关于染色质免疫沉淀法—沉淀分析的基本介绍
沉淀分析是基于体内分析发展起来的方法,它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。它能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白,是确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的一种很好的方法。CHIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且,CHIP与其他方法的结合,扩大了其应用范围:CHIP与基因芯片相结合建立的CHIP-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选;CHIP与体内足迹法相结合,用于寻找反式因子的体内结合位点;RNA-CHIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。由此可见,随着CHIP的进一步完善,它必将会在基因表达调控研......阅读全文
基于PCR技术的染色质沉淀分析1
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locu
化学分析方法——沉淀滴定银量法
一、沉淀滴定法的定义与反应要求沉淀滴定法是以沉淀反应为基础的一种滴定分析方法。其对沉淀反应的要求有以下几点:1、沉淀反应必须迅速,并按一定的化学计量关系进行;2、生成的沉淀应具有恒定的组成,而且溶解度必须很小;3、有确定化学计量点的简单方法;4、沉淀的吸附现象不影响滴定终点的确定。二、银量法的定义、
概述重量分析法对沉淀的要求
1.对沉淀形式的要求 (1)沉淀的溶解度要小,以使沉淀反应有足够的完全度。如果沉淀不完全,就会造成分析误差。 (2)沉淀要纯净,要尽量避免杂质对沉淀的污染,以免引起测定误差,同时沉淀要易于过滤和洗涤。要得到纯净并易于过滤的沉淀。就要根据晶形沉淀和无定形沉淀的不同特点而选择适当的沉淀条件。
沉淀的粒度分析图是什么样的
C— M 图是应用每个样品的C 值和M 值绘成的图形。C 值是粒度分析资料累积曲线上颗粒含量l% 处对应的粒径, M 值是累积曲线上50 % 处对应的粒径,即粒度中值。C 值与样品中最粗颗粒的粒径相当, 代表了水动力搅动开始搬运的最大能量; M 值是中值, 代表了水动力的平均能量。对于每一个样品都可
化学分析方法——沉淀滴定银量法
一、沉淀滴定法的定义与反应要求沉淀滴定法是以沉淀反应为基础的一种滴定分析方法。其对沉淀反应的要求有以下几点:1、沉淀反应必须迅速,并按一定的化学计量关系进行;2、生成的沉淀应具有恒定的组成,而且溶解度必须很小;3、有确定化学计量点的简单方法;4、沉淀的吸附现象不影响滴定终点的确定。二、银量法的定义、
继沉淀和共沉淀的基本性质
共沉淀是一种沉淀从溶液中析出时,引起某些可溶性物质一起沉淀的现象。例如,用氯化钡沉淀硫酸钡时,若溶液中有K+、Fe3+存在,在沉淀条件下本来是可溶性的硫酸钾和硫酸铁,也会有一小部分被硫酸钡沉淀夹带下来,作为杂质混在主沉淀中。继沉淀现象共沉淀现象的区别如下:1、继沉淀引入杂质的量,随沉淀在试液中放置时
蛋白与蛋白相互作用分析—免疫共沉淀
实验原理免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合抗体Fc段的现象而开发出来的方法,是研究蛋白质相互作用的经典方法,主要用于确定两种蛋白质在完整细胞内是否存在生理性相互作用。其原理是:当
沉淀的作用
在经典的定性分析中,几乎一半以上的检出反应是沉淀反应。在定量分析中,它是重量法和沉淀滴定法的基础。沉淀反应也是常用的分离方法,既可将欲测组分分离出来,也可将其它共存的干扰组分沉淀除去。
环状沉淀试验
环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的,其方法是:先将抗血清加入内径1.5~2mm小玻管中,约装1/3高度,再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。因抗血清蛋白浓度高,比重较抗原大,所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时,在两液
沉淀重量法
一. 沉淀重量法的基本步骤 例:沉淀形式与称量形式相同 沉淀形式与称量形式不同: 二. 沉淀重量法对沉淀的要求 (一)对沉淀形式的要求 1. S 要小:溶解损失小于称量误差; 2. 沉淀要纯净; 3. 沉淀易于过滤、洗涤(尽可能生成晶型 ¯ )。
免疫共沉淀
实验概要本实验以植物叶片为试材介绍了免疫共沉淀的基本方法。主要试剂50uM雌激素,液氮,提取缓冲液TBS(50mM Tris-Cl,0.15M NaCl,pH 7.4,1mM PMSF,5mM Benzamidine),glycine-HCl,TBS,洗脱缓冲液(TBS,0.5mg/mL 3
免疫沉淀
免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。材料:上样buffer的配方(用前现配):2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.835ul distilled water2.5ul 2-mercaptoethanol12.5ul 10%SD
沉淀的滤过
滤过是使沉淀和母液分开,与过量沉淀剂、共存组分或其他杂质分离,从而得到纯净的沉淀。若后续处理需要灼烧的沉淀,用定量滤纸过滤,这种滤纸已用HCl和HF处理,大部分无机物已被除去,每张滤纸灼烧后残留灰分小于0.2mg。根据沉淀的性质,选择疏密程度不同的定量滤纸。①一般无定形沉淀,应选用疏松的快速滤纸;②
TCA沉淀方法
培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看,可以TCA沉淀浓缩后跑电泳,一般表达量大于1mg/ml可以看到明显条带,这是我用的TCA沉淀方法,效果很好:1.菌液10000g,离心5分钟,收集表达上清。2.取500-1000ul上清于EP管中,加入1/9体积的100%TCA,颠倒10次混匀。3.样品置于
尿沉淀检查
一、尿沉渣检查的内容 正常人尿中可有很少量红细胞,白细胞,上皮细胞,结晶,粘液丝,罕见有透明管型。 但如果有过多的血细胞和异常上皮细胞和管型,以及细菌,滴虫,肿瘤细胞和病毒包涵体,那就提示有肾脏及泌尿系统的疾病或损伤。 其中,管型可根据横径大小分为(1)狭窄型(为1-2个红细胞直径大小),(2
共沉淀分离法的常用沉淀剂
当沉淀从溶液中析出时,溶液中某些可溶的组分被沉淀夹带而混杂于沉淀中,这种现象称为共沉淀现象。 在称量分析中,由于共沉淀现象,使沉淀不纯,影响分析结果的准确度,应设法消除。但在分离方法中,利用共沉淀现象可以分离和富集痕量组分。例如,海水中含UO22+量为2~3ug/L,不能直接用沉淀法分离
共沉淀分离法的常用沉淀剂
当沉淀从溶液中析出时,溶液中某些可溶的组分被沉淀夹带而混杂于沉淀中,这种现象称为共沉淀现象。常用的沉淀剂又有哪些? 在称量分析中,由于共沉淀现象,使沉淀不纯,影响分析结果的准确度,应设法消除。但在分离方法中,利用共沉淀现象可以分离和富集痕量组分。例如,海水中含UO22+量为2~3ug/L,不能
提高沉淀池沉淀效果的有效途径
沉淀池是污水处理工艺中使用最广泛的一种处理构筑物,如何提高沉淀池的去处效率和减小沉淀池容积,值得研究探讨。除了可以在沉淀区增设斜板(管)提高沉淀池的分离效果和处理能力外,其他方法还有:对污水进行曝气搅动以及回流部分活性污泥等。曝气搅动是利用气泡的搅动促使污水中的悬浮颗粒相互作用,产生自然絮凝。采用这
仪器分析医用离心机沉淀不均一的原因
医用离心机的转鼓与内螺旋之间的速差是28r/min,内螺旋轴承采用脂润滑,要求每季度置换一次。但某一季度置换时,从一侧加入大量润滑脂后,却从另一侧出置换不出新脂,情况异常。通过对离心机解体检查,发现内螺旋轴承进水,机封损坏,导致润滑脂从机封漏掉。检修比较及时,防止轴承烧坏。 但是
免疫沉淀(IP)常见问题分析与解决办法
免疫沉淀(IP)常见问题分析 问题 可能原因 解决办法 高背景 吸取了不溶于去污剂中的蛋白(沉淀) 离心后立刻吸取上清,如果发生了重悬,则需要再次离心
关于染色质免疫沉淀法改变分析介绍
是研究转录调控蛋白和相应核苷酸序列结合的常用方法,但是由于许多转录调控蛋白有相似或相同的DNA结合位点,这种体外分析获取的结果不一定能真实地反映体内转录调控蛋白和DNA结合的状况。染色质免疫沉淀分析(ChIP)是基于体内分析发展起来的方法,它能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白,是确定
冷沉淀指的是什么?冷沉淀中含有什么物质?
冷沉淀指血浆的冷不溶物,是将新鲜冰冻血浆置于2~4℃融化,离心分离出的冷不溶的白色絮状沉淀而制成[医学'教育|网]。冷沉淀含有5种主要成分:①丰富的因子Ⅷ;②血管性血友病因子vWF;③纤维蛋白原;④因子XIII;④纤维结合蛋白。
蛋白质的沉淀方法及常见沉淀剂
名称 上清液 0.5ml血浆中不同沉淀剂使蛋白沉淀的% PH值 0.20.4 0.60.8 1.0 1.5 2.03.0 4.0 10%三氯醋酸 1.4-2.0 99.7 99.3 99.6 99.5 99.5 99.7 99.8 99.8 99.8 6%高氯酸
沉淀条件的选择——根据沉淀类型及纯度影响因素
(一)晶形沉淀的条件 1. 在适当稀的溶液中进行 降低 (Q-S)/S ,易得到粗晶形¯ 易洗涤、易过滤、吸附杂质量小;(但不宜过稀,否则被沉淀离子的损失量大。) 2. 在不断搅拌下进行,慢慢加入沉淀剂溶液 防止局部过浓,以免生成大量晶核。 3. 在热溶液中进行 增大 S
沉淀原的定义
中文名称沉淀原英文名称precipitinogen定 义参与沉淀反应的抗原。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)
分级沉淀的概念
【分级沉淀】当溶液中含有两种或两种以上离子时,在滴加一种共同沉淀剂时,发生沉淀有先后的现象叫作分级沉淀或分步沉淀。
什么是共沉淀?
共沉淀(coprecipitation),一种沉淀从溶液中析出时,引起某些共存的可溶性物质一起沉淀的现象。共沉淀是重量分析法误差的主要来源之一,主要原因有表面吸附,混晶,包埋等。
免疫沉淀实验
基本方案 制备抗体Sepharose 偶联物 抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原 免疫沉淀放射性标记抗原 实验材料
分步沉淀的方法
分步沉淀是指在一定条件下,使一种离子先沉淀,而其他离子在另一条件下沉淀的现象。浸铜后渣硫酸盐分离沉淀过程是按银、铜、镍的先后顺序进行析出的。因此要实现其分离,简单可行的方法是将这些金属离子转化成钠盐或碳酸盐的沉淀。
沉淀固体的分类
工业废水中的悬浮固体包括有机悬浮固体和无机悬浮固体。根据粒径及去除工艺可将悬浮固体分为: 大颗粒悬浮固体(粒径≥25mm,会影响下游水流及处理工艺运行)。 砂砾(如,砂子、砾石、金属颗粒、塑料颗粒、不完全燃烧残余物以及其他密度较大的颗粒,其沉降速度较有机物的大)。 可沉降固体(在标准英霍夫