饮料中苯甲酸钠、糖精钠含量的测定（高效液相色谱法）

　　一、目的

　　1、学习及了解高效液相色谱仪的工作原理及操作要点。

　　2、掌握高效液相色谱法测定糖精钠、苯甲酸钠的原理及方法。

　　3、学会使用高效液相色谱仪、学会以识别色谱图。

　　二、原理

　　样品加热除去二氧化碳和乙醇，调节PH至近中性后，过滤，然后经高效液相色谱仪反相色谱分离，根据保留时间和峰面积进行定性定量。

　　三、试剂

　　1.甲醇：经滤膜(0.5μm)过滤。

　　2.氨水(1＋1)：氨水与水等体积混合。

　　3.0.02mol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，加水至1000ml溶解，经滤膜10.45μm过滤。

　　4.糖精钠标准贮备液：准确称取0.0851g经120℃烘干4h后的糖精钠，加水溶解定容至100ml。此溶液糖精钠含量为1.0mg/ml。

　　5.糖精钠标准使用液：吸取糖精钠标准贮备液10.0ml于100ml容量瓶中，加水至刻度。经滤膜(0.45μm)过滤。此溶液每毫升相当于0.10mg糖精钠。

　　四、仪器和用具

　　高效液相色谱仪、紫外检测器。

　　五、测定方法

　　1、样品处理称取5.0～10.0g样品中，用氨水(1＋1)调至PH7，加水定容至适当体积，经滤膜(0.45μm)过滤，滤液用作HPLC分析。

　　2、高效液相色谱参考条件

　　1.色谱柱：YWG-C184.6mm×150mm，5μm，或其他型号C18柱。

　　2.流动相：甲醇＋乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5＋95)。

　　3.流速：1.0ml/min。

　　4.进样量：10μl。

　　5.检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2AUFS。

　　根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

　　六、结果计算

　　X＝　(3-13)

　　式中：X――样品中糖精钠的含量，g/kg(L)；

　　m1――进样体积中糖精钠的质量，mg；

　　m2――样品质量，g；

　　V1――样点稀释总体积，ml；

　　V2――进样体积，ml。