华东色谱质谱会学术报告荟萃

　　第四届华东地区色谱、质谱学术报告会暨仪器展示会上，二十余位学术专家和仪器公司的技术专家做了精彩的学术报告，内容包括近两年来色谱、质谱技术研究、分析测试方法等在食品安全、环境、化工、生物医药（包括体内药物分析）、农药、农残、药残等领域的分离、分析和质量控制等方面的发展和应用等；并展示了一批国内外最新色谱、质谱分析仪器及相关产品在以上各领域的应用。以下是学术报告简要介绍。

中科院大连化学物理研究所的张玉奎院士，报告题目：蛋白质分离和鉴定的新技术新方法——从定性到定量

　　中科院大连化学物理研究所的张玉奎院士做了题为“蛋白质分离和鉴定的新技术新方法——从定性到定量”的报告。首先，张院士回顾了近年来，国内科学工作者们在蛋白质组分离鉴定中在定性分析领域取得的进展，包括：高丰度蛋白质去除、低丰度蛋白质富集、建立蛋白质分离鉴定平台、液质联用高灵敏度鉴定等方面；尤其是在2010年取得了很多新进展。比如：发展了一种通用型肽段富集材料，制备了表面固定铜离子的介孔磁性硅胶微球，可显著提高肽段的鉴定灵敏度。发展了两种方法，包括：提高分离鉴定通量的激光辅助酶解技术，磷酸化肽数据处理方法。建立了三个平台，比如：在发展高效快速蛋白质分离鉴定平台方面，建立了蛋白质多维分离－溶剂置换－在线酶解－多肽分离－质谱鉴定的高通量平台用于鼠脑蛋白质组鉴定，21 小时内鉴定出2014种蛋白质，分析通量与国际领先水平相当。还发展了高通量阵列蛋白质分离鉴定平台；建立了规模化磷酸化蛋白质组分离鉴定平台等。接下来，张院士介绍了中国和全球科学家们在蛋白质组学研究中面临的新挑战。从全球蛋白质组学发展的前一阶段里看，中国承担了整个人类蛋白质组学计划中的人类肝脏蛋白质组学全谱分析任务，目前可达到每年鉴定12000 个唯一蛋白（unique protein）的水平，处于国际领先地位。蛋白质组学发展至今，在约20344个蛋白质组成的人类蛋白质库中，已经发现了约7000个强证据、约5000个弱证据，还有8000多个没有证据需要新的技术，而这些很多是低丰度（低拷贝）的蛋白，今后5~10年的挑战将是从高拷贝到低拷贝数、从定性到定量分析。

　　在定量新技术/方法中，已经出现的包括：非标记绝对定量，如归一化定量、SRM/MRM定量；稳定同位素标记相对定量，如iCAT、iTRAQ、AACT/SILAC定量；化学衍生标记，如乙酰化/ICPL化学修饰定量、DIGE荧光标记定量等，近10年来这些定量方法均发表了大量文献，比如：酵母蛋白质组的SILAC质谱定量；化学衍生标记质谱相对定量；还有中国科学家们发表的如：O18串联酶促标记糖位点定量新方法；应用于血浆蛋白质组的基于多维色谱分离的蛋白质定量新方法；肝脏蛋白荧光标记蛋白质定量新方法；以稀土元素为质量标签的定量蛋白质组新方法等。当前最值得关注的定量方法是SRM/MRM定量技术以及SRM/MRM和其它方法结合的定量技术，最近文献对比（Natrue Biotech 2010, 78,  710-721）表明，LC-MS MRM分析策略选择性、动态范围、重复性好，定量具有明显优势。比如Nature（Nature 2009,460, 762-766.）曾介绍了一种组合定量方法，综合运用等电聚焦+液相色谱两维高效分离、MRM和质谱计数双重定量，应用于勾端螺旋体，实现了相当于83%总蛋白数的蛋白定量。因此，在2010年9月悉尼的蛋白质组组织年会（ HUPO）上，科学家们正式宣布启动人类蛋白质组计划，其中以定量技术为基础。国外目前已经发展了以Matties Mann、Matties Ulan、Redi Aebersold、John Bergeron等主流科学家参与的染色体蛋白质组计划，采用质谱为主要手段的 MRM定量技术，来建立人类基因—蛋白质—特异肽的特异肽段组数据库。中国科学家们也亟待探索和建立更多的蛋白质组学定量新技术新方法，包括利用新型分离介质、多维分离技术的高效分离手段；通过样品富集、提高仪器灵敏度来实现的高灵敏度检测；以及建立高精度定量的新方法等。

　　来自中国药科大学的盛龙生教授做了题为“代谢物鉴定的质谱仪器与技术”的报告。盛教授首先介绍了常用的LC-MS仪器及其原理，在代谢物鉴定中， 常用的与LC 联用的质谱仪器有：四极质谱仪（QMS）、三重四极质谱仪（TQMS）、四极-线性离子阱质谱仪（QTrap）、四极-飞行时间质谱仪（Q-TOFMS）、离子阱-飞行时间质谱仪（IT-TOFMS）、线性离子阱-静电场轨道离子阱（LIT-Orbitrap）等。目前， 最常用的仍然是用 TQMS ， QTrap ，但是，高分辨质谱（HRMS）的使用日益增多 ， 尤其是 Q-TOFMS 。 由于HRMS 的固有优点和硬件、 软件的发展， HRMS 很可能将成为鉴定代谢物的主要技术平台。接下来盛教授介绍了代谢物鉴定的方法。用LC/MS 鉴定代谢物通常分两个步骤：（1）在样品中发现代谢物；2）采集产物离子谱鉴定代谢物。代谢物可分为可预期的和不可预期的两类：（1）可预期的代谢物（普通代谢物）通过已知的生物转移反应生成， 这些代谢物的分子量可由母体药物预测。（2）不可预期的代谢物（非普通代谢物）系通过非常规的或一系列的生物转移反应所生成， 这些代谢物的分子量难予由母体药物预测。而在生物样品中鉴定代谢物具一定的挑战性，生物样品基质复杂，低浓度的代谢物常被内源性代谢物抑制或掩盖。随后盛教授介绍了各种LC-MS在鉴定代谢物中的具体方法和技术。其中重点介绍了：基于四极仪器（如TQMS和Qtrap）的方法技术，包括产物离子扫描、母离子扫描（PI）、中性丢失扫描（NL）等，以及新型基于Qtrap的多离子监测MIM技术；在分析方法中，主要介绍了多变量分析方法（PCA）。近年来，基于高分辨仪器（如QTOFMS）用于代谢物研究的应用日益广泛，可以应用产物离子谱研究，在方法中，可以用MDF， PIF， NLF， BGS， MFE， PCA等数据处理技术来发现不可预期的代谢物。盛教授专门介绍了新型方法如：质量差值过滤（MDF）方法；应用线性离子阱-Orbitrap及数据处理技术来检测代谢物的方法；高 -低碰撞能量切换Q-TOFMS分析代谢物的方法；分子信息提取（Molecular Feature Extract）方法等。最后介绍了统计分析和化学计量学数据分析方法。

北京大学化学与分子工程学院的刘虎威教授，报告题目：脂质组学研究的正反相二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用方法及其应用

　　来自北京大学化学与分子工程学院的刘虎威教授做了题为“脂质组学研究的正反相二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用方法及其应用”的报告。他首先介绍了磷脂研究的重要性，和磷脂代谢异常密切相关的疾病主要有动脉粥样硬化， 糖尿病， 肥胖症和帕金森综合症等疾病。比如北京大学医学院研究了一种腹膜透析的方法，对肾脏病患者是有效的治疗方式。但到目前为止，还没有对腹膜表层和透析液磷脂的分子成分做过系统的研究，因此，开发快速，准确的磷脂定性和定量方法，对腹膜表层和的腹透液磷脂进行研究，可以监测腹膜功能的变化，探寻导致腹膜结构和功能变化的机制，并可对临床治疗提供指导。国外已开展了脂质组学的相关研究，包括采用shotgun的组学研究方法、LC-MS为基础的方法等。刘教授课题组针对该课题，开发了一种接口技术进行正相色谱到反相色谱再到质谱（2D LC（NPLC/RPLC） -Q-TOF-MS ）的在线联用，获得了高效分离、高通量分析、高灵敏度检测、在线自动联用的效果。结果表明，利用该系统成功鉴定了427个标志物。

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浙江大学化学系的朱岩教授，报告题目：高效液相-离子色谱柱切换方法分析反恐爆炸物残留组分

　　来自浙江大学化学系的朱岩教授做了题为“高效液相-离子色谱柱切换方法分析反恐爆炸物残留组分”的报告。朱教授首先介绍了国际上从事反恐研究的意义，随着国际恐怖事件的不断升级和国内外形势的复杂化，各国军/警方都投入大量人力物理，建立了相应分析方法尤其是爆炸物残留的分析方法。但是爆炸物成分复杂，通常包含大量的有机物及无机物，因此需要建立一种快速、有效的方法来同时检测爆炸物残留中的有机成分及无机离子。根据美国环保局SW-846方法8330，有待分析的14种有机爆炸物主要包括硝基杂环烷、硝基苯类，无机爆炸物主要有硝基铵类、氯酸钾类爆炸物和黑火药，这些无机物离子均可以用离子色谱法分离检测。目前的反恐分析方法一般将有机成分及无机成分简单地用HPLC和离子色谱分别检测，耗时耗样，在样品含量特别少时比较困难。朱教授课题组建立了一种同时检测爆炸物中有机成分和无机离子的方法，应用高效液相色谱和离子色谱柱切换方法，40分钟内同时检测了14种有机爆炸物成分及5种无机阳离子，并获得良好的检出限、重现性和回收率。该方法主要由四步骤组成：（1）自动进样器将样品注入分析系统，在液相色谱流动相下，样品进入Acclaim Explosive E1柱，无机组分无保留，在死时间内即被冲出，有机组分得到分离；（2）无机组分冲出后，切换六通阀，由富集柱收集冲洗出的无机组分；（3）收集完全后再次切换六通阀，由离子色谱流动相冲洗富集柱，将收集到的无机离子带入离子色谱分析柱分析。

复旦大学的张祥民教授，报告题目：功能化纳米材料研究与蛋白质选择性富集分离技术

　　复旦大学的张祥民教授做了题为“功能化纳米材料研究与蛋白质选择性富集分离技术”的报告。张教授在报告中简要回顾了蛋白质组学研究的意义及复杂性，指出生物体内蛋白质种类繁多、性质复杂、数量庞大，而其中以磷酸化和糖基化修饰为代表的翻译后修饰研究，对现行的蛋白质组学研究方法和技术提出许多挑战。相对于普通材料，功能化纳米材料具有极大的比表面积和极高的表面活性。课题组针对翻译后修饰测定中蛋白质高效选择性富集方面的热点难点问题，将功能化材料与蛋白质分析结合起来，开展了一系列研究工作，发展了一些基于功能化材料的磷酸化和糖基化蛋白质组学研究新技术新方法。

　　与IMAC相比，磁性纳米新材料具有更高的选择性，并且对低pH溶液、盐类、其它低分子污染物有更高的耐受性。课题组先后研究合成了TiO₂、ZrO₂、Ga₂O₃等金属氧化物包覆的磁球，并成功用于磷酸化肽段的富集。同时还合成了Fe₃O₄@C@Ta₂O₅和Fe₃O₄@C@SnO₂磁球用于磷酸化肽段富集，展现了优越的富集选择性。课题组还研究了糖肽和糖蛋白的富集鉴定新方法。首先合成了纳米级金粒子，然后通过高温煅烧将这些纳米金颗粒烧结到MALDI-QIT-TOF-MS靶板上，再利用金和巯基之间的相互作用在这些纳米金颗粒表面修饰上巯基苯硼酸，用来选择性富集糖基化的肽或者蛋白质。进而发展了用“三明治”固定方法在硼酸纳米磁性微球表面固定了凝集素蛋白（Con A），并将其用于糖基化蛋白的分离富集。球表面直接固定Con A相比，利用上述”三明治“方法固定的Con A量提高了三倍。Con A纳米磁球、硼酸磁球和商品化的Con A磁球用来进行人肝癌细胞株7703细胞裂解液中糖蛋白的分离富集，获得了比商品化的Con A磁球更好的结果，具有制样简单、成本低、固定效率高、使用方面、亲和效率高等特点。课题组还发展了其它一些富集方法如：C60作为亲和配体的磁性低丰度富集方法，核-壳-壳结构磁性纳米材料高灵敏度检测蛋白质和肽方法，表面固定铜离子的介孔磁性硅胶微球及其选择性富集肽与高灵敏度质谱鉴定方法等。

南京大学化学化工学院生命分析化学教育部重点实验室的刘震教授，报告题目：新颖硼亲和方法及其在组学分析中的应用

　　来自南京大学化学化工学院生命分析化学教育部重点实验室的刘震教授做了题为“新颖硼亲和方法及其在组学分析中的应用”的报告，刘教授介绍了其课题组对硼亲和新材料和方法的设计思路，以及硼亲和材料在蛋白质组学和代谢组学分析中的应用。顺式二羟基生物分子，包括糖蛋白、糖肽、核苷、核苷酸、儿茶酚胺、糖类和DNA等，是一类特别的化合物，是目前蛋白质组学、代谢组学、糖组学和RNA研究等领域中的重要研究对象。对这些生物分子的选择性富集和高效分离具有重要意义。取代硼酸是一类独特的配基，能与顺式二羟基化合物在碱性条件下结合形成稳定的络合物，当介质的pH切换为酸性时，络合物解吸释放出顺式二羟基化合物。取代硼酸具有三个显著的优点：1）共价结合，亲和力强；2）可逆反应，结合/解吸过程容易控制；3）在酸性条件下解吸，解吸条件的质谱兼容性好。这些优点使得取代硼酸成为非常理想的亲和配基，特别适合于以质谱为核心的组学分析方法。刘教授课题组系统地研究了针对顺式二羟基生物分子的选择性富集和高效分离的新颖方法，发展出了一系列不同结构和性能的硼亲和整体毛细管柱、一系列不同结构和性能的硼亲和磁性纳米粒子、多种硼亲和固相微萃取探针和毛细管、以及相应的富集和分离方法。为了克服常规取代硼酸在中性pH下的亲和能力较弱的缺点，课题组原创性地提出了“团队硼亲和”的原理和两种相应的方法：开环聚合法和分子自组装方法。和常规的硼亲和性比较，团队硼亲和具有三大优点：一、一步反应，制备步骤非常简单；二、中性pH条件下亲和力大大增强；三、选择性更专一。团队硼亲和具有四个潜在的应用领域：1）蛋白质组学；2）代谢组学；3）糖组学；4）RNA研究。

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中科院大连化学物理研究所的许国旺研究员，报告题目：我们应用如何健康地生活：代谢组学研究的启示

　　中科院大连化学物理研究所的许国旺研究员做了题为“我们应用如何健康地生活：代谢组学研究的启示”的报告。许研究员介绍了代谢组学研究在糖尿病学研究中的意义。随着中国经济的快速发展和生活方式的改变，我国的疾病谱也在发生快速改变。据报道，从1985年到2000年，我国7－18岁儿童肥胖人口增加了28倍。而根据2007－2008年对来自14个省市的46239个20岁以上成年人的研究表明，糖尿病和糖尿病前期的发生率分别为9.7%和15.5%，分别达到9240万和1.428亿。糖尿病的流行给国家和人民带来了沉重的经济负担。代谢组学作为功能基因组学和系统生物学研究中不可或缺的重要组成部分，近年来在疾病、药物、植物基因功能和表型的研究等方面显示出了极大的潜力。许研究员介绍了课题组在自己实验室应用代谢组学方法开展糖尿病、糖尿病前期人群代谢特征的研究，及OGTT和运动过程中糖脂代谢等的变换，为健康的生活方式——少吃多动——提供了研究证据。比如从代谢组学的角度研究获得的结果得到了几个有趣的启示。在饮食上，要控制饮食摄入；摄入不饱和脂肪酸比饱和脂肪酸更为健康。在运动方面，揭示出运动可以消耗储存的糖原和脂肪，并研究了肉碱（尤其是中链肉碱）的作用，证明其可提高脂肪酸β-氧化能力。另外，还比较了长期坚持运动与偶尔运动之间的模型，揭示出单次运动虽可以消耗体内储存能量，但运动后肝内会补偿性储存更多的脂肪；只有长期坚持运动才能改善代谢，消除体内多余物质。还比较了过度运动与适度运动之间的模型，揭示出适度运动有益而过度运动会导致尿酸的积累，有损肝脏健康。

南京大学化学化工学院、生命分析化学教育部重点实验室的练鸿振教授，报告题目：正辛醇-水分配系数HPLC测定中的几个问题

　　来自南京大学化学化工学院、生命分析化学教育部重点实验室的练鸿振教授做了题为”正辛醇-水分配系数HPLC测定中的几个问题“的报告。练教授首先回顾了正辛醇分配系数Kow的定义，在平衡状态下，化合物在正辛醇相中的浓度与在水相中（非离解形式）的浓度的比值。Kow测定的意义不言而喻，比如可研究药物在体内的分布和转移，环境中研究物质在水相和有机相中的分布等。如何获取Kow数据呢？国际上经典的方法是摇瓶法，但该方法非常繁琐费时，也不适合疏水性大的物质。另一种计算法（比如用商业的ACD/Labs软件）不适合结构复杂的化合物，也不很准确，风险大。而传统的HPLC法虽然方法简单，但也面临准确性的挑战和适用范围。目前国际上存在计算Kow的问题为：实验数据稀缺；软件各种计算方法相差大风险大；权威国际组织或数据库推荐的数据数量很小；报道也是各取所需，报道混乱。举例来说，过去摇瓶法测定萘、联苯、DDD、DDE等物质的Kow数据，用HPLC方法要么就干脆没有，要么报道相差很大。而软件计算方法总是有风险，通行的几种软件（如Broto's Fragemtn、ACD/Labs）之间计算结果差别也较大。

　　练教授课题组发展了一种Kow的RP-HPLC（反相高效液相色谱）测定方法，具有简单快速、重现性好、所需样品量少、无需定量的优点。在这种方法中，要求将保留时间测得很准，而且需要一套模型化合物（与被测物化学结构相似，已知准确的Kow），然后建立拟合方程。对于中性化合物来说，课题组发展了“保留时间两点校正法”，即采用标准柱（柱子第一次使用时）的保留时间数据来做两点（锚点）校正，从而提高保留时间测定的准确性，从而提高Kow测定准确性。课题组已用该方法做了DDTs、PCBs（多氯联苯）的Kow测定，并通过实验法与计算值的比较，说明计算法风险随化合物疏水性增加而增加，摇瓶法只能测准到Kow在5.0以下的化合物，练教授课题组已可用建立的方法测定了Kow在7.5以下的化合物（包括疏水性强的）。对于弱离解化合物来说，环境或生命物质常常会有离解，因此测定弱离解化合物Kow意义更普遍，但难度更高。过去大家常在流动相中加入离子抑制剂，保证有合适的保留；练教授课题组将logKow  -logKw线性关系推广至以酸或碱做离子抑制剂的IS-RPLC中；考虑了弱离解化合物在流动相中的离解，并将Kow修正为Kow"（表观正辛醇分配系数），考虑了离解部分对Kow削弱的贡献，更准确地综合体现了弱离解化合物的结构特性；而且大量实验证明，logKow" － logKw比logKow－ logKw具有更好的线性相关性（注：Kw为外推至假想的纯水流动相中的保留值），并且该线性关系不受特定实验条件（如仪器、色谱柱、柱温、有机调节剂、离子抑制剂等）的影响。利用该方法举例了马兜铃酸的Kow测定，将中性和酸性化合物合并成一组模型化合物，解决了弱离解化合物标准Kow值来源困难的问题。

江南大学食品科学与技术国家重点实验室的戴军教授，报告题目：HPLC在功能性糖类分析中的应用与进展

　　来自江南大学食品科学与技术国家重点实验室的戴军教授做了题为"HPLC在功能性糖类分析中的应用与进展"的报告。戴教授介绍了功能性低聚糖及多糖研究的重要性；功能性低聚糖的分析鉴定；活性多糖的定性定量检测。多糖是当前生命科学、医药和功能食品等领域的重要的研究热点之一；HPLC作为现代分离分析技术，在多糖的研究开发和多糖类产品的质量控制中发挥着不可或缺的作用。戴教授课题组在功能性低聚糖分析鉴定中，发展了综合的HPLC方法，并进行了低聚糖的掺伪检测和LC-MS的联用分析。在活性多糖的定性定量检测方面，课题组发展了分子量分布及单糖组成分析方法、多糖的含量测定方法，并研究了指纹图谱分析及其在质量标准中的应用等。

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南京市环境监测中心站的杨丽莉研究员，报告题目：色谱技术在环境污染监测中的应用

　　来自南京市环境监测中心站的杨丽莉研究员做了题为“色谱技术在环境污染监测中的应用”的报告。杨研究员简介绍了环境和环境污染，环境污染监测的分析体系，色谱技术在环境污染监测中的应用三方面的内容。环境污染监测的特点是，环境容量大、污染物浓度低。境污染监测的分析体系包括：化学分析、光谱分析、色谱分析、生物分析法等。而色谱技术在环境监测中的应用广泛，在EPA优先控制的污染物、我国环保部优先控制的水中污染物、POPs持久性有机污染物、内分泌干扰物EDCS等影响人类健康的绝大多数污染物都是有机化合物，分子量在500以下，非常适合色谱分析。随后，杨研究员介绍了常见的色谱分析手段、针对的样品分类，并介绍了各种环境样品色谱分析前的前处理技术，联用技术，以及在线监测技术。

中国科学院上海有机所、上海质谱中心的郭寅龙研究员，报告题目：小分子化合物的质谱学研究

　　来自中国科学院上海有机所、上海质谱中心的郭寅龙研究员做了题为“小分子化合物的质谱学研究”的报告。报告主要介绍了生物小分子的质谱分析方法研究，和生物小分子的气相化学研究，以及大量的实际案例分析。在有机小分子化合物质谱分析方法研究中，介绍了：顶空结合质谱技术分析生物小分子化合物、解吸电喷雾质谱（DESI-MS）技术分析生物小分子化合物、激光解吸质谱技术分析生物小分子化合物几种方法。比较新颖的研究如：顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱联用分析香精香料；顶空结合GC-MS/MS或高分辨GCMS（GC-TOF）质谱进行高精度小分子确证；顶空-单液滴萃取（HS-LPME）以及相应的衍生化技术直接分析烟草中的挥发性碱性成分；LPME/MALDI-FTMS用于单口烟气中烟碱的定量分析、和单口烟气中小分子醛的定量分析。解吸质电喷雾谱（DESI-MS）技术分析生物小分子化合物如大蒜切片中的蒜素；衍生化解吸电喷雾电离质谱法研究蒜素和半胱氨酸作用。碳纳米管及其衍生物作为MALDI分析中基质，可以高效率分析小分子化合物，如氨基酸和中性小分子糖。基于小分子MALDI-FTMS的分析技术，可用于急性肾移植排斥反应代谢组学研究、和胆碱酯酶活性研究和拮抗剂拆选。牛奶中β-内酰胺酶类解抗剂的高通量MALDI-FTMS检测方法研究等。在生物小分子的气相化学研究中，介绍了有机小分子化合物的气相化学研究基础，和气相反应技术用于分析小分子化合物的应用。

江苏省疾病预防控制中心的刘华良研究员，报告题目：液相色谱、质谱在化妆品卫生检测中的应用

　　江苏省疾病预防控制中心的刘华良研究员做了题为“液相色谱、质谱在化妆品卫生检测中的应用”的报告。在报告中，刘研究员系统地介绍了化妆品的定义、分类、化学成分和相应的法律法规。如想很好地分析检测这类物质必须了解化妆品生产的工艺。而构成的化妆品基本原料主要包括：油溶性基质、水溶性基质、固体粉末基质、表面活性剂、胶质类原料、香精和香料、着色剂、防腐剂、抗氧化剂、功能性原料和添加剂等。在我国根据2005年统计有近5000家化妆品生产企业，其中以广东省居多（占比近一半）。中国关于化妆品卫生规范是2007年由卫生部颁布的，其中第三部分卫生化学检验方法有28项，涉及色谱检验项目12项，包括IC，GC，LC。下面举例了用色谱法测定化妆品中甲醛、甲醛释放剂、防腐剂苯氧乙醇、2-4碘代丙炔基氨基甲酸丁酯等。在用质谱检测化妆品的应用方面，性激素、激素、抗生素、丙烯酰胺、β-内酰胺等都涉及质谱方法。刘研究员也举例了以上代表性物质的分析方法。最后刘老师介绍了几点自己的体会和思考，比如做化妆品检测要先学习化妆品的制作工艺，化妆品的检验应该与生产企业合作，从方法上来看，禁用的物质用质谱，定性好，可以多组分分析、高灵敏度、快速。限用的物质用色谱，准确度更高。

江苏省食品药品检验所的袁耀佐博士，报告题目：液相色谱质谱联用技术在氨基糖苷类抗生素杂质谱研究中的应用

　　来自江苏省食品药品检验所的袁耀佐博士做了题为“液相色谱质谱联用技术在氨基糖苷类抗生素杂质谱研究中的应用”的报告。在报告中，袁博士首先简介了氨基糖苷类抗生素；然后介绍了杂质谱的概念、意义及有关规定。杂质谱 (impurity profile)是对存在于原料或制剂中已鉴定或未鉴定杂质情况的描述，通常在药物报批和药品检验中都要测定杂质谱。袁博士接下来介绍了氨基糖苷类抗生素杂质谱研究面临的挑战及对策。典型的一个问题是色谱分离与质谱检测之间的矛盾，如氨基糖类抗生素在常规反相色谱柱中不保留，通常色谱中采用多氟酸作为离子对增加保留，但多氟酸对质谱的离子化具有严重的抑制效应，文献中虽有一些对策，但很多效果有限、影响灵敏度，也仅针对某些物质。袁博士实验室目前应用宽pH范围的反相色谱柱，用高ｐＨ的流动相，增加氨基糖苷类抗生素的色谱保留，其优点为：分离度好，灵敏度高，仪器维护容易，进样浓度可以增大，成功地解决色谱分离和质谱检测之间的矛盾。目前已成功应用于依替米星、奈替米星、西索米星、小诺霉素，庆大霉素C1a等药物，但还不能分离阿米卡星和阿贝卡星。典型的第二个问题是如何鉴定或推定检出杂质的结构？实验室建立了LC-MSn鉴定有关物质结构的基本思路，进行对照品对照、特征离子诊断等方法，但鉴定还有局限性，质谱还不能完全解决结构鉴定的问题，尤其是全新的化合物。最后袁博士在展望中提到几点：1）新色谱柱填料的出现，将使分离容易、流动相简单。2）在线脱盐技术的普及，会使杂质谱研究常规化。3）高分辨质谱的普及，解谱软件的普及，使得结构分析变得简单。4）新的联用技术如LC-NMR的成熟，会使得结构分析的准确性大大提高。

江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心食品实验室、国家农兽药和蜂产品检测重点实验室的丁涛博士，报告题目：蜂蜜掺假检测技术研究

　　来自江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心食品实验室、国家农兽药和蜂产品检测重点实验室的丁涛博士，做了题为“蜂蜜掺假检测技术研究”的报告。报告指出，蜂蜜掺杂是一个日趋严重的问题。其主要原因是蜂蜜资源的有限性与急剧增加的市场需求之间的矛盾，导致蜂蜜价格一直居高不下。一些不法厂商在天然蜂蜜中掺入一些物质，制造掺杂蜂蜜，以获取高额利润。国标虽有GB18796-2005方法，但即使按照该标准检验，仍有大量造假现象；这时需要采用稳定碳同位素测定方法。1971 年， Smith 和Epstein 首先报道了植物的不同光合作用途径(特别是酶反应) 在碳稳定同位素上具有生物歧视效应，对12C 和13C 的比值产生了微小的但可检测的变异。利用这项技术，White 博士分析了500 多个来自不同国家和地区的纯正天然蜂蜜样品，也分析了大量人工制备的掺有不同比例高果糖玉米糖浆（C4植物糖）的蜂蜜样品。通过这些蜂蜜样品结果的分析统计，得出的结论是：δ¹³C 值负于 -23.15 ‰的蜂蜜是没有掺假的纯正蜂蜜；δ¹³C 值大于 -21.15 ‰的蜂蜜，假蜜的概率为99.996 %。蜂蜜中另一种重要成分是蛋白质，研究结果表明，用蜂蜜蛋白质做内标物对“灰色区”蜂蜜中掺入高果糖玉米糖浆的鉴定是行之有效的。结果分析也很简单，只要计算出蜂蜜蛋白质δ¹³C 值减去蜂蜜δ¹³C 值的差值即可，这个差值叫做ISCIRA 指数，当该指数为 -1 ‰时，蜂蜜中存在7 %的C4 糖。这个指数越负，说明蜂蜜中掺入的C4 糖越多，也就是掺入的高果糖玉米糖浆越多。

　　这时有造假者使用更为先进的掺假手段：掺入C3植物糖！这时前端接元素分析的EA-IRMS法无能无力，因为蜂蜜中的糖与C3植物糖的同位素值很接近，掺入后不会导致蜂蜜同位素值发生很大变化。最新技术发展了LC-IRMS法，将液相色谱分离技术与稳定同位素质谱技术结合起来，对蜂蜜里的各种糖利用液相色谱进行分离，再通过稳定同位素质谱测定各种糖的碳同位素比值，方法的优点是：更加灵敏，可以鉴定较低含量的掺假，可以鉴定C3植物糖的存在。新一代的造假方法是使用外源性酶，技术较高的掺假者在糖浆中加入外源性的酶，通过酶解反应将糖浆转化为果糖糖浆、葡萄糖浆、果葡糖浆，添加合称色素、蜂蜜香精、工业淀粉酶，从而获得全假蜂蜜。但纯正蜂蜜中本身没有这种外源性的酶，假蜂蜜存在外源性酶的残留。因此可使用β-呋喃果糖苷酶的检测方法：β-呋喃果糖苷酶可将棉子糖转化为蜜二糖和果糖，蜂蜜中的酶不与棉子糖发生反应。在蜂蜜中加入一定量的酶的底物（棉子糖），在一定温度下反应一段时间，通过色谱即可鉴定。