rna浓度太低能反转录么

要看你的rna浓度有多低,一般20ng/ul。rna浓度太低可能反转不出来或者反转不是目的产物,浓度太低建议不做。......阅读全文

常见RNA碱基介绍

四个常见RNA碱基---腺嘌呤,尿嘧啶,鸟嘌呤和胞嘧啶显然不能提供足够的空间以形成一个坚固的结构,因为这些碱基大部分被修饰过以延长它们的结构。有两个奇特的例子,看37号反密码子相邻的碱基,位于甲硫氨酸tRNA(1yfg)或苯丙氨酸tRNA(4tna和6tna)的起始部位。

提取病毒RNA方法

一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题):1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,

RNA干扰的特点

1.高效性:Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的,只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大,只有当浓度降低到0.05 nmol/L时,沉默的效果才消失。Holen等也证实

RNA抽提经验

对大部分实验人员来说,RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上,现有的 RNA 抽提方法/试剂,如果用于从培养细胞中抽提 RNA,比抽提基因组 DNA 更方便,成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提,总会碰到问题呢?   组织 RNA 抽提失败的两大现象是: RNA 降

反义RNA的来源

细胞中反义RNA的来源有两种途径:第一是反向转录的产物,在多数情况下, 反义RNA是特定靶基因互补链反向转录产物, 即产生mRNA和反义RNA的DNA是同一区段的互补链。第二种来源是不同基因产物,如OMPF基因是大肠杆菌的膜蛋白基因,与透性有关,其反义基因MICFZE则为另一基因。

卫星RNA的加工

在具侵染性小分子RNAs的复制机制中,RNA的加工最令学者们兴趣,即是在多聚体形式与相关的线状和环状单体之间的切割与连接过程。1986年有学者发现烟草环斑病毒ToRSV与卫星RNA 正链二聚体在接点处自我切割,产生具有感染性的线状单休。随后,又发现包含有ASBV的正链与负链的二聚体的体外转录休能够在

RNA-标准转录反应

            实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc

RNA实验方法

Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci, Yale UniversityResuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et

转运RNA的功能

  主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫

总RNA的提取

 完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有效地将RN

提取植物rna方法

  提到RNA的提取,是不是充满了心酸和无奈呀,抽提过程中已十分小心谨慎了,但是有时候还是会出现RNA污染、降解的悲剧。别怕,今天小编给您介绍一种新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,让您从此不用再担心的RNA的抽提了。  众所周知:获得纯净、完整的RNA样品,是对一种植物的活性基因

RNA提取技术概述

RT-PCR是将RNA的反转录(Reverse Transcription,RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术,近年来得到快速发展和广泛应用。首先,经反转录酶的作用,以RNA为模板,合成互补的DNA链(cDNA),再以cDNA为模板,通过PCR扩增合成目的片段。RT-PC

动物RNA提取实验

实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA,方法简单、快速。该系统以膜为基础,根据组织类型的不同,每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤,直接在小离

核RNA的概念

中文名称核RNA英文名称nuclear RNA定  义细胞核内的RNA。如核内不均一RNA、核小RNA、核仁小RNA等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

RNA沉默的作用

植物可利用 PTGS 和 TGS 来抵抗病毒侵染, 病毒侵染植物后会产生大量病毒来源的小 RNA (virus-derived small interfering RNAs, vsiRNA), 介导对病毒 RNA 的降解或抑制病毒基因的转录; 而在与植物长期共进化过程中, 病毒编码一个或多个RNA沉

RNA干扰回复实验

RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce

什么是RNA作图?

中文名称RNA作图英文名称RNA mapping定  义对RNA分子在基因上的定位分析。将RNA与相应的DNA杂交后,用单链特异性核酸酶(常用的如S1核酸酶)切去不发生杂交的单链部分,用以分析RNA与相应DNA的关系,包括确定RNA的5′和3′端、外显子和内含子在DNA上的相应位置等。应用学科生物化

RNA酶保护试验

    RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗

RNA干扰实验技术

实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因

反义RNA稳定方法

[1]反义RNA3'端带有茎环结构或类似ρ-不依赖性终止子结构时,可以稳定RNA分子;[2]Gorski等还发现在T4噬菌体的基因32mRNA的5'端上游的茎环结构及其附近的序列亦可稳定RNA分子。所以在设计反义RNA基因时,最好将产生3'及5'端这种二级结构的序列克

转运RNA的功能

主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫起始

RNA假结的定义

RNA中的一种常见的三级结构元件。RNA的茎环结构中的环上序列与其他部位(通常是邻近部位)的序列碱基配对,形成类似“打结”形状。

微RNA的作用

人类基因组计划结束后,人们发现编码蛋白质的基因只占总基因组的约2%。而占人类基因组95%的非编码序列竟是产生大量非编码RNA的源泉,这些非编码RNA主要充当调控者的角色,在细胞分化凋亡、生物发育、疾病发生等方面均起重要作用。其实,RNA比DNA更为古老,它组成了地球上最早的生命。生命起源初期,没有由

卫星RNA的特点

1、多个卫星RNA分子可与辅助病毒基因组存在于同一衣壳中。2、对宿主植物无独立的侵染性。3、其复制和包装全部依赖于辅助病毒而后者不依赖于前者。4、不具有mRNA活性。5、与辅助病毒的RNA无同源性。6、能干扰辅助病毒的复制从而降低其增殖量。7、可改变辅助病毒所引起的植物病害程度和症状。8、它对辅助病

什么是信使RNA?

信使RNA,中文译名“信使核糖核酸”,是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。

RNA干扰的概念

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修

RNA-大量转录合成

            实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE   TE 饱和酚   氯仿

真菌RNA提取实验

实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr

RNA-沉默的概念

RNA 沉默(RNA silencing)或基因沉默(gene silencing)是广泛存在于植物、动物、线虫和真菌等真核生中的一种高度保守的、序列特异的 RNA 降解机制. RNA 沉默对于调控发育、维持基因组的稳定性以响应生物和非生物胁迫等具有重要作用.

TRIzol-RNA提取方法

            实验方法原理 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构