DNA片段探针的应用实验

DNA

杂交液 洗膜液

注射器 超声仪 水浴锅

1.  用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。

2.  往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸10 min。

3.  探针混合液移至冰浴，加入2 ml 杂交液Ⅰ 。

4.  用带18-G针头的注射器将探针混合液加入到杂交袋中滤膜上，重新密封后于42℃温育过夜。

5.  用约500 ml 低严紧性洗膜液Ⅰ于室温洗涤滤膜3次，每次10~15 min。

6.  再用约500 ml 高严紧性杂交液Ⅰ（预热到洗涤温度）洗涤滤膜2次，每次15~20 min。

7.  用塑料保鲜膜将湿润的滤膜包裹好，或让它贴在一塑料板上干燥后进行放射自显影。