科学家首次用克隆技术以患者DNA制造出胰岛素分泌细胞
科学家在“治疗性克隆”领域又实现突破。美国纽约研究人员使用克隆技术，以糖尿病患者的DNA首次制造出胰岛素分泌细胞，完美匹配病人的DNA。这 是继一周前公布的首次利用成人皮肤细胞克隆出干细胞后，一个月内第二次出现的克隆干细胞实验，但研究人员表示，该技术将首先以治疗为目的，服务于糖尿病患 者。 干细胞诱导分化成的胰岛素分泌细胞移植是治疗糖尿病的方法之一，但过程并不完善，一系列问题使之并未应用临床，这也是科学家们尝试以基因手段进行解决的一个原因。 据英国《自然》杂志在线版、《每日邮报》在线版4月29日（北京时间）报道，纽约干细胞基金会研究所迪特·艾格里领导了这次新研究。科学家们从一位32岁的Ⅰ型糖尿病妇女患者的皮肤细胞中，利用克隆技术产生了与她匹配的干细胞。 这项成果是在未来的移植手术中，基因完美匹配细胞移植的一个重要步骤。其将会帮助到广大的Ⅰ型糖尿病患者。该病症可出现于各个年龄段，但更多发生在 儿童和青少年间，起病急剧且患......阅读全文
基因克隆：高效感受态细胞制作
DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组实验方法原理主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使细胞膜的通透性发
我国采用体细胞克隆奶牛取得新突破
“这是采集我们育种场良种奶牛体细胞克隆出来的3头优良奶牛。”3月28日，河北天泉良种奶牛有限公司董事长李树静在克隆牛舍向记者自豪地说，这批克隆奶牛的情期受胎率和克隆牛存活率均取得新突破。 2月20日，首例体细胞克隆奶牛呱呱坠地。见证这一诞生过程的李树静告诉记者：“这批克隆牛前后3天相继出生，平
刘真：练就体细胞克隆猴技术绝活
几天前，刘真转发了一条招聘博士后的通知。“我们的设备去年底到位，年后开始调试，实验室已经开始运转了。”刘真告诉科技日报记者。 全球首例体细胞克隆猴的成功，让刘真成为猕猴体细胞克隆技术的世界“冠军”，也成为中国科学院神经科学研究所（以下简称“神经所”）最年轻的课题组负责人。 2017年底，“中
单克隆抗体细胞融合剂
细胞融合的方法有物理法，如电融合、激光融合，化学融合法和生物融合法，如仙台病毒，此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。 聚乙二醇（PEG），在分子量为200～700时，呈无色、无臭的粘稠状液体，分子量大于1 000时，呈乳白色蜡状固体，能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂，对热稳定，与许
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。实验材料
研究人员克隆出建兰开花整合基因
记者日前从中科院华南植物园获悉，该园科研人员完成的“建兰开花整合基因—CeFT基因及其应用”获国家发明ZL授权。该发明为通过基因工程改良植物生长进程、调控植物花期提供了一种有效的技术手段，具有广泛的应用前景和极大的经济价值。 据介绍，建兰是兰科兰属中的小花型地生种，为我国传统名花之一，具有
启动子克隆方法研究进展（1）
随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、
启动子克隆方法研究进展（4）
1.6 TAlL-PCR 很早就有用随机引物的PCR，但由于无法有效地控制由随机引物引发的非特异产物的产生，所以一直未能广泛应用。近年来由IJiu等设计的TAIL-PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)又叫热不对称交错PCR，则解决了这个问题，后来有研究表明，经
启动子克隆方法研究进展（5）
2 讨论 以上介绍的几种方法基本代表了现有的启动子克隆方法，它们分别具有不同的特点和适用范围。 利用启动子探针载体筛选启动子时，不需要知道具体的基因序列，避免了引物设计，并能获得大量的启动子片段；其缺点是需要构建1个穿梭质粒，建库、转化、筛选，工作量大，费时费力，而且克隆、亚克隆的过程繁琐。因此
启动子克隆方法研究进展（2）
1.3 环状PCR 环状PCR包括I-PCR(Inverse-PCR)和P-PCR(Panhandle-PCR)。这2种PCR都是根据一端已知序列设计的嵌套式引物进行PCR。 1.3.1 I-PCR I-PCR是1988年由Triglia最早提出的一种基于PCR的改进的染色体步行方法。
启动子克隆方法研究进展（3）
1.4 利用载体或接头的染色体步行技术克隆基因启动子 这类方法的第一步都是酶切基因组DNA，连接载体或接头，既可以用pUCl8等质粒载体，也可以使用λDNA等噬菌体载体，只要选用的载体带有合适的酶切位点；同样根据实验需要，接头既可以是双链也可以是单链，然后根据基因组DNA序列设计的特异引物和载体
单克隆与克隆的区别
无性增殖（分裂、生殖）叫做克隆，克隆是一个很大的范围，单克隆是指的单克隆抗体，它由融合的细胞得来。是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。“单”和“克隆”要分开看，克隆是因为它是无性增殖来的，通常是一种人工诱导的无性生殖方式或者自然的无性生殖方式（如植物）。是原来细胞的基因的
“灵长类体细胞克隆猴”科研团队先进事迹
“位于上海的中国科学院神经科学研究所孙强团队，经过5年不懈努力，突破了体细胞克隆猴的世界难题，成功培育出世界首个体细胞克隆猴。这标志着中国将率先开启以猕猴作为实验动物模型的时代。该项成果于1月25日以封面文章在线发表在生物学顶尖学术期刊《细胞》上。” 当天，《人民日报》、中央电视台等各大中央媒
基因克隆：高效感受态细胞制作（一）
方法一A液：1M，MnCl2：B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌；C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。取1
利用体细胞克隆技术保护黄牛种质资源
记者5月19日从吉林农业大学获悉，该校与河南大学合作，成功培育出2头体细胞克隆延边牛。这一成果标志着我国地方黄牛种质资源保护与高效繁育技术取得了重要突破，为濒危畜种保护提供了创新样本。 作为我国五大地方良种之一，延边牛以肉质卓越著称。然而，长期以来，繁殖效率低下一直是制约延边牛种群发展的瓶颈问
胚胎干细胞应用于生产克隆动物
ES细胞从理论上讲可以无限传代和增殖而不失去其正常的二倍体基因型和表现型，以其作为核供体进行核移植后，在短期内可获得大量基因型和表现型完全相同的个体，ES细胞与胚胎进行嵌合克隆动物，可解决哺乳动物远缘杂交的困难问题，生产珍贵的动物新种。亦可使用该项技术进行异种动物克隆，对于保护珍稀野生动物有着重要意
细胞克隆的冻存及复苏的相关介绍
为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管
简述卫星DNA在体细胞克隆方面的应用
可以把某一个体的遗传物质完整地传递下去,因而它对于保存并传播优良个体和珍稀濒危动物的基因组具有重大意义。确定异种重构胚的核是否来自于供体的核就显得异常关键。中国科学院昆明动物研究所丁波、张亚平等人建立了一种从早期囊胚中提取DNA以进行核内和核外DNA分析的方法。用这种方法从异种克隆大熊猫重构胚中
单克隆抗体的细胞融合关键介绍
1．技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2．融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个无毒无菌的操作环境。
冻干体细胞克隆小鼠可产生健康后代
日本科学家描述了一种新方法，可使用冷冻干燥体细胞克隆小鼠。该研究为遗传物质存储带来了进展。相关研究7月5日发表于《自然—通讯》。 整只动物克隆可用于保障生物多样性、挽救濒危物种。然而当下的生物样本储存方法依赖超低温存储，成本高昂而且易受断电故障等问题影响。近期进展使人们能够存储来自冻干精细胞的
基因克隆：高效感受态细胞制作（二）
4、培养后的OD值。其实这并一个非常重要的参数，只是当OD值大到一定的程度后，菌体要保持对数生长已经不太可能，因此很多指导方法上强调OD不得大于0.6，0.8等等。同时，OD值大时菌体总量大，因而感受态绝对数量要大一点，因而需要在OD值的两方面影响中找一个平衡点。5、培养基中的各种离子。经验证明，当
植物所在玉米耐旱基因克隆研究中取得进展
玉米是我国最重要的粮食作物之一，其生产常常受到干旱等自然灾害的威胁，在干旱严重的年份或区域甚至面临绝收的危险。发掘控制玉米耐旱性的遗传位点、克隆玉米耐旱基因、揭示其生物学功能的分子机理，具有重要的研究价值和应用价值。中国科学院植物研究所秦峰研究组利用全球不同地区的玉米材料组成的自然变异群体，运用
新研究克隆出提高玉米蛋白含量关键基因
巫永睿（中）团队在三亚南繁的试验田里。受访者供图■本报记者 张双虎 ■黄辛 有测算表明，普通玉米蛋白含量每提高1个百分点，相当于中国每年可以少进口近800万吨大豆。而科学家在最新的研究中，已成功将玉米蛋白含量提高了4个百分点。 11月17日，《自然》发表中科院分子植物科学卓越创
关于单克隆抗体的研究进展介绍
单克隆抗体药物的发展起源于1975年，杂交瘤技术的问世使大量制备均一的鼠源单克隆抗体成为可能。1986年第一个抗移植后免疫排斥反应的鼠源单克隆抗体muromonab-CD3(OKT3)，经美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration, FDA）批准上市，但是来
腺病毒单克隆中和抗体研究获进展
近日，我国科研人员在HAdV-55单克隆中和抗体研究方面取得新进展。相关成果发表于国际期刊《新发病原微生物与感染》（Emerging Microbes & Infections）。人腺病毒（Human adenovirus，HAdV）是呼吸道常见病原体，目前已鉴定出超过100种基因型。近年来，HAd
特殊细胞培养实验_多孔塑料培养板单细胞克隆法
实验方法原理多孔塑料培养板克隆细胞的主要过程是1. 制备出1~2 细胞/毫升低密度的细胞悬悬液；2. 向多孔塑料培养板各孔中分别接种细胞悬液0.5~1 ml，则每孔平均含1 个细胞。3. 镜下检测每孔所含细胞数，标记下含单细胞的孔，置温箱培养，数日后凡在已标记的孔中有生长增殖的细胞群即为克隆细
简述分子克隆化克隆的选择
①直接筛选：有些载体带有可辨认的遗传标记，能有效地将重组分子与本底区分。例如：有些λ噬菌体携带外源基因后形成的噬菌斑就会从原来的混浊变为清亮；还有些载体分子携带外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的颜色有明显变化，如蓝色变为无色；有些λ噬菌体能侵染甲菌而不能侵染乙菌，携带外源DNA片段后便能侵染乙菌，
单克隆抗体的克隆方法
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过
DNA克隆
DNA克隆（主要内容如下）· General Procedure· PCR Cloning· Subcloning· ET Cloning· Vector Preparation· Ligation Re
基因克隆
外源DNA和质粒载体的连接反应 外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交