血小板衍生生长因子(PDGF)的检测方法

血小板衍生生长因子（PDGF）的检测

血小板衍生生长因子（plateletderivedgrowthfactor，PDGF）能刺激成纤维细胞、神经胶质细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞的分裂增殖，以及诱导成纤维细胞、血管平滑肌细胞、单核细胞和中性粒细胞趋化。人皮肤成纤维细胞AGl523可作为检测PDGF诱导细胞株增殖活性的靶细胞。

1．用含10％FCS的MEM培养液培养AGl523细胞，于检测前用0．25％胰蛋白酶消化生长的细胞。每个35mm培养皿中加入3X104细胞／2mL，置37~C，5％C02条件下培养养2d，洗去培养液。

2．加入系列稀释的待测样品、0．1mg／mL人血清白蛋白、0．02uCi（740Bq）3H-TdR和无血清的MCDBl05培养液，总体积为lmL，继续培养48h。

3．吸去上清液，用3～4mL 5％三氯醋酸（TCA）溶液固定细胞10min，吸去TCA并洗涤，室温自然干燥。

4．加入0．5mL含1％SDS的0．3mol／LNaOH溶解细胞15min，将溶解物转移到液体闪烁管中，加5mL闪烁液，通过p-计数仪计数cpm。约3ng／mL（0．1mmol／L）PDGF可诱导50％3H-TdR的摄人。

BALB／c 3T3细胞可作为检测PDGF促增殖作用的靶细胞，在96孔细胞培养板中进行。可采用’H-TdR掺入法或MTF法等测定增殖细胞数。但其他细胞因子对3T3细胞也有促增殖作用，可用相应的中和抗体作阻断试验。 血小板衍生生长因子（Platelet derived growth factor，PDGF）是贮存于血小板α颗粒中的一种碱性蛋白质。是低分子量促细胞分裂素。能刺激停滞于G0/G1期的成纤维细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞等多种细胞进入分裂增殖周期。血小板衍生生长因子PDGF于1974年发现的一种刺激结缔组织等组织细胞增长的肽类调节因子，因其来源于血小板而得名，正常生理状态下存在于血小板的α颗粒内，当血液凝固时由崩解的血小板释放出来并且被激活，具有刺激特定细胞趋化与促进特定细胞生长的生物活性。此外，在组织受到损伤时巨噬细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、胚胎干细胞等也可以合成并释放PDGF。肝脏受损时，巨噬细胞、血小板、浸润的炎细胞、受损的内皮细胞及激活的肝星形细胞均可以分泌PDGF。以自分泌、旁分泌的方式发挥作用。结合的PDGF是分子量为30KD的热稳定糖蛋白，是靠二硫键相连的A、B两条多肽链组合成的二聚体