关于生物学技术—RTPCR技术的基本介绍
关于生物学技术—RT-PCR技术的基本介绍（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用，从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发夹结构的真核细胞mRNA，3种都可。......阅读全文
常用的分子生物学基本技术
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
微生物学检验基本技术(1)
第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查 由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电
微生物学检验基本技术（五）
9．脂酶试验(1)原理：细菌产生的脂酶可分解脂肪为游离脂肪酸。在培养基中加入维多利亚蓝可与脂肪结合成为无色化合物，如果脂肪被分解，则维多利亚蓝释出，呈蓝色。(2)方法：将待检菌接种于含维多利亚蓝的脂酶培养基中，置35℃孵育24h，观察结果。(3)结果：培养基变为深蓝色者为阳性，否则可呈无色或粉红色。
微生物学检验基本技术（六）
二、沉淀反应可溶性抗原(如细菌的培养滤液、含细菌的患者血清、脑脊液及组织浸出液等)与相应抗体相混合，在比例适合和适量电解质的存在等条件下，形成肉眼可见的沉淀物，称沉淀反应。利用沉淀反应进行血清学试验的方法称为沉淀试验。沉淀反应有环状、絮状和琼脂扩散法3种基本类型。1．环状沉淀试验将已知的抗血清加于内
分子生物学常用实验技术（六）
一、材料 提纯TMV 病毒液（10mg/ml）。二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE 缓冲液，无RNA 酶的双菌水。四、操作步骤1、取一eppendorf 管加入提纯
分子生物学常用实验技术（九）
第三节从动物组织提取基因组DNA一、材料 哺乳动物新鲜组织。二、设备 移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
微生物学检验基本技术(1)
随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感
微生物学检验基本技术（四）
三、碳源和氮源利用试验1．枸橼酸盐利用试验(1)原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。。(2)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。(3)结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基变蓝
微生物学检验基本技术（三）
2．葡萄糖代谢类型鉴别试验(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）
分子生物学实验诊断技术（一）
一、核酸杂交技术 检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成
微生物学检验基本技术(2)
第六节 自动化技术在微生物检验中的应用 微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。数码分类技术集数学、计算机、信息及自动化分析为一体，采用商品化和标准化的配套鉴定和抗菌药物敏感试验卡或条板，可快速准确地对临床数百种常见分离菌进行自动分析鉴定和药敏试验。目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统已在世界
分子生物学常用实验技术（十六）
（三）电泳：1、预电泳（1）当凝胶聚合完全后，拨出鲨鱼齿梳，将该梳子反过来，把有齿的一头插入凝胶中，形成加样孔。（2）立即将胶板固定在测序凝胶槽中，一般测序凝胶槽的上下槽是分开的，因而只有在固定好凝胶板后，方能加入TBE 缓冲液。（3）稀释10×TBE 缓冲液至1×TBE，将该缓冲液加入上下二个电泳
微生物学检验基本技术（一）
随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感
微生物学检验基本技术（十一）
三、自动化的血液细菌培养系统正常血液是无菌的，细菌侵入可导致菌血症、败血症、脓毒血症，及时准确地进行病原学诊断极为重要。传统的血培养是抽取5ml血液注入血培养瓶中，放入孵箱，每天观察结果，费时费力，不能及时发阳性结果，易延误诊断。全自动血液细菌培养仪主要优点是可以在较短培养时间内提示出血液培养瓶中有
分子生物学常用实验技术（八）
第五章重组质粒的连接、转化及筛选第一节概述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得
常用的分子生物学基本技术（四）
参考文献：［1］Donohoe GG et al. Clin Chem，1999，45(1)：143～146［2］Grossman PD. Nucleic Acids Res，1994，22：4527～4534［3］Barta C et al. J Chromatogr A，1998，817(1－2
分子生物学的技术有哪些原理
随着生命科学和化学的不断发展，人们对生物体的认知已经逐渐深入到微观水平。从单个的生物体到器官到组织到细胞，再从细胞结构到核酸和蛋白的分子水平，人们意识到可以通过检测分子水平的线性结构（如核酸序列），来横向比较不同物种，同物种不同个体，同个体不同细胞或不同生理（病理）状态的差异。这就为生物学和医学的各
常用的分子生物学基本技术（四）
转基因动物的建立和应用转基因动物是以实验方法交源基因导入宿主受精卵或早期胚胎细胞染色体基因组内，使其稳定整合和遗传给后代动物。它主要采用显微注射法、逆转录病毒载体感染法、精子载体法、电转移法与胚胎干细胞法。转基因动物模型的建立，推动了肿瘤在分子水平上的研究，它使人们认识到激活的原癌基因的异常表达及功
微生物分子生物学检测技术
微生物分子生物学检测技术通过对不同样品微生物DNA的提取，将提取的DNA进行扩增并识别，来确定样品中微生物的多样性和种属，具有先进性和准确性，免去了烦琐、需时长的培养过程，可检出传统方法不可培养的微生物，并能原位反映微生物群落结构的真实情况。微生物分子生物学技术的建立，突破了长期以来一直采用的传统微
分子生物学常用实验技术（page－1)
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分
微生物学技术：高压蒸汽灭菌实验
标签： 高压蒸汽 灭菌高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性
时空组学技术助力生物学和医学发展
一直以来，科学家们努力解读由30亿碱基对组成的生命“天书”。随着细胞组学向时空组学的全面突破，人们可以在时间和空间的维度上，清晰地看到身体每个细胞的全景特征，为理解基因组“天书”以及生物学和医学研究带来新机遇。8月22日，《细胞》刊发了华大生命科学研究院团队的综述文章。该文章系统阐述了时空组学技术如
微生物学的研究方法和技术
显微技术,纯种培养技术,无菌技术,纯种分离纯化技术和微生物保藏技术。显微技术(microscopy):显微技术是利用光学系统或电子光学系统设备,观察肉眼所不能分辨的微小物体形态结构及其特性的技术。包括:①各种显微镜的基本原理、操作和应用的技术;②显微镜样品的制备技术;③观察结果的记录、分析和处理的技
神经生物学|Nature：革命性新技术
现有记录设备依赖于金属丝电极，允许被植入脑内的数量有限，通常有几十个传感器，因此只能提供脑内很小范围内的详细信息。新探针拥有960个记录位点，能同时记录跨大鼠和小鼠不同脑区数百个神经元的活动，让研究人员了解大脑不同部分如何协同处理信息，帮助人类更好地理解抑郁症或阿尔兹海默症的神经回路，从而产生新
常用的分子生物学技术包括哪些
分子生物学技术：PCR、分子克隆、核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳测序、DNA， RNA 提取、转化外源DNA、体外转录、逆转录、cDNA文库构建、原位杂交、酵母双杂交、差减杂交、扣除杂交、蓝白斑筛选、抗生素筛选 、基因工程技术大部分都是依据分子生物学原理设计出来的。分子生物学的基本含义分子生物学是从分子水
英国斥资650万英镑发展合成生物学技术
近日，英国投资650万英镑刺激合成生物学发展，致力于鼓励企业开拓合成生物学新的产业应用。 合成生物学是生物科学在本世纪出现不久的一个分支学科，近年来合成生物物质的研究进展很快。与传统生物学通过解剖生命体以研究其内在构造的办法不同，合成生物学的研究方向完全是相反的，它是从最基本的要素开始
常用的分子生物学基本技术（二）
载体 所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。细菌质粒 是一种细菌染色体外小型双链环状结构的DNA，分子大小为1-20kb，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用。质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成。最常用的质粒是pBR322。噬菌体（phaeg） 噬菌体是感
常用的分子生物学基本技术1
DNA重组技术（或基因工程）是20世纪生物学的伟大成就，并已渗透到生命科学包括医学 各个领域，为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用，着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分
欧盟采用分子生物学发展育种技术
对欧盟农户而言，最大的担忧之一来自日益严重的干旱极端环境，有时甚至直接威胁到一整年的农作物收成。2003年的欧洲干旱，造成欧盟农作物产量下降30%的，损失巨大。为此，欧盟第七研发框架计划（FP7）提供900万欧元的资助，总研发投入1170万欧元，由欧盟8个成员国英国（总协调）、法国、德国、意大利
2012－Molecular－Devices“现代生物学焦点技术巡回讲座”
2012年，Molecular Devices为您准备了内容丰富的新技术讲座，无论您是做细胞学研究，还是从事药物研发和筛选工作，我们都致力于为您提供最新的技术方法和平台，帮您的研究打开新的思路，为您解决实际实验中遇到的难题。 专题一：热点技术 高内涵分析技术细胞学研究中的应用和药