western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少
一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大,从1:200到1:1000都有,这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打,一般用1:5000到1:10000就可以了。......阅读全文
western-blot-一抗孵育4小时有影响吗
western blot 一抗孵育4小时当然有影响的,一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分,然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体,抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深,但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
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western-blot-二抗时间要多久
37度1h,二抗浓度不要过高,否则,背景颜色太深,还可能出现非特异条带。
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western-blot-二抗时间要多久
一般是室温下一个小时即可。也可适当长些时间!
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western-blot-一抗孵育过夜具体是指孵育多少小时
一抗孵育过夜操作方法:下班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿来孵育二抗时间8~10个小时,都行,
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