偶联等过程的具体实验操作可以参阅本书后面的实验部分或相应的参考书。基质⑴ 基质的性质基质构成固定相的骨架,亲和层析的基质应该具有以

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(十)

配体与基质偶联后,通常要测定配体的结合量以了解其与基质的偶联情况,同时也可以推断亲和层析过程中对待分离的生物大分子吸附容量。配体结合量通常是用每毫升或每克基质结合的配体的量来表示。测定配体结合量的方法很多,下面简单介绍几种:1) 差量分析:根据加入配体的总量减去配体与基质偶联后洗涤出来的量即可大致推

酶的提取、分离、纯化及其活力测定

一、实验目的酶是植物体内具有催化作用的蛋白质,植物体内的生化反应,一般都是在酶的作用下进行的,没有酶的催化反应,植物的生命也就停止了,因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来,加以分离、纯化,不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同,有些工作只需要粗的酶

酶的提取、分离、纯化及其活性测定

  原理   酶是植物体内具有催化作用的蛋白质,植物体内的生化反应,一般都是在酶的作用下进行的,没有酶的催化反应,植物的生命也就停止了,因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。 为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来,加以分离、纯化,不同的研究目的

乳品中黄曲霉毒素检测(一)

核心提示:国家质检总局24日公布了近期对200种液体乳产品质量的抽查结果。抽查发现蒙牛、长富纯牛奶两种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定。其中,蒙牛乳业(眉山)有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。对此,蒙牛在其官网承认这一检测结果并解释造成产品不合格的原因,是当地奶牛

蛋白质、多肽提取分离

1 分离方法   采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化,同时上述这些方法也是蛋白