关于生物学技术—RTPCR技术的基本介绍
关于生物学技术—RT-PCR技术的基本介绍（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用，从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发夹结构的真核细胞mRNA，3种都可。......阅读全文
常用的分子生物学基本技术（二）
载体 所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。细菌质粒 是一种细菌染色体外小型双链环状结构的DNA，分子大小为1-20kb，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用。质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成。最常用的质粒是pBR322。噬菌体（phaeg） 噬菌体是感
分子生物学常用实验技术（page－2)
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
常用的分子生物学技术包括哪些
分子生物学技术：PCR、分子克隆、核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳测序、DNA， RNA 提取、转化外源DNA、体外转录、逆转录、cDNA文库构建、原位杂交、酵母双杂交、差减杂交、扣除杂交、蓝白斑筛选、抗生素筛选 、基因工程技术大部分都是依据分子生物学原理设计出来的。分子生物学的基本含义分子生物学是从分子水
时空组学技术助力生物学和医学发展
一直以来，科学家们努力解读由30亿碱基对组成的生命“天书”。随着细胞组学向时空组学的全面突破，人们可以在时间和空间的维度上，清晰地看到身体每个细胞的全景特征，为理解基因组“天书”以及生物学和医学研究带来新机遇。8月22日，《细胞》刊发了华大生命科学研究院团队的综述文章。该文章系统阐述了时空组学技术如
常用的分子生物学基本技术（三）
DNA序列分析（DNA sequencing） 应用各种突变检测技术检测到的基因突变，最后都需用序列分析才能确定突变类型及突变位置，其效率可以达到100％。现在的测序方法已与经典的方法有了很大的不同，其基本原理虽仍是双脱氧终止法，但自动化程度大为提高，操作更简便，测序时间也大大缩短。随着PCR技术与
分子生物学常用实验技术（page－1)
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分
微生物学技术：高压蒸汽灭菌实验
标签： 高压蒸汽 灭菌高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性
常用的分子生物学基本技术（二）
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二
分子生物学常用实验技术（page－3)
分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN
微生物学的研究方法和技术
显微技术,纯种培养技术,无菌技术,纯种分离纯化技术和微生物保藏技术。显微技术(microscopy):显微技术是利用光学系统或电子光学系统设备,观察肉眼所不能分辨的微小物体形态结构及其特性的技术。包括:①各种显微镜的基本原理、操作和应用的技术;②显微镜样品的制备技术;③观察结果的记录、分析和处理的技
血液分子生物学检验技术及临床应用
血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性（RFLP）、转基因技术及基因芯片（DNA-chip）技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。（1）核酸分子杂交技术原理和方法1）South
分子生物学技术诊断疟原虫的方法
PCR和核酸探针已用于疟疾的诊断，分子生物学检测技术的最突出的优点是对低原虫血症检出率较高。用核酸探针检测恶性疟原虫，其敏感性可达感染红细胞内0.0001%的原虫密度。国内学者采用套式PCR技术扩增间日疟原虫 SSU rRNA基因120bp的特定片段，其敏感性达0.1原虫/μl血。
微生物学技术：细菌抗酸染色法
1、原理与应用结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，经此染色后，结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。2、材料(1)结核病人痰(2)抗酸染色液(3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。3、方法(1)取洁净的
布氏杆菌病分子生物学诊断技术
随着分子生物学的迅速发展出现了分子杂交技术，通过分析布氏杆菌的遗传物质而达到特异、敏感的检出和鉴定的目的。Russell等采用生物素标记牛布氏杆菌S19DNA作为探针来检测布氏杆菌病，对布氏杆菌属DNA进行分子杂交，其结果全部为阳性，证实有较高的灵敏度和特异性。近年来，国外学者运用PCR技术成功
高速离心机技术在生物学上的应用（二）
⑶区带转头：区带转头无离心管，主要由一个转子桶和可旋开的顶盖组成，转子桶中装有十字型隔板装置，把桶内分隔成四个或多个扇形小室，隔板内有导管，梯度液或样品液从转头中央的进液管泵入，通过这些导管分布到转子四周，转头内的隔板可保持样品带和梯度介质的稳定。沉降的样品颗粒在区带转头中的沉降情况不同于角式和外摆
PCR技术在－生态及海洋生物学的应用
对分析来说,传统分子技术所需的组织样品用量相对较多。尤其是许多无脊椎动 物,它们对于进行分子检测所用的一般操作方法来讲太小。因此,对于小生物、共生 生物或那些在培养基中不易生长的生物个体的直接分析是困难。聚合酶链反应有和来 扩大能进行分子检测的生物范围。现在可以直接研究象原生物和藻类等单细胞生物自
利用分子生物学技术研发转基因食品
利用分子生物学技术，将某些生物的基因转移到农作物中去，改造生物的遗传物质，使其在性状、营养品质、消费品质方面向人类所需要的目标转变，从而得到转基因农作物。以转基因生物为直接食品，作为原料加工生产的食品，以及喂养家畜得到的衍生食品，在广义上都可以称为转基因食品。因其安全性被广泛质疑，国际社会对其尚
基因编辑成进化发育生物学领域“杀手级”技术
提塔利克鱼模型与化石，该过渡期化石有助于解释鱼类如何开始长出四肢。图片来源：Field Museum Library/Getty Images从1893年至今，几乎在每年的夏季，年轻的发育和进化生物学者都会涌向美国马萨诸塞州伍兹霍尔，钻研业内的技术。在该校全球有名的海洋生物学实验室中，参与其年度胚胎
血液分子生物学检验技术及临床应用
血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性（RFLP）、转基因技术及基因芯片（DNA-chip）技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。 （1）核酸分子杂交技术原理和方法 1）So
Nature：CRISPR基因编辑技术助力破解重要生物学谜题
鱼类的后代变成可以在陆地上行走的动物必须发生的一个重大转变就是，要用手指和脚趾来替代长长的鳍条（fin rays）。在8月17日的《自然》（Nature）杂志上，来自芝加哥大学的科学家们证实，在鱼类中构成鳍条的细胞也在四条腿动物手指和脚趾的形成过程中发挥重要作用。 采用新型的基因编辑技术和敏感
高速离心机技术在生物学上的应用（三）
密度梯度区带离心法又可分为两种：(1)差速区带离心法：当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下，颗粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20%的沉降系数
高速离心机技术在生物学上的应用（一）
离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物学研究领域，已得到十分广泛的应用，每个生物化学和分子生物学实验室都要装备多种型式的离心机。离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备，生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心力作用，使悬浮的微小颗粒(细胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降，从而与溶
光生物学研究技术快讯：重组光合作用
美国亚利桑那州立大学生物能源与光合作用中心Kevin Redding、以色列特拉维夫大学植物科学与粮食安全学院Iftach Yacoby等科学家，在《Energy and Environmental Science》上最新发表其重要研究成果：重组光合作用：光系统I-氢酶嵌合体产生氢气（Rew
微生物学技术:PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
血液分子生物学检验技术及临床应用
血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性（RFLP）、转基因技术及基因芯片（DNA-chip）技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。（1）核酸分子杂交技术原理和方法1）South
微生物学技术：酵母细胞破碎实验
标签： 酵母 细胞 破碎细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术，是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质的基础。 结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展，以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。实验方法玻璃珠破碎法液氮破碎法实验材料酵母菌试剂、
甲醇芽孢杆菌合成生物学使能技术获进展
近日，中国科学院天津工业生物技术研究所研究团队开发了一套甲醇芽孢杆菌合成生物学使能技术：包括高效DNA电转化方法、基于热稳定CRISPR-Cas9系统的基因组编辑技术、用于基因稳定表达染色体中性位点，以及用户友好生物设计工具。团队利用该工具包解析了甲醇芽孢杆菌，质粒依赖型甲醇代谢遗传机制等基础科学问
微生物学技术：病毒的鸡胚培养
一、目的要求掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术。二、器材1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋，接种鸡的鸡胚应无母源抗体，以免影响病毒在胚胎中的增殖。实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚。2.接种材料 新城疫I系疫苗3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针
微生物学技术：紫外线灭菌实验
标签： 紫外线 灭菌紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200~300 nm 的紫外线都有杀菌能力，其中以260 nm 的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。实验方法紫外线灭菌实验方法
常用的分子生物学检验技术有哪些
分子诊断学的研究范畴包括：利用遗传学、病理学、免疫学、生物化学、基因组学、蛋白质组学和分子生物学的理论和方法探讨疾病发生和发展的分子机制。为整个疾病过程寻求特异的分子诊断指标，以及利用分子生物学技术为这些分子诊断指标建立临床实用的检测方法。